基于高通量测序的红豆杉EST-SSRs标记研究

目的:利用高通量测序,对红豆杉Taxus cuspidata转录组进行EST-SSRs发掘和研究.方法:提取红豆杉叶片cDNA,应用454 GS FLX Titanium测序,采用Newbler Assembler Software软件对序列(high-quality sequences)进行从头拼接,获得一致性序列(unique sequences).用Simple Sequence Repeat Identification Tool (Perl Script)对一致性序列进行分析,检索SSRs模体；采用PRIMER3设计扩增引物.结果:高通量测序获得红豆杉81 148条ESTs,经拼接得到20 557条unique sequences,从中发现了753个EST-SSRs.依据其邻近序列设计引物,共有519条EST-SSRs获得了扩增引物.在红豆杉EST-SSRs中随机挑选序列构建小样本,克隆测序结果表明87.5％的序列与Sanger测序结果一致.结论:首次获得了红豆杉属EST-SSRs,为红豆杉的种质资源培育、功能基因及基因组差异研究奠定了基础.

天然东北红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的分布及变化规律

目的:探讨天然东北红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱2种物质的分布特点及变化规律.方法:利用超声辅助提取不同样品中的紫杉醇和三尖杉宁碱,利用HPLC对2种物质含量进行检测.结果:当年生和二年生枝中,紫杉醇和三尖杉宁碱含量在树冠阳面略高于阴面,在叶中,紫杉醇和三尖杉宁碱含量分布无明显规律.不同组织中,紫杉醇和三尖杉宁碱的含量的依次为:干皮＞枝＞叶＞假种皮,枝中紫杉醇含量约为干皮中的25%,当年生枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量与胸径相关性很弱,而生长时期的变化则引起紫杉醇和三尖杉宁碱含量产生较大的变化,休眠期显著高于花期和果期.结论:天然东北红豆杉枝中紫杉醇和三尖杉宁碱含量受到多种条件的影响,与人工种植的东北红豆杉相比,枝叶中紫杉醇含量无显著差别,说明通过人工种植和优树的选育来获得高紫杉醇产量的植株是可行的.

东北红豆杉心材化学成分的研究

目的:研究东北红豆杉心材的化学成分.方法:采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱和制备型高效液相色谱等手段对化学成分进行分离和纯化,用现代核磁技术对化合物进行结构鉴定.结果:从东北红豆杉心材分离得到10个化合物,分别鉴定为taxinine(1),taxusin(2),β-sitosterol(3),1β-hydroxybaccatin I(4),2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2'-methyl)butanoyloxy-4(20),11-taxadiene(5),2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2'-methyl-3'-hydroxy-butanoyloxy)-4(20),11-taxadiene(yunnanxane)(6),9α,10β,13α-triacetoxy-5α-cinnamoyltaxa-4(20),11-diene(7),2-deacetoxytaxinine J(8),taxezopidine G(9),2α,7β,9α,10β,13α-pentaacetoxyl-taxa-4(20),11-dien-5-ol(5-decinnamoyltaxinine J)(10).结论:化合物4,6,10是首次从该植物中分离得到.

东北红豆杉及其伤愈组织粗提物中紫杉醇的HPLC-ESI-MS/MS分析研究

目的 研究紫杉醇的二级质谱裂解规律,对东北红豆杉及其伤愈组织粗提物中的紫杉醇进行HPLC-ESI-MS/MS分离定性,为天然产物中该化合物的分离分析提供一种快速可靠的方法.方法 对HPLC-ESI-MS/MS条件进行优化,研究紫杉醇电喷雾质谱的一级电离规律和二级质谱裂解规律,并结合液相色谱的保留时间判断东北红豆杉及其伤愈组织粗提物中紫杉醇色谱峰的归属.结果 详细阐明了紫杉醇的二级质谱裂解规律,并利用HPLC-ESI-MS/MS法准确快速地分离定性了两种粗提物中紫杉醇.结论 本方法灵敏度高,快速,选择性高,专属性好,能够作为天然产物及其产品中紫杉醇分离定性的一种快速可靠的技术手段.

