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运用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型
目的:探讨利用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型的可行性.方法:用酚/氯仿法从39例O型血孕妇(孕36～40+3周)且孕男性胎儿的血浆中提取胎儿DNA,巢式PCR扩增血浆中的SRY基因证实胎儿DNA存在,再用特异性序列-聚合酶链反应(SSP-PCR)检测胎儿ABO血型.用常规血清学方法测母体及新生儿血型.结果:10例孕A型血胎儿的孕妇血浆中扩增出A基因8例,6例孕B型血胎儿的孕妇血浆中扩增出B基因6例,23例孕O型血胎儿扩增出O基因而无A或B基因21例,准确性和敏感性分别为89.7%(35/39)和87.5%(14/16).结论:利用孕妇外周血中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型可行,对诊断和预防新生儿ABO血型不合性溶血病的发生具有积极意义.
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母血中胎儿游离核酸检测在诊断胎儿非整倍体中的应用
胎儿染色体非整倍体是常见且严重的染色体异常类出生缺陷.目前常用的侵入性检查方式因存在诸多弊端而被部分孕妇拒绝.在过去的15年中,母体血浆中胎儿游离核酸的研究进展使得无创性产前诊断胎儿非整倍体成为可能.而近胎儿与母体表观遗传学差异及胎儿特异性RNA的发现使得这项技术摆脱了胎儿性别的限制.随着数字PCR及大规模平行测序等新技术的运用,胎儿非整倍体检测的敏感性和特异性得到了提高.本文综述了无创性产前诊断胎儿非整倍体的研究进展,并讨论了其临床应用的可行性.
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两种胎儿特异性mRNA在母血中的表达研究
目的：检测孕妇外周血中着血红蛋白基因和PLAC4基因mRNA表达水平,比较其特异性及实用性。方法：选取55例正常妊娠孕妇和21例健康非孕妇女为研究对象,提取全血总RNA,采用实时定量PCR法检测着血红蛋白基因和PLAC4基因mRNA表达水平,并探讨其与孕龄的相关性。结果：55例孕妇外周血中14例扩增出胎儿着基因片段,31例为阴性；胎儿着血红蛋白基因mRNA质量浓度小为0.571×103 copies/ml,大为1.812×103 copies/ml,中位数为1.15×103 copies/ml,在孕7~10周该基因浓度与孕龄呈负相关( P<0.05)。55例正常妊娠孕妇外周血均扩增出PLAC4基因片段,小值为1.853×103 copies/ml,大值为15.221×103 copies/ml,中位数为7.836×103 copies/ml,表达水平与孕龄无相关性(P>0.05)。21例健康非孕妇女外周血均未扩增出着血红蛋白基因和PLAC4基因片段。结论：与着血红蛋白基因mRNA相比较, PLAC4基因mRNA具有特异性更强、与孕龄无关、阳性率更高等优点,更适用于21三体的无创性产前诊断。
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21号染色体上胎儿特异性基因SNP位点杂合率测定及意义
目的 检测中国人群中21号染色体上胎儿特异性基因单核苷酸多态性(SNP)位点的杂合率,为无创诊断唐氏综合征(DS)提供依据.方法 分别检测89例孕妇(孕妇组)分娩前后的基因表达水平,并以100例年龄匹配的健康女性作为对照组,选择胎儿特异性基因；通过多重连接探针扩增技术(MLPA)检测特异性基因mRNA-SNP位点的状态,计算胎儿特异性基因mRNA-SNP位点的杂合率.结果 PLAC4和COL6A2基因表达量在孕妇组分娩前均显著高于分娩后和对照组(P均＜0.05),故确定PLAC4和COL6A2作为研究对象；本研究对象mRNA-SNP杂合率不同于NCBI,尤以rs76461221,rs59066201及rs1044598位点为著.结论 不同人群间SNP杂合率具有极大差异,临床可采用MLPA半定量检测孕妇外周血中胎儿游离RNA无创诊断DS.
