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电针预处理对促排卵大鼠卵巢功能及VEGF的影响
目的:探讨电针预处理对促排卵大鼠卵巢功能的保护作用.方法:30只SD雌性大鼠按随机数字表编号,阴道涂片为动情期则为正常组,共10只,按照1:1比例与雄性SD种鼠合笼.计算机产生随机序列号将剩余雌鼠分为促排模型组和电针预处理组,每组10只.促排模型组与电针预处理组采用孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)制造超数排卵模型,电针预处理组在造模与合笼前连续7d电针“关元”“三阴交”,每次15 min,正常组与促排模型组不予其他干预.3组均于合笼后第3d晚23:00球后静脉取血,检测血浆雌二醇(E2)、孕酮(P)的浓度.脱颈处死动物,留取卵巢组织一侧用HE染色法观察形态学改变,用免疫组织化学法检测各组卵巢组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR-2的表达;另一侧采用实时定量PCR技术测定各组卵巢组织中VEGF及VEGFR-2的基因表达水平.结果:电针预处理组大鼠卵巢发育卵泡的个数多于促排模型组和正常组(均P＜0.05),单位面积内黄体面积占卵巢总面积的比值低于促排模型组(P＜0.01).电针预处理组大鼠血浆E2与P的比值趋于正常组(P＜0.05),低于促排模型组(P＜0.01);VEGF及VEGFR-2在卵巢黄体颗粒细胞及卵泡液中的蛋白表达均低于促排模型组(P＜0.05);卵巢组织中VEGF、VEGFR-2的基因水平均低于促排模型组(P＜O.05,P＜0.01).结论:电针预处理对促排卵后大鼠的卵巢功能具有一定的保护作用,其机制可能与VEGF及其相关受体参与调节有关.
关键词： 电针 超数排卵 卵巢功能 血管内皮生长因子(VEGF) -
雌性Fmr1基因敲除小鼠生殖功能的初步研究
目的 初步研究敲除Fmr1基因对动物生殖功能的影响.方法 6～8周龄雌性Fmr1基因敲除小鼠24只,分为对照组、春季超排组和冬季超排组,每组8只,进行超排,用放射免疫分析法测定超排前后血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)含量,以及不同季节的超排卵数,并进行统计学处理和分析.结果 超排后小鼠血清中P和LH含量明显增加[(24.43±13.33)比(1.60±0.46);(173.86±112.09)比(0.36±0.23),P＜0.01].与冬季(11.44±5.93)比较,春季(37.25±13.91)的超排卵数明显增加(P＜0.01).结论 雌性Fmr1基因敲除小鼠的生殖系统功能没有明显异常.与正常小鼠一样,Frm 1基因敲除小鼠机体内P和LH的分泌随动物的生理发育时期而变化.其超排效果随季节而有显著不同.
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冷藏雄鼠尸体应用于小鼠运输及意外死亡后品系恢复的可行性
目的 基于小鼠尸体4℃冷藏不同时长后精子的体外受精(IVF)效率,探讨低温冷藏小鼠尸体应用于小鼠运输及意外死亡后品系恢复的可行性.方法 实验组为5月龄C57BL/6 J雄鼠,脱颈处死后4℃冷藏24、48、72 h和96 h,取附睾尾精子IVF,对照组为正常5月龄C57BL/6 J雄鼠IVF,统计各组IVF受精率.结果 冷藏24 h后附睾尾精子具备正常受精能力,受精率为73.0％、60.0％和77.0％;48 h组内差异大,受精率为0％、55.4％和3.2％;72 h受精率极低,受精率为3.2％、0％和1.7％;96 h精子有活力,但无受精能力.所有受精卵均可发育至2细胞,冷藏24 h组和对照组分别移植受体妊娠率分别为60％和66％,证明4℃冷藏对胚胎发育无影响.结论 C57BL/6J鼠经4℃冷藏的附睾尾,在24 h内具备稳定的受精率,可用于小鼠运输及特殊情况品系恢复.
