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补中益气法对甲减大鼠心肌α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响
目的:研究补中益气法对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌肌球蛋白重链α和β (myosin heavy chain alpha and beta,α-MHC和β-MHC)mRNA表达的影响.方法:将甲减Wistar大鼠随机分为模型对照组、L-T4组、补中益气汤组.实时定量RT-PCR法测心肌α-MHC和β-MHC mRNA.结果:给处理因素8周,L-T4组、补中益气汤组的α-MHCmRNA的表达分别为正常组的1.77倍、2.32倍,补中益气汤组较L-T4组上升明显(P ＜0.05);L-T4组、补中益气汤组β-MHCmRNA的表达分别为正常组的2.61倍、1.17倍,补中益气汤组下调明显(P＜0.05).结论:补中益气法在甲减心肌损伤的修复中起重要作用,其机制与其提高心肌α-MHC mRNA的表达、降低β-MHCmRNA的表达有关.
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骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞相关基因表达与形态结构发生的关联
背景:前期已完成体外定向诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验.目的:观察骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞过程中,细胞形态变化、结构发生规律与GATA-4、Nkx-2.5和a-MHC表达的关联性.方法:采用心肌组织裂解液诱导SD乳鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞,以免疫组织化学染色检测心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43表达情况,鉴定心肌细胞;在定向诱导分化过程中,RT-PCR检测GATA-4、Nkx2.5与α-MHC的表达情况.结果与结论:①细胞形态:在定向诱导过程中,细胞形态由长梭形经历短杆状、形成短小突起、网状结构、呈竹节状及肌管样结构;②心肌细胞鉴定:竹节样结构开始出现心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43阳性细胞,肌管样结构心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43阳性细胞增多;③RT-PCR检测:在定向分化过程中,细胞GATA-4、Nkx2.5与α-MHC基因表达持续增加;细胞交错连接成网状时,GATA-4表达明显增加,之后持续高表达;相邻细胞融合形成肌管样结构时,α-MHC表达达到峰值;Nkx2.5表达随诱导时间的延长逐渐增加;④结果表明:骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞过程中,心肌细胞特异基因的表达与心肌样细胞的形态特征、特殊结构发生密切相关,具有典型的时序性和空间性.
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SD大鼠乳鼠脱细胞心脏支架的细胞相容性评价
背景:脱细胞心脏支架材料具有低致敏性和天然的三维结构、具有良好的生物相容性和细胞亲和性等优点,成为心肌组织工程研究的热点.目的:探究SD大鼠乳鼠脱细胞心脏支架的细胞相容性.方法:选择第3代SD大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞与SD大鼠乳鼠脱细胞心脏支架共培养7,14 d,构建细胞-支架复合物,采用苏木精-伊红染色、扫描电镜观察骨髓间充质干细胞在支架内的生长情况.采用心肌组织裂解液对细胞-支架复合物进行定向分化诱导,连续培养14 d,以平面定向分化诱导连续培养14,20 d的骨髓间充质干细胞为对照组,采用RT-PCR方法检测骨髓间充质干细胞内肌球蛋白重链α-MHC、锌指转录因子GATA-4的表达.结果与结论:①苏木精-伊红染色显示,细胞-支架复合物中存在大量嗜碱性细胞核,细胞-支架复合物共培养14 d的细胞数量明显多于共培养7 d;扫描电镜下观察显示,共培养14 d的细胞-支架复合物纤维表面有大量细胞黏附;②平面定向分化诱导连续培养14,20 d的骨髓间充质干细胞分别呈竹节样、肌管样结构.在定向分化诱导连续培养14 d的细胞-支架复合物中可检测到α-MHC、GATA-4的表达,α-MHC、GATA-4的表达量分别与竹节样细胞和肌管样结构阶段相当;③结果表明脱细胞心脏支架的细胞相容性良好.
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扶正软坚散结法对甲减大鼠心肌α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响
目的:研究扶正软坚散结法对甲状腺功能减退大鼠心肌肌球蛋白重链α和β(简称α-MHC和β-MHC)mRNA表达的影响.方法:将甲减Wistar大鼠随机分为模型对照组、L-T4组、芪贝复元饮组.正常对照组:普通饮食,双蒸水；模型对照组:低碘饮食,双蒸水.双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法(ELISA法)测大鼠血清促甲状腺激素(TSH),放射免疫分析法(RIA法)测大鼠血清总T3(TT3)、总T4(TT4).砷铈分光光度法测定尿碘.光镜下观察心肌细胞形态.实时定量RT-PCR法测心肌组织α-MHC和β-MHC mRNA的表达.结果:56天(8周)时,与模型组比较,予处理因素的L-T4组和芪贝复元饮组大鼠血清TT3值均升高(P＜0.01),但两组之间比较无差异；血清TT4值均升高(P＜0.001),二组之间比较无差异；TSH值明显降低(P＜0.01),两组之间比较有差异(P＜0.05),芪贝复元饮组优于L-T4组.L-T4组、芪贝复元饮组的α-MHCmRNA的表达分别为正常组的1.77倍、2.03倍,与模型组比均有上升,芪贝复元饮组较L-T4组上升明显;L-T4组、芪贝复元饮组β-MHCmRNA的表达分别为正常组的2.61倍、1.22倍,与模型组比均有下调,均未降低至正常水平,芪贝复元饮组下调明显.结论:扶正软坚散结法在甲减心肌损伤的修复中起着重要的作用,与提高心肌α-MHCmRNA的表达,降低β-MHCmRNA的表达有重要的关系.