关键词： 唐氏综合征 无创性产前诊断 多重连接探针扩增技术 单核苷酸多态性 -
利用母体血浆游离胎儿DNA进行胎儿SRY基因定量检测
目的 探讨胎儿游离DNA在无创性产前诊断中的应用价值.方法 行产前诊断的孕妇87例,分为中期妊娠(16～24周)61例(中孕组)和早期妊娠(11～14周)26例(早孕组),采用实时荧光定量PCR方法,利用Taqman探针对妊娠早、中期孕妇血浆游离的胎儿Y染色体性别决定基因(sex-determining region of Y-chromosome,SRY)进行扩增和定量分析.结果 孕13周后的样本均得到特异性扩增,特异度和灵敏度均为100％；中孕组男性胎儿SRY检测的平均DNA浓度为155.46 copies/mL血浆,实测范围为43.6～326.8 copies/mL血浆；早孕组平均浓度为26.42 copies/mL 血浆,实测范围为14.3～73.3 copies/mL血浆.结论 采用荧光实时定量PCR在妊娠早、中期可稳定检测到胎儿游离DNA,可作为孕期性连锁遗传性疾病研究或产前诊断的有效补充手段.
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利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿血型的意义
目的:探讨利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿ABO血型的临床意义.方法:从33例13-40周可疑母儿血型不合的孕妇血浆中提取胎儿DNA,利用复合PCR-RFLP技术检测胎儿ABO血型.通过出生后脐带血血清学检测证实.结果:33例样本中,检出 22例(22/33),出生后证实20例诊断正确(20/22);14例孕中期检出9例(9/14), 8例正确(8/9);19例孕晚期检出13例(13/19)),12例正确(12/13).结论:利用孕妇血浆中的胎儿DNA诊断胎儿ABO血型简便无损伤,对于诊断和预防新生儿溶血病的发生具有重要意义.
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母体血浆胎儿游离DNA Rh D基因型产前诊断检测
目的 运用荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,Q-PCR)技术检测Rh D阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿Rh D基因型.方法 通过微量DNA抽提技术,并利用琼脂糖凝胶电泳法富集孕妇血浆游离胎儿DNA(Cell-free fetal DNA,cff DNA),用Q-PCR技术检测43例Rh D阴性孕妇血浆cff DNA,测定不同孕期的孕妇全血和血浆中管家基因(β-actin)的含量,比较不同孕期孕妇全血和血浆DNA含量的变化;并用男性性别决定基因(sex-determining region Y gene,SYR)确定胎儿DNA的存在,以未有妊娠史的健康女性和健康男性作为阴性和阳性基因对照;同时对孕男胎的Rh D阴性孕妇血浆cff DNA进行Rh D基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,与孕妇产后采集的新生儿脐血Rh D定型结果 对比分析.结果(1)孕妇早、中期孕组血浆DNA含量差异无统计学意义(P>0.05),早、晚期和中、晚期孕组血浆DNA差异有统计学意义(P<0.05).(2)43例Rh D阴性孕妇中26例经产后证实为男胎,母血浆中检测到SYR基因特异性扩增的25例,灵敏度为96.15％,特异度为94.44％,准确率为97.67％.(3)26例孕男胎孕妇血浆中胎儿DNA的Rh D基因型检测发现,有19例胎儿Rh D血型阳性,5例胎儿Rh D血型阴性,即24例胎儿DNA的Rh D基因型与表型相符,准确率为97.6％.结论 运用Q-PCR技术检测Rh D阴性孕妇血浆中cff DNA进行无创性产前诊断胎儿Rh D基因型,是一种敏感性高、特异性好的无创性产前诊断方法,可用于临床诊断和预防新生儿Rh D溶血病.
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Rh阴性孕妇外周血基因鉴定胎儿RhD血型的方法
目的 建立可靠有效的检测孕妇外周血中胎儿游离DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值.方法 采用PCR技术对5例RhD阴性孕妇外周血血浆DNA进行分析,然后对出生后婴儿脐带血进行Rh血清学表型分析,回顾性评价无创性预测胎儿RhD基因分析的准确性.结果 5例RhD阴性血浆标本扩增出180 bp与156 bp两条特异性片段,产后新生儿脐血血清学检测结果为RhD阳性,与PCR检测结果完全吻合.结论 孕妇外周血浆中胎儿游离DNA的测定能实现对胎儿RhD基因型的预测判定.孕妇外周血检测胎儿DNA可应用于非创伤性产前诊断.
