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不同剂量鱼藤酮损伤大鼠与脾气虚证大鼠海马组织cAMP/PKA信号通路变化比较
目的:比较不同剂量鱼藤酮损伤大鼠与脾气虚证大鼠海马组织cAMP/PKA信号通路的变化.方法:30只SPF级雄性大鼠,随机分为正常组,脾气虚组,鱼藤酮高、中、低剂量组(2.0、1,5、1.0mL/kg),每组6只.HE法观察各组大鼠海马形态变化,ELISA法检测各组大鼠海马组织cAMP含量,Real-time PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶(PKA)、糖原磷酸化酶(Gp)、磷酸化酶激酶(PHK)的mRNA及其表达量.结果:与正常组大鼠比较,鱼藤酮各剂量组大鼠与脾气虚证组大鼠的海马组织形态变化不明显,其cAMP含量及PKA、Gp、PHK mRNA和蛋白的表达均有不同程度的减弱,3组中鱼藤酮中剂量组的结果与脾气虚证组具有一定相似性.结论:中剂量鱼藤酮损伤大鼠海马cAMP/PKA信号通路的变化与脾气虚证大鼠之间存在关联性,脾气虚证大鼠海马cAMP/PKA信号通路的改变可能与调控代谢相关基因Gp、PKA、PHK的表达有关.
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CAMP/PKA通路在结直肠癌肝转移中的作用及机制研究
目的 构建小鼠结直肠癌肝转移模型,探讨CAMP/PKA通路在结直肠癌肝转移中的作用机制.方法 采用皮下成瘤盲肠部位包埋的方法,建立结直肠癌肝转移小鼠模型,随机分为实验组及对照组.实验组模型小鼠连续7天注射CAMP类似物,并于注射完成后7天、14天、28天处死小鼠,采用免疫组化的方法检测两组小鼠原发灶及转移灶内CAMP、PKA、VEGF的表达,采用实时定量PCR的方法检测正常组织及癌组织内MMP2、E-钙粘蛋白的表达.结果 成功建立结直肠癌肝转移小鼠模型,实验组较同期对照组原发灶变小,腹腔及肝脏转移瘤少.两组中转移灶VEGF的表达高于原发灶,癌组织中E-钙粘蛋白表达低于正常组织,MMP2高于正常组织.实验组中随着药物作用时间延长,CAMP、PKA、VEGF、MMP2的表达逐渐变弱.E-钙粘蛋白的表达逐渐升高.结论 CAMP/PKA可通过调节VEGF、E-钙粘蛋白、MMP2的表达,促进结直肠癌发生肝脏转移.
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脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路变化的实验研究
目的:观察脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路变化,探讨其信号通路变化与脾虚痰浊证的关系.方法:16只SD大鼠,每组8只,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组.全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平,ELISA法检测血浆中cAMP浓度,RT-PCR和Western blot检测肝脏GP、CREB、PKA和PHK蛋白表达水平.结果:与空白对照组相比,TG含量显著增高,主动脉cAMP活性显著降低,GP、CREB、PKA、PHK mRNA含量显著下降,GP、CREB、PKA、PHK蛋白表达显著下降.结论:脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路的改变可能与调控血脂代谢相关基因GP、CREB、PKA、PHK的表达有关.
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CRH对腹腔巨噬细胞分泌IL-10的影响及其信号机制
目的 研究促肾上腺皮质激素释放激素(corticotrophin-releasing hormone,CRH)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌白介素-10(interleukin-10,IL-10)的影响及其信号转导机制.方法 将原代培养的大鼠腹腔巨噬细胞分为正常对照组、CRH组、CP+CRH组、HL+CRH组、H89+CRH组以及PKAi+CRH组.其中正常对照组仅加入新鲜RPMI1640培养液2 ml;CRH处理组,加入含CRH终浓度为10~(-9) mol/L的培养液2 ml;后4组在分别用CRHRI选择性阻断剂CP-154526(5×10~(-4) mol/L)、CRHR1/2非选择性阻断剂α-helical CRH9-41(10~(-6)mol/L)、Ac抑制剂H89(10~(-6)mol/L)和PKA抑制剂PKAi(6-22)amide(10~(-4)mol/L)预孵育2 h后,加入含终浓度为10~(-9)mol/L的CRH培养液,再分别加入CRH(终浓度为10~(-9)mol/L)刺激.各组分别于CRH刺激后0.5、1、2、4、8 h收集培养皿中的上清液,应用ELISA方法 检测IL-10的含量.结果 正常对照组巨噬细胞分泌IL-10的含量为(29.41±3.10)μg/g.CRH组IL-10含量呈现双峰,在1、4 h达到高峰,分别为(53.15±7.98)、(46.01±1.70)μg/g,与CRH组0.5 h相比差异均非常显著(P<0.01),接近正常对照组的2倍(P<0.01).CP+CRH组与HL+CRH组IL-10含量在1、4 h均明显低于CRH组(P<0.01),并接近正常对照组水平.但在8 h时明显增加,显著高于正常对照组(P<0.05)和CRH组(P<0.05).且两组之间IL-10含量在0.5～4 h差异不显著,但在8 h时HL+CRH组显著低于CP+CRH组.H89预孵育后细胞IL-10含量在1、4、8 h显著下降,与CRH组比较差异显著(P<0.01);在4、8 h低于正常对照组水平(P<0.05).PKAi(6-22)amide预孵育细胞后,IL-10含量在0.5～8 h下降,与正常对照组以及CRH组比较差异非常显著(P<0.01).结论 CRH可通过CRHRI促进巨噬细胞分泌产生抗炎因子IL-10,其与cAMP/PKA信号通路密切相关.
关键词： 促肾上腺皮质激素释放激素 巨噬细胞 IL-10 CRHR cAMP/PKA -
H89抑制降钙素基因相关肽促兔成骨细胞OPG表达的实验研究
目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对兔成骨细胞骨保护素(OPG)表达的影响以及用特异性PKA抑制剂H89抑制cAMP/PKA信号通路后OPG表达的变化.方法:将体外培养的兔颅骨成骨细胞在使用或不使用H89预处理后,加入外源性CGRP孵育48 h,提取各组细胞mRNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察成骨细胞OPG mRNA表达强度的变化.结果:CGRP显著刺激兔成骨细胞OPG mRNA的表达,这种刺激作用在24h时达到峰值.使用H89抑制cAMP/PKA信号通路后,CGRP诱导的OPG mRNA的表达下降了约50%.结论:CGRP对骨代谢的调节作用部分是通过促进成骨细胞OPG的合成与分泌,并且这种调节作用可能是通过激活cAMP/PKA级联信号而实现的.