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小鼠早期胚胎不同移植方法的建立
目的 建立小鼠胚胎移植技术,探索小鼠胚胎输卵管伞部移植、输卵管剪口移植和子宫移植技术要点,为进一步将该项技术应用到生物净化等领域提供参考数据.方法 对4周龄C57BL/6雌性小鼠采用腹腔注射7.5 IUPMSG(孕马血清促性腺激素),48 h后腹腔注射7.5 IU HCG(人绒毛膜促性腺激素)进行超数排卵处理,并与C57BL/6雄鼠合笼,分别在见栓0.5d、1.5d和3.5d取出相应胚胎,对所得胚胎进行筛选,将质量较好的胚胎选出,并将相应胚胎阶段(单细胞、2细胞、囊胚)移入同期发情并经KM结扎雄鼠交配刺激后见栓的KM假孕小鼠输卵管或子宫内,待妊娠生产后得到移植小鼠.结果 对88只4周龄雌性C57BL/6小鼠进行超数排卵处理,见栓62只,共取得单细胞胚胎510枚、2细胞期胚胎400枚、囊胚35枚,采用输卵管伞部移植、输卵管剪口和子宫移植,共移植假孕母鼠43只,妊娠生产39只,产仔361只.结论 输卵管伞部移植与输卵管剪口移植比较无显著差异,输卵管伞部移植对动物伤害较小,但对术者要求较高;输卵管剪口移植操作较快捷,但对动物损伤较大;子宫移植的妊娠效果好,处于这一阶段的胚胎极易着床.
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激素剂量、小鼠品系及周龄对超数排卵的影响
目的:采用孕马血清促性腺激素(PMSG)和人促绒毛膜性腺激素(hCG)对不同品系和周龄小鼠进行超数排卵处理,比较激素(PMSG/hCG)注射剂量、小鼠品系和周龄对超排效果的影响,以便获得比较优良的超排方法.结果:1)激素剂量为PMSG(10 IU/只)+hCG(10 IU/只)的超排效果优于PMSG(5 IU/只)+hCG(5 IU/只),但无显著差异(P＞0.05);2)相同剂量时,ICR小鼠和C57BL/6J小鼠的超排效果显著优于BALB/c小鼠和FVB小鼠(P＜0.05);3)5周龄与8周龄的小鼠比较,8周龄超排效果较好,但差异不显著(P＞0.05).结论:采用10 IU PMSG+10 IU hCG的组合对8周龄的ICR、C57BL/6J进行超排处理效果相对较好.
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C57BL/6小鼠繁殖性能的观察与研究
C57BL/6纯系小鼠生殖能力较低,为提高受孕率,对其生殖性能进行了研究.结果 表明:性周期动情期的鉴定是提高小鼠受孕率的关键;自然交配的受精卵质量比超数排卵的好,产仔成活率高,但超数排卵仍是一种良好的获得更多受精卵的辅助办法;光照、温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大.
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小型猪超数排卵与胚胎回收方法的研究
目的 本试验对小型猪进行超数排卵和早期胚胎回收技术进行试验研究.研究结果如下:PG+PMSG+HCG法对断奶母猪的同期发情率达100%,优于其对非哺乳期空怀母猪的72.73%的同期发情率,但二者平均排卵数显著性差异(P<0.05);屠宰冲胚和手术法冲胚,胚胎回收率分别为84.29%和76.92%,回收率差异显著(P<0.05),但头均回收胚数无显著性差异(P>0.05).
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利用超数排卵技术进行优化 C57 BL／6 J小鼠的生物净化体系
目的：以近交系C57BL／6J小鼠为实验对象，通过注射不同剂量的孕马血清促性腺激素（ PMSG）和人绒毛膜促进腺激素（ hCG）对小鼠进行超数排卵、体外授精和胚胎移植，确定佳超排剂量，从而完善以C57BL ／6J小鼠为背景的转基因小鼠的生物净化体系。方法将5周龄的C57BL／6J雌鼠进行5 IU、10 IU、7.5 IU、15 IU四个剂量组的超数排卵，通过超数排卵与剖宫取胎、胚胎移植两种净化方法相结合，确定C57BL／6J小鼠的净化方法所需的佳剂量。结果剖宫取胎方法中，注射5 IU剂量组的C57BL／6J小鼠超排后合笼见栓率高，为（89.00±19.05）％，产仔数和见栓率与其它三组均差异不显著；胚胎移植方法中，10 IU剂量组平均卵母细胞数为30.33±0.89枚，平均体内2-细胞胚胎数为23.78±0.19枚，均显著高于其它三组。结论剖宫取胎法生物净化时，5 IU剂量组可以提高C57BL／6J小鼠的交配成功率；胚胎移植法生物净化时，10 IU剂量组可以获得多的体内和体外2-细胞胚胎，为C57BL／6J小鼠佳超排剂量。
关键词： C57BL /6J小鼠 超数排卵 胚胎移植 生物净化 -
SPF级小鼠超数排卵效果
目的 探求小鼠周龄、品系和季节对SPF级小鼠超数排卵效果的影响.方法 在春、夏、冬季对4～10周龄的SPF级BALB/c小鼠和KM小鼠进行超数排卵处理,通过见栓率、产胚率、3.5 d胚胎获得量及胚胎类型等方面进行统计学分析.结果 小鼠周龄、品系和季节对SPF级BALB/c小鼠和KM小鼠见栓率没有影响;对产胚率、3.5 d胚胎获得量和胚胎类型等方面有一定影响.结论 SPF级BALB/c小鼠宜用9、10周龄的进行超数排卵处理以供应3.5 d胚胎为需要所用,而SPF级KM小鼠使用4～10周龄的都可以;另外,SPF级小鼠超数排卵处理仍宜在春、夏季进行,可以保证获得佳的效果.