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基于游离RNA的无创性产前诊断研究进展
孕妇血浆血清中游离RNA作为一种新的胎儿遗传言息材料给无创性产前诊断带来了新的契机.已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,且稳定存在于母体血循环中,易于检测.同时,其由于无需依赖胎儿性别或父源性多态性位点而具有十分明显的应用优势.目前,已经有研究将血浆血清中游离RNA与胎儿非整倍体、宫内发育迟缓以及子痫前期等妊娠相关疾病联系起来,并且取得了十分可喜的研究成果.
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基于胎源遗传物质的唐氏综合征无创性产前诊断研究进展
唐氏综合征是常见且严重的染色体异常类出生缺陷,迄今无有效治疗方法,在产前进行筛查与诊断,减少和避免患儿出生是唯一预防措施.目前常用的侵入性诊断方式因存在诸多弊端而被部分孕妇拒绝接受,因此寻找并建立准确且无创的唐氏综合征产前诊断方法是亟待解决的重要临床问题.利用存在于母体外周血中的胎儿遗传物质是近年来开展的无创性产前诊断新途径,本文就利用母血中的胎儿游离核酸进行唐氏综合征的产前诊断作一综述.
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母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因
[目的]建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法.[方法]从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA.[结果]我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致.[结论]我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性.胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断.
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基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的可行性
目的 建立一种基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的方法.方法 Percoll 1.077单密度梯度离心法之后,选用抗体CD147修饰到以玻璃为载体的纳米羟基磷灰石基底上,对新生儿脐血中的胎儿有核红细胞进行捕获,利用胎儿特异性抗体HbF、红细胞表面特异性抗体CD71以及细胞核染色剂DAPI对捕获到的新生儿脐血中有核红细胞进行染色标记,进而实现分选.对正常不同孕周孕妇外周血、未孕健康妇女外周血及新生儿脐血中抗体CD147捕获到的有核红细胞进行染色标记分选.抽取10例行常规产检时发现高危因素的孕妇外周血2 mL,用抗体CD147捕获胎儿有核红细胞并用X、Y、18、21染色体探针进行荧光原位杂交.结果 用HbF+CD71双标记染色法的胎儿有核红细胞阳性率与HbF单染和CD71单染标记的细胞阳性率相比差异有统计学意义(P<0.05);HbF单染和CD71单染标记的阳性细胞率之间相比差异无统计学意义(P>0.05);在孕16~20周时孕妇外周血中阳性细胞数目达到顶峰,之后随孕周增加而呈下降趋势.10例高危孕妇外周血标本均成功分离出胎儿有核红细胞,并经过FISH鉴定,本方法对男性胎儿诊断的灵敏度为85.71%,特异度为100.00%,对女性胎儿诊断的灵敏度为100.00%,特异度为85.71%,同时诊断出1例非整倍染色体胎儿,所有结果均经后期随访证实.结论 用纳米材料为基底,抗体CD147捕获,HbF+CD71双染色标记法对孕妇外周血中的胎儿有核红细胞进行识别和富集,可提高胎儿有核红细胞的检出率,可为进一步产前诊断奠定基础,佳时机应该在孕16~20周.
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母血中胎儿物质在无创性产前诊断中的应用
无创性产前诊断主要指利用母体血浆中胎儿物质探查胎儿信息的遗传学检测,其取材简单方便(抽取母亲外周血即可),相较于传统的产前诊断具有安全、创伤小、痛苦少的优势.母血中的胎儿物质主要包括胎儿细胞、来自胎儿及胎盘的游离核酸(DNA和RNA).分析母血中的胎儿物质除了可以作为胎儿产前诊断的方法,还可协助了解孕妇和胎儿的健康情况.
