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大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E2表达的影响
目的 研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞前列腺素E2(PGE2)表达的影响,从而探讨其降眼压机制.方法 采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养,取传3代的细胞运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后细胞上清液中PGE2水平的变化;运用RT-PCR方法检测不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后PGE2 mRNA在小梁细胞内的表达水平.结果 细胞上清液中的PGE2水平与细胞内PGE2 mRNA水平随大麻素浓度变化呈剂量依赖性升高.结论 一定剂量的大麻素可以促进小梁细胞分泌PGE2,从而达到降低眼压的目的.
关键词： 大麻素WIN55 212-2 小梁细胞 前列腺素E2 前列腺素E2mRNA -
WIN 55,212-2重复预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨大麻素受体激动剂WIN 55,212-2重复预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组(n=10):对照组和二甲基亚砜(DMSO)组分别腹腔注射生理盐水和DMSO 0.3ml,1次/d,连续5d;WIN55,212-2预处理组(包括WIN 1、WIN 3、WIN 5组)分别腹腔注射、WIN 55,212-2 1mg/kg,1次/d,重复给予1、3、5d.各组动物均在后1次预处理后24h采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立短暂局灶性脑缺血模型,分别在MCAO后24、48、72h进行神经功能评分(NFS),并取脑组织切片行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,计算脑梗死容积百分比.结果 WIN 55,212-2预处理组(WIN 1、WIN3、WIN 5组)大鼠MCAO后24、48、72h的NFS明显高于DMSO组和对照组(P＜0.05),脑梗死容积百分比明显低于DMSO组和对照组(P＜0.05).WIN 5组大鼠MFS明显高于脑梗死容积百分比明显低于WIN 1组和WIN 3组(P＜0.05),而WIN 1组与WIN 3组的NFS和脑梗死容积百分比均无显著性差异(P＞0.05).结论 随着、WIN 55,212-2预处理次数的增加,其脑保护作用有所增强.
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大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响
目的 研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及LTlMP-1表达的影响,从而探讨其降眼压机制.方法 采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法(NSE,Ⅷ因子相关抗原染色)鉴定细胞,应用透射电镜对细胞进行形态学及生长特性观察;对传3代的小梁细胞分别施加含大麻素WIN55,212-2终浓度为0(对照组)、1、10、20、40μmol/L的培养液,48h后行MMP-3和MMP-9免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验.提取上清液用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化.结果 体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP-3及MMP-9,大麻素WIN55,212-2可促进MMP-3及MMP-9的表达,并抑制TIMP-1的表达.结论 一定剂量的大麻素可以促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达(P<0.05),并抑制TIMP-1的表达(P<0.01),从而达到降低眼压的目的.
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大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞cAMP表达的影响
目的 通过研究大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞(BTMC)环腺苷酸(cAMP)表达的影响,探讨其增加房水排出而降低眼压的机制.方法 对BTMC进行体外原代培养及传代培养,应用免疫组化的方法鉴定细胞.然后用不同浓度的WIN55,212-2作用于BTMC,放射免疫法检测细胞上清液中cAMP的水平.结果 WIN55,212-2浓度在0.1-20μmol/L范围内,培养液中cAMP水平随浓度增加而显著性升高,若WIN55,212-2浓度继续增高(40-60μmol/L),cAMP水平不再升高.结论 WIN55,212-2可能通过提高BTMC内cAMP水平而起到降低眼压的作用.
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非选择性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平改善及预后的影响
目的 明确非选择性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平及预后的影响,探讨可能的机制.方法 30只SD大鼠分别诱导室颤,持续6min后开始机械胸外心脏按压,8 min后进行电除颤.成功复苏后30 min,动物被随机分为3组:①药物处理+正常温度组(WIN+Normo);②药物处理组(WIN);③对照组.药物组与对照组分别给予WIN55,212-2和生理盐水,按照1.0 mg/(kg·h)速率静脉滴注给药.所有动物的环境温度均保持相同,药物处理+正常温度组采用一个额外的加热灯泡使得该组和对照组体温维持在(37±0.2)℃.监测复苏后4h各组大鼠白细胞介素-6(IL-6)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,并记录复苏后72 h各组动物的存活情况.结果 药物处理组大鼠IL-6(98.40±8.80) pg/mL以及TNF-α (40.36±9.21)pg/mL的水平较对照组[(120.30±15.20) pg/mL和(68.29±9.58) pg/mL]及药物处理+正常温度组[(118.50±16.60)pg/mL和(64.33±l0.19)pg/mL]明显下降,大鼠神经系统缺陷评分(NDS)及存活率较另外两组明显升高(P＜0.05).结论 在大鼠心肺复苏模型中,静脉注射WIN55,212-2能够降低IL-6与TNF-α的水平,并改善复苏后NDS和72 h存活率.但当该药物产生的低温作用消失时,其对于大鼠体内炎症因子及预后的影响也随之明显减弱.故WIN55,212-2所致的心肺复苏后保护作用可能与其产生的降温作用有关.