东北红豆杉对抗小鼠肺癌实验性研究

目的探讨东北红豆杉对抗C57BL/6肺癌小鼠的抑制作用.方法将肺腺癌AGZY-83-a细胞,浓度为1.25×106个/ml,接种于C57BL/6小鼠皮下,接种第5天起,对照组每日每只腹腔注射生理盐水0.2ml,实验组每日每只腹腔注射东北红豆杉注射液10mg/kg,均连续注射10天,接种后第18天全部断髓处死.完整剥离皮下瘤结节称重,并进行光镜和电镜观察.结果两组瘤重分别为(2.91±0.052)g和(0.53±0.026)g,差异有显著性(P＜0.01).光镜下,实验组瘤组织中心及边缘常见灶性或大片状坏死,同时伴有炎细胞浸润,癌组织边缘纤维结缔组织增生并形成包裹.电镜下,可见凋亡小体.结论东北红豆杉对肺腺癌具有明显的抑制作用.

一种能产生紫杉醇类化合物内生真菌的分离

目的从东北红豆杉Taxus Cuspidata Sieb et Zucc树皮中分离能产生紫杉醇类化合物的内生真菌.方法采用无菌技术分离东北红豆杉树皮中的内生真菌,并采用高效液相色谱(HPLC)等方法对该真菌培养物进行分析.结果从东北红豆杉树皮中分离得到一种内生真菌,化学分析证明该真菌培养物内含有紫杉醇类化合物.结论 东北红豆杉树皮中含有能产生紫杉醇类化合物的内生真菌.

东北红豆杉提取物抗癌作用的实验研究

我们对东北红豆杉茎、叶制成的总提物进行作了抗癌作用的实验研究.1、实验材料1.1 瘤株 小鼠肉瘤(S180)瘤株及小鼠腹水型肝癌(H22)瘤株,由黑龙江省肿瘤医院提供.小鼠网组细胞白血病瘤株,由天津血液病研究所提供.

拿大产东北红豆杉化学成分的研究

目的 研究生长在加拿大的东北红豆杉Taxus cuspidata的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱和HPLC制备色谱法分离、纯化化学成分,用一维和二维核磁共振技术鉴定化合物结构.结果 从生长在加拿大的东北红豆杉的针叶中分离得到了10个紫杉烷二萜类化合物,分别鉴定为2α,9α-二乙酰氧基-5α-桂皮酰氧基-1013-羟基-紫杉烷-4(20),11-二烯-13-酮(10-去乙酰基紫杉宁,I)、2α,10β二乙酰氧基-5α-桂皮酰氧基-9α-羟基一紫杉烷-4(20),11-二烯一13一酮(9-去乙酰基紫杉宁,Ⅱ)、2α,9α,10β-三乙酰氧基-5α-桂皮酰氧基-13α-羟基-紫杉烷-4(20),11-二烯(13-二氢紫杉宁,13-去乙酰基紫杉宁E,紫杉佐匹定,Ⅲ)、2α,9α,10β-三乙酰氧基-5α-桂皮酰氧基-13a-羟基-13,16-环氧-紫杉烷-4(20),11-烯(taxezopidine J,1V)、2α,7β,9α,10β,13-五乙酰氧基-5α-桂皮酰氧基-11α-羟基一紫杉烷-4(20),12-二烯(紫杉平,taxuspine D,V)、2α,7α,9α,10β-四乙酰氧基-5α-桂皮酰氧基一11伊羟基一12,16一环氧一紫杉烷-4(20)-烯-13-酮(紫杉吉酚,taxagifine,V1)、2α,7β,9α,10β,19-五乙酰氧基-5α,11α-二羟基-12,16-环氧-紫杉烷-4(20)-烯-13-酮(19-去苯甲酰基-19-乙酰基紫杉宁M,Ⅶ)、2α,5β,13α-三乙酰氧基-1β,7β,9α,10β-四羟基-4.20-环氧一紫杉烷-11-烯(7β,9α,10β三去乙酰基-1β-羟基一巴卡亭I,南方红豆杉醇,taxumairol C,Ⅷ)、4a,1013,13a·三乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-1β,7β,9α-三羟基-5,20-环氧一紫杉烷-11-烯(9-二氢-13-乙酰基-巴卡亭Ⅲ,Ⅸ)、4αa,13α-二乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基一7β.9α,10β,15-四羟基-5,20-环氧-11(15-1)重排紫杉烷-11-烯(7,9,10-三去乙酰基重排巴卡亭Ⅵ,Ⅹ).结论 化合物Ⅷ、Ⅹ为首次从东北红豆杉中分离得到,化合物Ⅲ为首次从东北红豆杉针叶中分离得到.