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调整精卵交汇时间提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率
目的 通过调整精卵交汇时间,提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率.方法 实验一以常规超排方法作为对照组,计算受精率;实验二验证C57BL/6J雄鼠受精能力;实验三在合笼后三个时间点检栓,确定超排鼠交配时间,计算精卵相遇时间;实验四将C57BL/6J雌鼠超排处理,停留6.5h后配雄鼠,计算受精率,比较方法改进的效果.结果 对照组取受精卵10.88枚/只;实验二取受精卵20.55枚/只,表明雄鼠的精子可以使卵子高比例受精,精子、卵子交汇时间是影响受精率的关键因素;实验三,在合笼后4h雌鼠见栓鼠多,确定对照组精卵交汇时间需7h;根据以上实验结果,实验四将合笼时间推迟6.5h,取受精卵22.27枚/只,比对照组提高了105％.结论 调整精子、卵子交汇时间可显著提高C57BL/6J小鼠超数排卵受精率.
关键词： C57BL/6J小鼠 超数排卵 精子 受精卵 -
周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响
目的 探讨不同周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响,以期确定长爪沙鼠佳超排周龄和激素使用剂量.方法 腹腔注射10 IU PMSG/HCG对4～18周龄8个年龄段的雌性长爪沙鼠进行超数排卵,末次注射16 ～ 17 h内对各组动物卵母细胞计数,确定佳超排周龄后,对该年龄动物以5、10、15 IU3个剂量水平腹腔注射PMSG/HCG,观察各组动物的卵母细胞计数差异.结果 与其它周龄组相比,6周龄组长爪沙鼠超数排卵后的卵母细胞数多,各组间有统计学意义(P＜0.05),而5、10、15IU等3个剂量组的超排效果也有一定的差异,10 IU组数量高.结论 对长爪沙鼠而言,采用10 IU激素注射和6周龄的动物进行超数排卵,获得的卵母细胞数量多而且超排效果稳定性.
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PMSG 和 hCG 诱导长爪沙鼠超数排卵方案的优化
目的：优化PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵方案。方法通过对动物周龄、激素剂量和间隔时间等系统研究，优化出用于长爪沙鼠超数排卵的佳动物周龄、激素组合剂量和间隔时间。结果对6周龄长爪沙鼠使用10单位激素计量及间隔70 h可以获得佳超数排卵效果。在合笼16 h后80％的动物得以排卵，获卵数为32.6±3.0枚／只，其中24.8±5.4枚／只可以发育至二细胞胚胎。结论本研究获得了利用PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵的优化方案，为长爪沙鼠胚胎生物技术研究奠定了基础。
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激素剂量及周龄对小鼠超数排卵的影响
目的：探讨不同剂量激素和不同周龄小鼠对超数排卵数量和囊胚率的影响，以期确定适剂量和佳周龄小鼠，获得更好的超数排卵效果。方法采用不同剂量孕马血清促性腺激素（ PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（ hCG）对不同周龄小鼠进行超数排卵，统计胚胎个数及囊胚率。结果激素剂量为PMSG与hCG各7．5 IU组的超数排卵显著多于5．0 IU组（P＜0．05），但与10．0 IU 组差异无统计学意义，激素剂量为5．0 IU组囊胚率优于7．5 IU组和10．0 IU组，差异无统计学意义；不同周龄小鼠间超数排卵效果和囊胚率有一定差异，8周龄小鼠的超数排卵数量和囊胚率均高于其他各组。结论采用PMSG与hCG各7．5 IU对8周龄小鼠进行超数排卵处理效果佳。
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转基因兔与克隆兔高效胚胎移植体系的建立
目的 建立高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植实验技术平台.方法 通过外科手术移植的方法将受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎分别移植到同步发情或异步发情的受体兔输卵管.结果 移植受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎的受体兔怀孕率分别为100%、66.67%、36.36%,产仔数分别为19、24及17只,仔兔的成活率分别为90.48%、92.31%、17.65%.出生仔兔与移植胚胎数的比率分别为43.75%、21.31%、8.54%.结论 成功建立了高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植的实验技术平台.
