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大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体在CHO细胞中的异源表达
目的:研究大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体特有5'端的特性以及可能的细胞内定位作用.方法:将β3t拼接变异体的全长Cdna克隆到真核表达载体Pegfp-N1和Pegfp-C1中,用磷酸钙共沉淀方法转染CHO细胞,表达后用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察分析,并用ConATexa s-Red标记转染后的细胞,进一步研究其在胞内的定位分布情况.结果:大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体在CHO细胞中表达时呈现两种表达类型,但均不能定位到细胞膜上,而大鼠脑β3亚基能定位分布到细胞膜上.ConA标记的结果显示β3t拼接变异体滞留在内质网上.结论:大鼠睾丸GABAA受体β3t拼接变异体N端的25aa序列中可能存在内质网滞留信号.
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Allopregnanolone与GABA在大鼠大脑的皮层细胞中对kainate诱导乳酸脱氢酶释放的不同作用
目的:观察allo pr e gn an01 on e与Y氨基丁酸(GABA)对兴奋性毒性的作用.方法:对原代培养大鼠大脑的皮层细胞,采用kainate(KA)处理,诱发兴奋性毒性.通过测定释放至细胞培养基中的乳酸盐脱氢酶(LDH)活性,观察allopregna-nolone与GABA对兴奋性毒性的作用.结果:短期或长期KA处理,均增加LDH活性的释放,其作用呈剂量依赖性,EC50值分别为(0.16+0.03)mmol/L和(0.257±0.015)mmol/L.短期(3 h)allopreg-nanolone(10-1000 nmol/L.)处理对0.2 mmol/LKA诱导的LDH活性的释放无明显影响.而长期(24 h)allopregnanolone(10-1000 nmol/L)处理抑制 KA诱导的L DH活性的释放,其作用呈剂量依赖性,EC50值为(436+19)nmol/L.短期GABA(0.1-100μmo1/L)处理,加剧KA(0.2 mmol/L)诱导的LDH活性的释放,其作用呈剂量依赖性,EC50值为(2.7±1.0)μmol/L.长期GABA处理,对KA诱导的LDH活性的释放无明显影响.结论:allopregnanolone和GABA对KA诱导的兴奋性毒性有不同作用.
关键词： 甾类 allopregnanolone 细胞培养 乳酸脱氢酶 GABAA受体 -
一种新的小鼠Gabarapl2 cDNA的克隆和鉴定
目的：克隆一个新的小鼠GABAA受体相关蛋白相似蛋白2基因(Gabarapl2)，并对其功能进行初步分析.方法：将已知的人GABARAPL2 cDNA序列为信息探针筛选GenBank小鼠EST数据库，将获得的一系列互相重叠的同源度较高的EST序列进行拼接.经过实验验证，在小鼠中分离和鉴定了新基因.自行制备小鼠RNA印迹膜，用杂交方法分析该基因在不同组织中的表达情况.结果：新基因在GenBank注册，登录号AF190644.同源比较显示，该推导蛋白与人GABARAPL2基因编码的蛋白完全相同，被基因命名委员会命名为小鼠Gabarapl2.该基因的推导蛋白含多个蛋白激酶磷酸化位点.杂交显示，该基因在脑、胸腺等组织表达较高，转录本大小约1.35 kb.结论：克隆到一个新的小鼠Gabarapl2基因.
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四氢孕酮与苯巴比妥对保护小鼠大电休克惊厥的协同作用
目的：观察四氢孕酮与苯巴比妥的抗惊厥相互作用.方法：采用小鼠大电休克惊厥(MES)试验，测定四氢孕酮和/或苯巴比妥的保护作用；并采用小鼠大脑皮质膜制备，用氚标氟硝安定检测四氢孕酮和/或苯巴比妥对GABAA受体复合物的调节.结果：苯巴比妥(0.5-50mg·kg-1)对小鼠大电休克惊厥具剂量依赖性的保护作用，其ED50为2.61 mg·kg-1，95％可信限为1.59-4.26 mg·kg-1.同样，四氢孕酮(0.01-1.0 mg·kg-1)也有剂量依赖性的保护作用，其ED50为0.11(0.06-0.18)mg·kg-1.四氢孕酮和苯巴比妥联合用药(1：20)的ED50为0.73(0.44-1.21)mg·kg-1，Q值小于1.测定四氢孕酮和/或苯巴比妥增加氚标氟硝安定的结合，其浓度效应曲线与功能性协同作用的理论曲线相符.结论：四氢孕酮和苯巴比妥对抗小鼠大电休克惊厥有协同作用；两者对增加氚标氟硝安定与GABAA受体复合物的结合也有功能性协同作用.
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GABA抑制鲫鱼视网膜双极细胞的轴突末梢和胞体内的钙信号
目的：研究GABA受体的激活对于鲫鱼视网膜ON-型双极细胞的胞体和轴突末梢内高钾引起的钙信号的影响．方法：急性分离的鲫鱼视网膜细胞经fluo-3AM孵育后，用激光共聚焦显微镜检测荧光变化．结果：GABA 100 μmol／L可以完全抑制双极细胞胞体和轴突末梢内高钾35 mmol／L引起的钙信号．仅激活GABA受体的一种亚型时，轴突末梢和胞体内出现了不同的结果．当GABAA受体或GABAc受体被单独激活时，尽管胞体内的钙信号仍旧被完全抑制，但轴突末梢的[Ca2+]i逐渐升高．GABA 10μmol／L仍旧可以完全抑制胞体内的钙信号且部分抑制轴突末梢内的钙信号．结论：激活GABAA和GABAc受体能够完全抑制鲫鱼视网膜ON-型双极细胞内高钾引起的钙信号．仅激活GABAA或GABAc受体时可以完全抑制胞体内的钙信号，而轴突末梢的[Ca2+]i逐渐升高，这可能与GABAA或GABAc受体的脱敏有关．
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表没食子儿茶素没食子酸酯抗焦虑作用研究进展
焦虑症是一种常见的精神障碍,具有长期、慢性、反复发作等特点.目前,虽有众多药物用于焦虑症的治疗,但现有抗焦虑药物均存在易依赖、起效慢等诸多缺陷.因此,寻求能够迅速改善焦虑情绪,缓解由此产生的躯体症状,且无依赖性、戒断症状及宿醉现象的抗焦虑药物成为医学界一个值得探索的方向.茶叶具有多组分共存、多靶点、多途径调节的特点,探索茶叶作为抗焦虑治疗的新途径在某种程度上具有一定的可行性.本文就焦虑症发病机制,海马与焦虑症及EGCG与焦虑症之间的关系综述如下.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 焦虑 海马 GABAA受体