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孕妇血浆游离胎儿DNA检测在产前诊断中的应用
目的:介绍孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术在非创伤性产前诊断中的应用现状,探讨其存在的优缺点及可行性.方法:收集3 695例在本院门诊做孕中期产前诊断的孕妇血浆,采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体拷贝数;对筛查高危孕妇行羊膜腔穿刺及脐血穿刺术进行胎儿染色体核型分析.结果:孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术共检测出39例染色体高风险胎儿,2例可疑高风险胎儿,经羊水/脐血核型分析证实其中39例为染色体异常,分别为31例21-三体和7例18-三体,1例13-三体.游离胎儿DNA高通量基因测序技术的敏感度为100.0％,特异度为99.9％.结论:母体血浆游离DNA高通量基因测序技术可用于筛查胎儿染色体拷贝数异常的检测,但仍然需要与传统染色体分析技术结合做产前诊断.
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无创性产前诊断染色体非整倍体的研究进展
染色体非整倍体是胎儿常见的染色体畸形,也是胎儿出生缺陷疾病常见的病因之一,其中以唐氏综合征为常见.唐氏综合征又名21-三体综合征(21-trisomy syndrome)或先天愚型,在新生儿中发病率约为1/800.所以对先天性遗传病的产前检查、诊断是优生优育的重要保证.目前,唐氏综合征的产前检查对孕妇和胎儿都易造成危险,且检测指标也受多种因素影响.因此,急需一种安全、简便、可靠的无创性产前筛查诊断技术.本研究综述了母血胎儿细胞、胎儿游离DNA、胎儿游离RNA的研究进展,并对其未来趋势进行展望,探讨其理论意义和实用价值.
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孕妇血浆中胎儿游离 DNA 在唐氏综合征无创性产前诊断中的应用研究
目的：探讨应用孕妇血浆中游离胎儿高通量基因测序技术在无创性产前诊断中的可行性。方法对3368例孕妇进行中孕期血清学筛查的同时，筛查出的高风险病例平行进行 cffDNA 高通量测序；对需进行产前诊断者，同时进行胎儿染色体核型以及 MLPA 分析。结果中孕期三联血清学筛查3368例，血清学筛查21三体高危共347例，经高通量基因测序技术检测后结果为唐氏高危20例；经 MLPA 分析，结果得出347例标本中21-三体病例为20例；后通过羊水细胞核型分析证实20例与无创基因检测结果一致。应用孕妇血浆中游离胎儿 DNA高通量基因测序技术诊断胎儿的21号染色体非整倍体异常的敏感度为100．00％（20/20），特异性为100．00％（347/347），假阳性率为0．00％（0/347）。结论无创性产前诊断技术具有无创、准确、快速的诊断优势，该技术具有良好的临床应用前景。
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基于性染色体定量检测的伴性遗传病无创性产前筛查方法的研究
目的：利用孕妇血浆游离DNA对产前胎儿性别进行识别，为伴性遗传性疾病的无创性产前筛查提供参考。方法利用X、Y染色体的特异性引物和探针构建识别胎儿性别的实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测技术，并对灵敏度、准确性等方法学指标进行评价，然后将构建好的方法用于24例未孕健康女性及临床上50例16～20孕周的孕妇血浆DNA的检测。结果在母体DNA胎儿Y染色体定性检测方法的灵敏度检测中，当胎儿DNA丰度为3％～6％时，母体DNA模板量下限是50 pg。当母体DNA模板量在0．5～50 ng时，Y染色体低检测丰度为1％，相当于胎儿DNA丰度为2％；当母体DNA模板量在0．05～0．5 ng时，Y染色体低检测丰度为2％～4％，相当于胎儿DNA丰度为4％～8％；当无母体DNA时，Y染色体模板量下限为0．5 pg。标本定量检测中妊娠女性的血浆DNA浓度明显高于未孕健康女性（P＜0．05）。50例孕妇静脉血标本中，除1例标本因提取失败未作检测外，其余49例标本初次试验在未考虑母体血浆DNA模板起始用量时，检测结果为17例男性，32例女性，与胎儿出生后性别不完全一致；但是当加大母体血浆DNA模板起始用量（＞50 pg）后，结果为23例男性，26例女性，准确率为100％。结论该试验所构建的利用母体血浆游离DNA进行的早期无创性产前筛查方法具有较高的准确性，可以为伴性遗传出生缺陷性疾病的早期筛查和预防提供重要的参考价值。
