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2008-2017年鄂西北地区脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分子分型研究
目的 分析鄂西北地区2008-2017年分离到的72株脑膜炎奈瑟菌(Nm)的药物敏感性及分子分型特征. 方法 对Nm菌株进行生化鉴定和血清学分群,并采用荧光聚合酶链式反应进行基因分群,用K-B纸片和E-test检测试纸条进行药敏试验;选取部分菌株进行多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE). 结果 血清分群结果为B群14株、C群10株、W群3株、E群1株、不可分群44株.基因分群结果:B群33株、C群10株、W群3株、E群1株,其他及不可分群25株.70株Nm菌株对复方新诺明、萘啶酸、环丙沙星、米诺环素、氯霉素5种抗生素的敏感率分别为7.14％、21.43％、28.57％、98.57％和98.57％,对美罗培南、亚胺培南、阿奇霉素、头孢曲松、头孢噻肟、青霉素和利福平均敏感.17株菌株共有12种序列型别,其中12株菌株不能归入现有克隆群,其他5株属于CC4821(4株)和CC175(1株).55株菌株分为48种不同的PFGE带型,带型相同的菌株其基因群亦相同. 结论2008-2017年鄂西北地区分离的Nm菌株主要为B群;对复方新诺明、萘啶酸和环丙沙星具有较高的耐药性.MLST分型以CC4821为优势克隆.PFGE分型特征呈多态性,未出现优势带型.
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增城与广州地区乙型肝炎病毒基因分型比较研究
目的增城地区与广州地区的乙型肝炎病毒基因型的差异性比较.方法利用荧光PCR法对HBV携带者进行基因分型.结果增城地区B型占87.0%,C型占11.6%,BC混合型占1.4%,没有发现D型;广州地区B型占48.9%,C型占43.7%,BC混合型占6.5%,D型占0.9%.结论增城与广州HBV DNA基因分型存在一定差异.
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流式细胞术在高危16型和18型人乳头状瘤病毒感染诊断中的价值
目的 探讨流式细胞技术在高危16型、18型人乳头状瘤病毒(HPV)感染诊断中的临床价值.方法 选取2013年1月至2017年1月于深圳市人民医院筛查的200例女性作为研究对象,征得所有受试者知情同意后对其行流式细胞技术诊断和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断,比较两种方法的诊断价值.结果 两种诊断方法下正常者、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ期者16型和18型HPV E6蛋白阳性率差异无统计学意义(P均>0.05);流式细胞技术诊断CINⅡ期、Ⅲ期、宫颈癌者阳性率低于荧光PCR诊断,差异有统计学意义(P均<0.001).流式细胞技术诊断≥CINⅡ宫颈病变的敏感度、特异度和准确率分别为87.5％(35/40)、98.2％(157/160)和96.0％(192/200);荧光定量PCR诊断≥CINⅡ宫颈病变的敏感度、特异度和准确率分别为85.0％(34/40)、96.9％(155/160)和94.5％(189/200),差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 流式细胞技术操作简便,可有效避免样品交叉感染所致的假阳性,提高HPV感染诊断的准确性.
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11254例生殖道沙眼衣原体感染荧光PCR检测结果分析
目的 对宝安区人民医院门诊病人生殖道沙眼衣原体感染,经荧光聚合酶链式反应(PCR)检测结果进行分析,探讨其感染现状及临床检测意义.方法 采用荧光PCR方法检测11 254例患者的沙眼衣原体(CT)的脱氧核糖核酸(DNA).结果 11 254例患者标本中共检出832例阳性,总阳性率为7.39％;其中男性检测3 612例,阳性数426例,女性7 640例,阳性数406例,阳性率分别为11.79％,5.31％;男性女性发病比率差异有统计学意义(x2 =150.167,P＜0.001).沙眼衣原体阳性患者高发年龄为20～39岁,占84.86％;支原体的合并感染率为14.18％.结论 临床医生应注意临床病人多重感染的情况,应对全社会进行积极的健康的性教育与宣传,普及检测手段.
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CYP2C19基因多态性荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立检测人细胞色素氧化酶2C19(CYP2C19)基因多态性的荧光定量PCR检测方法.方法 用Primer Premier5.0和Primer Express 3.0软件针对人CYP2C19基因681和636多态性位点分别设计1对引物和2条TaqMan-MGB探针,优化建立荧光PCR反应体系.评价该方法的准确性、灵敏度和重复性.用该方法检测300例临床样本,并用测序法进行验证.结果 建立CYP2C19基因681和636位点荧光PCR检测方法,灵敏度为每个反应2 ng/g DNA.300例临床样本检测结果与测序法一致性为100％.结论 建立的CYP2C19基因多态性荧光PCR检测法准确性较高、灵敏度和重复性较好,适于临床实验研究.