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大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究
目的 探讨大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制.方法 将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂WIN用药组.CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达.结果 与对照组相比较,5、10、20μmol/L的WIN处理K562细胞24、48 h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡.流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高.WIN处理24h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加(P＜0.05).Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降.结论 大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降,激活Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现.
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大麻素受体激动剂WIN55,212-2抑制脑缺血再灌后胶质瘢痕的形成
脑缺血再灌注后出现的胶质瘢痕,主要是由增殖的激活星形胶质细胞构成.研究证实胶质瘢痕不利于神经再生,由其构成的物理化学性屏障一方面会阻碍轴突再生,另一方面由激活星形胶质细胞产生的神经发育抑制因子也会阻碍中枢神经系统功能的恢复.研究表明内源性大麻素对星形胶质细胞增殖具有调控作用.为研究脑缺血再灌注损伤后外源性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对胶质瘢痕的影响,本文使用大鼠中动脉闭塞模型,通过免疫组织化学法对样本中的激活星形胶质细胞标记物Vimentin、星形胶质细胞标记物GFAP、硫酸软骨素蛋白聚糖标记物Neurocan、以及Notch-1信号通路配体Jagged-1分子的表达进行检测.为研究药物的作用靶点,本文联合使用了大麻素Ⅰ型受体拮抗剂rimonabant.结果表明:WIN55,212-2在大麻素Ⅰ型受体的介导下,通过减少星形胶质细胞的增殖,显著降低激活星形胶质细胞上Jagged-1的表达水平,抑制了胶质瘢痕的形成.
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WIN55,212-2对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响
目的 探讨大麻素WIN55,212-2(WIN)对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究.方法 将细胞分成对照组和WIN处理组,处理细胞后,利用MTT法分析WIN对BEL-7402细胞增殖的影响;DAPI染色分析各组细胞中细胞核的形态学改变;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率;利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测WIN处理细胞后Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3、-8和-9的活性.结果 WIN抑制了BEL-7402细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理细胞后,Caspase-3、-8和-9活性总体上呈时间依赖性升高,而且Bcl-2蛋白表达下降.结论 WIN能抑制BEL-7402细胞增殖和诱导其凋亡,WIN诱导的BEL-7402细胞凋亡可能与线粒体途径和死亡受体途径都有关.这些结果为应用WIN来治疗肝癌奠定了一个基础.
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大麻素对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸激活电流的抑制作用
目的 探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用.方法 采用全细胞膜片钳技术.结果 ①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10～1 000 μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断.②预加WIN55,212-2(0.03～10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性.WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85 μmol/L vs 25.76μmol/L).③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断.细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用.结论 大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一.
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WIN 55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元胞内游离钙离子浓度的影响
目的检测WIN 55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其机制.方法以Fura-2/AM为钙探针,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca2+]i的变化.结果WIN 55,212-2(0.01～10 μmol/L)可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca2+]i,EC50为0.47 μmol/L;用大麻素1型受体(CB1受体)阻断剂AM251孵育后,发现10 μmol/L的AM251可明显抑制10 μmol/LWIN 55,212-2对三叉神经节神经元细胞内[Ca2+]i的作用(P＜0.01).结论WIN 55,212-2可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca2+]i,该作用可能是由CB1受体所介导.
