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独活寄生汤对膝骨性关节炎退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA表达的影响
目的:观察独活寄生汤血清对膝骨性关节炎退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA表达的影响.方法:选择6例患者标本均来源于云南省中医医院骨科膝骨性关节炎住院患者,行手术截取的新鲜退变软骨组织,采用组织块法培养原代细胞;MTT法检测传代第一代细胞生长情况,并绘制生长曲线;制备独活寄生汤大鼠含药血清;均取传代第一代的退变软骨细胞,配制5％、10％、20％独活寄生汤含药血清及相应体积比浓度的生理盐水血清作为对照;MTT法检测不同浓度的独活寄生汤血清对退变软骨细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR检测不同给药时间点各组退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA的表达.结果:退变软骨细胞传代第一代生长曲线见传代第8天时细胞增殖达到顶峰,故选择细胞传代第8天为给药干预时间点;与含同体积比的生理盐水血清组比较,不同浓度的独活寄生汤血清可对退变软骨细胞增殖产生促进作用(P＜0.01),尤以10％独活寄生汤血清更为明显(P＜0.05);与含同体积比生理盐水血清组比较,不同时间点的5％、10％、20％独活寄生汤血清干预后的退变软骨细胞Aggrecan mRNA的表达均上调(P＜0.01),Collagen Ⅹ mRNA的表达均下调(P＜0.01),且以10％独活寄生汤血清组的作用为明显(P＜0.05).结论:独活寄生汤可能通过调节退变软骨组织的胶原及其蛋白多糖的表达而产生延缓膝骨性关节炎退变软骨组织的部分作用.
关键词： 膝骨性关节炎 退变软骨细胞 独活寄生汤 Aggrecan Collagen Ⅹ -
富硒黄芪皂苷对大鼠退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路调控机制研究
目的 观察富硒黄芪皂苷对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导退变的大鼠软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其作用机制.方法 细胞分为对照组、模型组和实验组.对照组不给予药物处理,用10 ng·mL-1的IL-1β建立体外退变软骨细胞作为模型组和实验组,实验组给予25～300 mmol·L-1富硒黄芪皂苷干预.用噻唑蓝(MTT)法观察软骨细胞的增殖情况,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察软骨细胞DKK1、WISP1、Wnt1、β-catenin和LRP5基因表达,用Western blot法观察软骨细胞DKK1、WISP1、Wnt1、β-catenin和LRP5蛋白表达.结果 对照组、模型组和100 mmol·L-1实验组的DKK1基因的表达分别为1.00±0.00,0.37±0.24,0.79±0.26;WISP1分别为1.00 ±0.00,3.13±0.33,1.35 ±0.40;Wnt1分别为1.00 ±0.00,2.01±0.07,1.45±0.33;β-catenin分别为1.00±0.00,2.38±0.30,1.32±0.17;LRP5分别为1.00±0.00,1.70±0.17,1.25±0.23.DKK1蛋白灰度值分别为0.52±0.03,0.22±0.02,0.36±0.07;WISP1分别为0.23±0.04,0.58±0.09,0.29±0.03;Wnt1分别为1.33±0.06,2.78±0.15,1.54±0.17;β-catenin分别为0.47±0.02,0.80±0.05,0.50±0.03;LRP5分别为0.87±0.13,1.31±0.16,0.66±0.03.各浓度富硒黄芪在24,48,72 h增殖能力都增强,但只有100mmol·L-1实验组在48 h差异显著,且100 mmol·L-1实验组WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5基因和蛋白表达均降低,DKK1的基因和蛋白表达均升高(P＜0.05).结论 富硒黄芪可显著增强软骨细胞的增殖活性,这种作用与Wnt/β-catenin信号通路密切相关.