东北红豆杉针叶中紫杉烷类化学成分的研究

目的 研究东北红豆杉Taxus cuspidata针叶中紫杉烷类化学成分.方法 用色谱法分离,用理化性质及波谱方法(1D 'NMR、2D NMR及FAB-MS)分析鉴定其化学结构.结果 从东北红豆杉针叶中分离得到6个化合物,分别鉴定为10β-羟基-2a,9a,13a-三乙酰氧基-5a-肉桂酰氧基紫杉-4(20),11-二烯(10β-hydroxy-2a,9a,13a-tri-acetoxy-5a-cinnamatetaxa-4(20),11-diene,Ⅰ)、7,13-二去乙酰基-9,10-去苯甲酰基taxchinin C(7,13-dideacetyl-9,10-debenzoyltaxchinin C,Ⅱ)、2-去乙酰基taxin B(2-deacetyhaxin B,Ⅲ)、7,9-二去乙酰基-5-去肉桂酰基紫杉宁J(7β,9a-dideacetyl-5-decinnamoyhaxinine J,Ⅳ)、2a,13a-二羟基-9a,10β-二乙酰基-5a-肉桂酰基紫杉-4(20),11-二烯(2a,13a-dihydroxy-9a,10β-diacetoxy-5a-cinnamatetaxa-4(20),11-diene,Ⅴ)、5-去肉桂酰基taxuspine D(5-decin-namoyltaxuspine D,Ⅵ).结论 化合物Ⅰ～Ⅲ,Ⅴ和Ⅵ均为首次从该植物中获得.

东北红豆杉针叶中两个双重排紫杉烷内酯化合物的结构鉴定

目的 研究东北红豆杉Taxus cuspidata针叶中的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱及制备薄层色谱法分离、纯化化学成分,用一维和二维核磁共振技术鉴定化合物结构.结果 从东北红豆杉针叶的甲醇提取物中分离出两个罕见的双重排紫杉烷内酯类化合物wallifoliol(1)和tasumatrol H(Ⅲ).结论 此两种化合物为首次从东北红豆杉中分离得到,在氘代氯仿溶液中化合物Ⅰ在室温下可以转化成5α-乙酰基-2α-苯甲酰氧基-4α,7β,9α,13α,20-五羟基-11(15→1),11(10→9)双重排紫杉烷-11-烯-10,15-内酯(Ⅱ).

朝鲜产东北红豆杉提取紫杉醇后残液的化学成分研究

目的 研究朝鲜产东北红豆杉树皮中提取紫杉醇后残液的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱分离,通过理化常数和光谱分析鉴定化合物的结构.结果 分离并鉴定了10个化合物的结构,分别为β-谷甾醇(1)、7-表-紫杉醇(2)、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(3)、胡萝卜苷(4)、7-木糖-紫杉醇(5)、2-(4-hydroxyphenyl)propane-1,3-diol(6)、2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)propane-1,3-diol(7)、20,22-异丙叉基β-蜕皮甾醇(8)、4-O-β-D-xylopyrano-syl dihydrodehydrodiconiferyl alcohol(9)、3,5,3'-三羟基-7,4'-二甲氧基黄酮(10).结论 化合物6～10为首次从该属植物中分得.

国产红豆杉各部位紫杉醇含量分析

紫杉醇[1～3]目前国内的来源仍主要是从红豆杉树皮中提取,资源十分短缺.本文对云南红豆杉Taxus yannanensis和南方红豆杉T. chinensis的皮、根、叶、嫩枝、木和种子及东北红豆杉T.cuspid ata的皮、木、嫩枝和叶中紫杉醇含量进行了分析比较,为合理开发红豆杉,提供了实验数据.

HPLC法测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatin Ⅲ,10-DABⅢ)的含量.方法采用RP-HPLC法.C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-乙腈-水(20:30:50)作为流动相,检测波长为233.9nm.结果 10-DABⅢ在0.004 75～0.038 μg与峰面积线性关系良好(r=0.999 0),平均回收率为100.5%,RSD为2.0%.结论方法操作简便、灵敏度高、专属性强,可用于红豆枝叶中10-DABⅢ的质量控制.