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孕妇血浆胎儿游离DNA检测对胎儿染色体拷贝数异常的诊断意义
目的 探讨应用孕妇血浆胎儿游离DNA高通量基因测序技术检测胎儿染色体拷贝数的准确性和实际临床可行性.方法 选择需做产前诊断的153名孕妇,采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体拷贝数;同时行羊膜腔穿刺进行胎儿染色体核型分析.结果 153名孕妇中,母体血浆游离DNA平行测序技术共检测出6例染色体异常高风险胎儿.羊水分析证实6例均为染色体异常,其中非整倍体5例,分别为47,XYY; 45,X;47,XY,+18;47,XY,+21以及47,XY,+13;染色体结构异常1例,核型为46,XY,der (13; 21)(q10; q10),+21.另检出染色体多态性3例(1例46,XY,21p+;2例46,XY,Yqh-).两种方法检测胎儿染色体拷贝数异常结果一致.结论 母体血浆游离DNA高通量测序分析可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,具有无创、灵敏度高、特异性强等优点,在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有广泛的应用前景.
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Illumina测序技术在母血检测胎儿非整倍体中的应用
目的 探讨Illumina无创测序技术检测孕妇外周血中的胎儿游离DNA,在胎儿染色体非整倍体的无创产前检测的应用价值.方法 选择2011年4月至2013年4月在贵阳医学院附属医院贵州省产前诊断中心就诊孕妇2200人,孕周为12～30周,高龄妊娠、血清学高危和(或)超声提示胎儿异常等,抽取孕妇外周血,提取DNA,制备文库,应用Illumina Hiseq2000高通量测序,对母血中游离DNA进行测序分析,对阳性结果进行羊水穿刺或脐血穿刺行染色体核型分析;对阴性结果进行随访,对新生儿外周血进行染色体核型分析.结果 2200名孕妇的游离DNA检测结果为阳性31例,其中21三体14例,18三体4例,13三体5例,4号三体1例,45,X3例,47,XXX 4例;所有阳性结果均经羊水穿刺或脐血穿刺行染色体核型分析,其中21三体、18三体、4号三体符合率100％,13三体有1例不符合,45,X有1例不符合,47,XXX有2例不符合,其中1例经核型证实来源于孕妇,孕妇本身为47,XXX;所有阴性结果均在随访时行外周血染色体核型分析,检测出易位19例、倒位24例、多态20例.结论 Illumina无创测序技术适合用于胎儿非整倍体检测,对染色体易位、倒位、多态等不具有检出作用,在性染色体非整倍体的检出率上还有待加深测序深度,提高检出率.
关键词： Illumina测序 无创性产前诊断 非整倍体 胎儿 -
宫颈管内滋养细胞进行染色体异常无创性产前诊断
目的 收集孕早期存在于妊娠妇女宫颈管内的脱落胎儿滋养细胞,采用定量荧光PCR(quantitative fluorescent-PCR,QF-PCR)技术复合扩增多个短串联重复序列(sllort tandem repeat,STR),建立一种染色体异常无创性产前诊断方法.方法 收集100例人工流产孕妇宫颈内口冲洗液,提取冲洗液中的DNA,分别针对21号、X、Y染色体上7个位点和13号、18号染色体上8个位点应用QF-PCR方法进行复合扩增检测并分析结果.对人流后的绒毛采用染色体核型分析确定染色体状态.结果 100例滋养细胞样本中,82例扩增成功,并准确检出样本的性别.15例检出核型正常,其他样本存在母体细胞污染.结论 经宫颈获取胎儿滋养细胞为孕早期无创性产前诊断提供了一个可能途径,但应采取更有效的措施富集胎儿滋养细胞,避免母体细胞污染.