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心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的CREG蛋白表达载体的构建及鉴定
目的:构建心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)启动子启动E1A基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的真核表达载体.绿色荧光蛋白作为报告基因,方便在心肌细胞中直接观察CREG蛋白的表达,为心肌特异性转CREG基因动物模型制备提供载体.方法:用BamH I和EcoR I双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1中,构建pCREG-EGFP-Nl;根据Genebank中公布的α-MHC基因的启动子序列,人工合成pUC57-α-MHC启动子基因序列,经AseI和NheI双酶切得到启动子α-MHC,亚克隆入pCREG-EGFP-N1中替代原CMV启动子,构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1,测序鉴定.用脂质体法将该质粒转染体外培养的小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达.结果:成功构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1质粒,酶切及测序结果正确;成功转染入原代培养小鼠心肌细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达.结论:重组质粒pα-MHC-CREG-EGFP-N1体外转染入原代培养小鼠心肌细胞后,目的基因能够在心肌细胞中有效表达,检测方法简便可靠,为下一步建立心肌细胞特异性表达CREG的过表达转基因小鼠、深入探讨CREG在心肌疾病发生中的生物学功能研究奠定了基础.
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补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC基因表达的影响
目的:观察补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC基因表达的影响,探讨补肾复方逆转心肌肥厚的作用机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、卡托普利组、补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组.造模4周后,再药物干预4周.采用RT-PCR的方法检测大鼠左室心肌组织中α-MHC、β-MHC基因表达.结果:模型组大鼠左室心肌组织α-MHC mRNA表达较假手术组下降(P＜0.05),与模型组比较,卡托普利组、补肾复方大剂量组、小剂量组左室心肌组织α-MHC mRNA表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01).模型组大鼠左室心肌组织β-MHC mRNA表达较假手术组升高(P＜0.05),与模型组比较,卡托普利组、补肾复方大剂量组、小剂量组左室心肌组织β-MHC mRNA表达下降(P＜0.05).结论:补肾复方可增加α-MHC基因表达,降低β-MHC基因表达,具有逆转心肌肥厚的作用.
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压力负荷增加大鼠模型心肌α-MHC和β-MHC mRNA的表达
目的:肌球蛋白重链(α-MHC)基因与心肌肥厚的关系在分子遗传学水平的研究多有报道.文中观察压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC mRNA表达的变化,探讨腹主动脉缩窄法致压力负荷增加大鼠模型心肌肥厚的机制. 方法:SD大鼠随机分为假手术组和模型组,利用腹主动脉缩窄法制备压力负荷增加大鼠模型,造模8周后观察左心室质量指数、左心室心肌细胞超微结构的改变;采用RT-PCR的方法检测心肌组织中α-MHC、β-MHC基因表达. 结果:模型组左心室心肌质量指数较假手术组显著升高(P<0.05),电镜切片显示线粒体变性,肌浆网扩张;肌原纤维变性,模型组左心室心肌组织α-MHC mRNA表达较假手术组下降(P<0.05),左心室心肌组织β-MHC mRNA表达较假手术组升高(P<0.05). 结论:压力负荷增加大鼠在造模8周形成左心室肥厚的病理生理改变,且这种改变可能通过心肌α-MHC向β-MHC转化来实现.
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血府逐瘀汤含药血清对MSC分化过程中α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响
目的:探讨中药复方血府逐瘀汤含药血清体外诱导骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化的情况,为MSC移植治疗缺血性心脏病提供安全有效的种子细胞.方法:分离培养Wistar大鼠MSC,用血府逐瘀汤含药血清诱导后,RT-PCR技术检测诱导后的MSC心肌细胞标志物α-MHC、β-MHG的表达.结果:MSC经过血府逐瘀汤含药血清体外诱导后,细胞中有心肌细胞标志物α-MHC、β-MHC的表达.结论:中药复方血府逐瘀汤含药血清可以体外诱导大鼠MSC分化为心肌样细胞.