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树鼩超数排卵初探
研究不同的激素及其相同激素不同剂量对树鼠句超数排卵的影响.方法:将雌性树鼩分为6组,分别用不同剂量和组合的促卵泡生成激素(FSH)、那戈瑞林(GnRH)、人绝经期尿促性腺激素(HMG)和国产孕马血清促性腺激素(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)进行超数排卵实验.结果表明:PMSG 40IU+HCG20 IU组平均获卵母细胞数25.6±3.0个.明显高于其他实验组(P<0.05).结论:本实验中PMSG 40IU + HCG 20IU对雌性树鼩进行超数排卵处理可获得较好的超排效果.
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小鼠超数排卵的比较试验
为了确定适于超排的小鼠品系,对KM、NIH和C57BL/6J小鼠超排的激素剂量和注射间隔时间进行比较.KM、NIH和C57BL/6J雌鼠各40只,分别随机分为4组,用5IU或10IU的PMSG和HCG,间隔48h或72h注射,比较排出卵母细胞的数量.各品系5IUPMSG十5IUHCG剂量、间隔48h注射组超排效果好,与间隔72h注射组比较有显著差异;封闭群NIH和KM超排效果较近交系C57BL/6J好,有显著差异.结果提示:各品系小鼠超排的佳激素剂量为5IUPMSG+5IUHCG,合适的注射间隔时间为48h,封闭群小鼠较近交系小鼠超排效果好.
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SD大鼠超数排卵的优化
目的 通过对鼠龄及激素剂量的控制研究其对SD大鼠排卵的影响.方法 分别采用三种不同剂量PMSG/hCG组合(PMSG/hCG:20 IU/20 IU、25 IU/25 IU、30 IU/30 IU)对4、5、6周龄的SD大鼠进行超数排卵处理,以超数排卵总卵数、正常受精卵数、异型卵数作为评判标准,确定佳超排剂量及鼠龄.结果 20 IU剂量时,三种周龄大鼠分别获取胚胎24.72枚、33.12枚、15.22枚,其中正常受精卵:21.58枚、29.1枚、13.1枚,异型卵:2.01枚、1.01枚、2.12枚;25 IU剂量时,三种周龄大鼠分别获取胚胎37.63枚、43.62枚、20.78枚,其中正常受精卵22.67枚、38.6枚、18.5枚,异型卵:2.82枚、1.23枚、2.28枚;30 IU剂量时,三种周龄大鼠分别获取胚胎51.69枚、61.36枚、30.2枚,其中正常受精卵47.2枚、60.8枚、25.6枚,异型卵:1.23枚、0.56枚、1.3枚.结论 5周龄,激素剂量30 IU为大鼠超排的适周龄及佳激素剂量,为基因工程动物制备及胚胎冷冻实验提供技术保障.
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小鼠生物净化中的动情周期判定及超数排卵
目的 准确判定小鼠动情周期的变化,并在动情周期的不同阶段诱导超数排卵,探索佳的超排时间,以提高生物净化的成功率.方法 C57BL/6J小鼠每日08:00至13:00,取阴道脱落细胞进行涂片,观察脱落细胞中白细胞、有核细胞和角质化细胞的比例及变化的规律,确定小鼠的动情周期.据判定的动情周期的各阶段,腹腔注射外源激素分别诱导超数排卵后,于输卵管中取卵母细胞计数,并统计分析.结果 根据阴道涂片确定小鼠动情前期(包括过渡期)、动情期(Ⅰ、Ⅱ期)、动情后期和间情期.4～6周龄C57BL/6J小鼠诱导超数排卵的佳时期是动情前期,平均可获得23.20枚卵母细胞,显著高于其他实验组(P＜0.001).结论 据阴道涂片观察,C57BL/6J小鼠单个动情周期持续4～10d,动情周期内不同时间段超排效果也不同.
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动物超数排卵技术研究进展
基于哺乳动物超数排卵技术在畜牧生产、濒危动物物种保存和生物工程研究中的重要作用以及其对人类辅助生殖技术的特殊贡献,本文概述了国内外超数排卵技术中各种超排激素的用途和特点,介绍了超排技术在不同种属哺乳动物中的应用,以及此项技术新的研究进展.
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小鼠体外受精胚胎发育的研究
目的:通过对不同培养方式下促排小鼠体外受精卵发育能力的比较研究和分析,为新建生殖医学实验室培养环境质量控制提供依据.方法:在相同的培养条件和培养时间下,将获得的小鼠卵母细胞随机分为两组,体外受精后,分别以四孔培养法(群体培养)和微滴培养法(单独培养)进行培养,观察记录并计算双原核卵率、24h≥4细胞率、48h融合胚胎率以及96h囊胚率.结果:四孔培养法体外培养后24h≥4细胞数胚胎率明显高于微滴培养法,有统计学意义(P＜0.01)；48h融合胚发育率有统计学意义(P＜0.05);囊胚形成率上差异无统计学意义.结论:结果显示,四孔培养法(群体培养)更利于体外受精小鼠胚胎的发育.