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CYP2C19基因多态性检测方法的建立
目的:建立检测CYP2C19基因多态性的PCR-荧光探针法,为预测CYP2C19代谢药物的疗效提供新的检测试剂盒.方法:应用Primer Express 3.0软件针对人类CYP2C19基因CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19* 17多态性位点设计引物和探针.以经测序确认为杂合突变型、纯合突变型或野生型的人类全血基因组DNA(genomic DNA,gDNA)样本为模板,应用荧光PCR法筛选合适的引物和探针,建立和优化CYP2C19基因多态性检测荧光PCR法.然后用特定浓度且基因型已知的人类全血gDNA样本作为质控品评价该方法的准确性、灵敏度和特异性.后用100例临床样本验证该方法的临床适用性,并与直接测序结果进行比较,计算Kappa值.结果:建立的CYP2C19基因多态性检测PCR-荧光探针法,能准确地检测出CYP2C19* 2、*3和*17多态性位点杂合突变型和纯合突变型;灵敏度为每个反应体系约1 ng;以基因型已知为野生型的全血gDNA为模板进行检测的结果显示均为野生型.临床样本的检测结果显示与测序结果的一致性较好,Kappa值为1.00.结论:建立的CYP2C19基因多态性检测方法具有很好的准确性、灵敏度和特异性,且具有很好的临床适用性,可以用于CYP2C19代谢的药物疗效的预测.
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一种荧光PCR方法用于高危型HPV基因分型检测
目的:建立一种可以检测高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的荧光PCR方法,为临床宫颈癌的筛查提供新的检测试剂盒.方法:选择高危型HPV的L1区基因序列作为靶序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物和探针,建立和优化该检测方法.通过评价其准确性、灵敏度和特异性,建立一种荧光PCR方法,用于高危型HPV基因分型的检测.结果:用HPV L1基因型质控品进行检测时,该试剂盒针对高危型HPV L1基因质控品均具有较好的阳性结果;检测灵敏度约为10～100拷贝·反应体系-1;低危型HPV L1基因质控品则为阴性结果,用正常人白细胞全基因组DNA进行检测时,没有HPV特异性扩增信号出现.结论:建立的高危型HPV基因分型荧光PCR检测方法具有良好的准确性、检测灵敏度和特异性,可以用于临床官颈癌的筛查.
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BRAF基因V600E突变检测的荧光PCR方法的建立
目的:建立检测鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1 (BRAF)基因V600E突变的荧光聚合酶链式反应(PCR)方法,为黑色素瘤的药物靶向治疗提供新的基因检测方法.方法:根据BRAF基因序列V600E位点区域设计特异性的引物和探针,建立该检测方法.检测BRAF基因V600E突变的黑色素瘤临床样本、BRAF基因V600E突变质粒和正常临床样本,评价方法的准确性、灵敏度和特异性.结果:BRAF基因V600E突变的黑色素瘤临床样本在V600E检测体系中具有特异性的扩增;检测灵敏度约为101拷贝/反应;正常临床样本在V600E检测体系中没有特异性的扩增,均是V600E突变阴性.结论:建立的方法可以用于检测黑色素瘤临床样本中的BRAF基因V600E突变.
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ROS1融合基因检测方法的建立
目的:建立检测ROS1融合基因的荧光PCR法,为肺癌病人的个体化药物治疗提供新的检测试剂盒.方法:根据人类ROS1基因的外显子和融合伙伴基因的外显子序列设计引物和探针,建立ROS1融合基因的荧光PCR法.然后采用不同ROS1基因融合的假病毒质粒作为质控品,评价方法的准确性、检测限和特异性.检测350例临床样本,并与直接测序结果进行比较,评价方法的临床适用性.结果:建立的ROS1融合基因PCR-荧光探针法,能准确检测出14种不同的ROS1融合基因;检测限是不高于总量0.01 μg的RNA模板;正常人RNA的结果显示为融合突变阴性.临床样本的结果与测序结果的一致性好,Kappa值为1.00.结论:建立的ROS1融合基因检测方法具有很好的准确性、检测限和特异性,并且具有很好的临床适用性.