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大麻素WIN55,212-2对裸小鼠肝癌移植瘤及PPARγ表达的影响
目的：：探讨大麻素WIN55,212-2( WIN)对裸小鼠肝癌移植瘤及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、c-myc表达的影响。方法：采用5 mg/kg的WIN对荷瘤裸小鼠进行瘤周皮下注射干预15 d,每3天测量1次瘤体体重和体积,计算肿瘤体积和抑瘤率。荧光定量PCR和Western blotting测定HepG2移植瘤中PPARγ和c-myc的表达情况。结果：WIN对HepG2细胞移植瘤具有抑制作用,抑瘤率为66.00%,荧光定量PCR结果显示WIN抑制HepG2细胞移植瘤c-myc在mRNA水平的表达,促进HepG2细胞移植瘤PPARγ在mRNA水平表达。 Western blotting结果显示WIN抑制HepG2细胞移植瘤c-myc在蛋白水平的表达,促进HepG2细胞移植瘤PPARγ在蛋白水平表达。结论：WIN能够抑制HepG2细胞移植瘤的生长和c-myc的表达,并上调PPARγ的表达。
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大麻素受体激动剂WIN55,212-2联合金诺芬对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响
目的 探讨大麻素受体激动剂WIN55,212-2(WIN)联合金诺芬(AF)对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究.方法 分别用5 μmol/L WIN、0.25 μmol/L AF、5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF处理HepG2细胞24h和48 h后,MTS法检测细胞活力;采用AnnexinV-FITC和PI双染色法并通过流式细胞仪分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bip、ATF4、PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)表达的变化.分别用5μmol/L WIN联合0.25 μmol/L AF、Z-VAD-FMK以及Z-VAD-FMK预处理1h后再用5 μmol/L WIN联合0.25 μmol/L AF处理HepG2细胞24 h,Western blot检测蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的变化.结果 与两药单独使用相比,WIN联合AF明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,可以引起Bcl-2蛋白表达水平下调,内质网应激反应相关蛋白Bip、ATF4蛋白表达水平上调,以及活化Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9,引起PARP蛋白的切割.加入Caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK处理细胞后,能部分逆转联合用药的细胞凋亡比例.结论 大麻素受体激动剂WIN联合AF能有效诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调、内质网应激反应和Caspase系统活化相关.
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大麻素WIN55,212-2抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移
目的 研究大麻素WIN55,212-2(WIN)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制.方法 应用CCK-8法分析(0、1、5、10、20) μmol/L WIN对SMMC-7721细胞活力的影响;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察各组细胞形态改变;异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白P53、P21、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达;采用TranswellTM侵袭实验及划痕实验检测细胞侵袭、迁移的能力,Western blot法检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白水平.结果 WIN抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理后的细胞,经Hoechst3258染色,可发现细胞核浓缩、破碎,引起明显细胞凋亡;凋亡相关蛋白P53、P21、Bax激活,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降;AKT、p-AKT、p-ERK水平下降,而ERK总蛋白无明显变化;与对照组比较,WIN处理后的SMMC-7721细胞侵袭和迁移的能力均显著降低,MMP-14蛋白水平也下降.结论 WIN能抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导其凋亡,与WIN激活P53,抑制AKT、p-AKT、p-ERK表达有关.WIN通过下调MMP-14蛋白水平,抑制SMMC-7721细胞侵袭和迁移.
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非选择性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对慢性青光眼兔模型玻璃体谷氨酸浓度的影响
目的:探讨大麻素(WIN55,212-2)点眼治疗是否可以抑制慢性青光眼兔模型玻璃体谷氨酸浓度的增高.方法:家兔15只随机分为正常对照组,高眼压组和大麻素治疗组每组均5只10眼.除正常对照组以外均予前房注射复方卡波姆制成慢性青光眼模型.成功造模4d后,高眼压组用生理盐水点眼,大麻素治疗组用1.25g/L的大麻素滴眼液点眼.治疗4wk后取材,检测玻璃体谷氨酸浓度.结果:高眼压组的玻璃体谷氨酸浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义(高眼压组 vs 正常对照组,P<0.05),大麻素治疗组与正常对照组比较差异无统计学意义(大麻素治疗组 vs 正常对照组,P>0.05).结论:局部应用WIN55,212-2可以使慢性青光眼兔模型玻璃体谷氨酸浓度降低.
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WIN 55,22-2对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨大麻素(CB)受体激动剂WIN 55,212-2对大鼠局灶性脑缺血的保护作用.方法:采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型.将50只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(Con组)于MCAO前30 min腹腔注射生理盐水0.3 ml;WIN55,212-2组(WIN1～3组)于MCAO前30 min腹腔注射WIN55,212-2 0.3, 1和3 mg/kg;DMSO组于MCAO前30 min腹腔注射二甲基亚砜(DMSO) 0.3 ml.观察MCAO120 min再灌注24 h后神经功能评分(NFS)和脑梗死容积百分比.结果:与DMSO组和Con组比较,WIN 55,212-2组大鼠NFS明显升高 (P＜0.05),脑梗死容积百分比明显减小 (P＜0.05).结论:CB受体激动剂WIN 55,212-2对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,并具有一定的剂量相关性.