用东北红豆杉培养细胞的原生质体高效生产紫杉醇

029用东北红豆杉愈伤组织培养物生产具生物活性的紫杉烷

东北红豆杉愈伤组织中松香烷型二萜类成分的分离与鉴定

目的 明确东北红豆杉(Taxus cuspidata)愈伤组织中的化学成分,为开发可持续利用的红豆杉资源提供物质基础.方法 采用硅胶柱色谱、制备型HPLC等手段对愈伤组织的乙酸乙酯和甲醇提取物进行分离和纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据并结合相关文献对化合物结构进行鉴定.结果 从东北红豆杉愈伤组织中共分离得到7个松香烷型二萜化合物,分别鉴定为hinokiol(1)、美丽红豆杉素A(taxamairin A,2)、美丽红豆杉素C(taxamairin C,3)、taxayunnin(4)、margoci-lin(5)、3,20-epoxy-12-methoxy-8,11,13-abietatriene-3,7,11-triol(6)和brevitaxin(7).结论 化合物1～7均为首次从东北红豆杉植物中分离得到.

东北红豆杉愈伤组织中紫杉烷类化合物的分离与鉴定

目的 明确东北红豆杉(Taxus cuspidata)愈伤组织中的化学成分,为开发可持续利用的红豆杉资源提供理论依据.方法 采用硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱等手段对愈伤组织的正己烷和乙酸乙酯提取物进行分离和纯化;根据化合物的理化性质和波谱数据并结合相关文献对化合物结构进行鉴定.结果 从东北红豆杉愈伤组织中分离得到11个紫杉烷类化合物,分别鉴定为taxuyunnanine C(1)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-propionyloxy-4(20),11-taxadiene(2)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-isobutyryloxy-4(20),11-taxadiene(3)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β(2'-methyl)butyryioxy-4(20),11-taxadiene(4)、云南红豆杉甲素(yunnanxane,5)、紫杉醇(paclitaxel,6)、taxol C(7)、baccatin Ⅵ(8)、1β-deoxybaccatin Ⅵ(9)、taxayuntin C(10)、baccatin Ⅰ(11).结论 化合物9、11为首次从东北红豆杉愈伤组织中分离得到,化合物1-4、8-10尚未在东北红豆杉中发现.

东北红豆杉化学成分的分离与鉴定

目的 对东北红豆杉(Taxus cuspidta Sibe.et Zucc.)的化学成分进行研究.方法 采用硅胶柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR波谱数据进行结构鉴定.结果 分离得到8个化合物,分别鉴定为大黄素甲醚(physcion,1)、油酸甲酯(methyl oleate,2)、紫杉宁(taxinine,3)、5α-羟基-9α,10β,13α-三乙酰氧紫杉烷-4(20),11-二烯(5α-hydroxy-9α,10β,13α-triacetoxytaxa-4(20),11-diene,4)、云南紫杉宁C(taxuyurmanineC,5)、2-去乙酰氧-5α-羟基紫杉宁J(2-deacetoxy-decinnamoyl taxinine J,6)、2-去乙酰氧紫杉宁J(2-deacetoxytaxirtine J,7)、11-羟基-12-甲氧基松香烷-8,11,13-三烯-3,7-二酮(11-hydroxy-12-methoxyabieta-8,11,13-triene-3,7-dione,8).结论 化合物1、2为首次从红豆杉属植物中分离得到,化合物4、8为首次从该种植物中分离得到.

东北红豆杉化学成分的分离与鉴定(Ⅱ)

目的 对东北红豆杉(Taxus cuspidata Sieb.et Zucc.)的化学成分进行研究.方法 采用硅胶柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR波谱数据进行结构鉴定.结果 分离得到8个化合物,分别鉴定为柳杉酚(sugiol,1)、20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,2)、davidioside B(3)、表儿茶素(epicatechin,4)、2-去乙酰氧基-7β,9α-二去乙酰基紫杉宁J(2-deacetoxy-7β,9α-dideacetyltaxinine J,5)、2-去乙酰氧紫杉宁E(2-deacetoxytaxinine E,6)、7-表-10-去乙酰基巴卡亭Ⅱ(7-epi-10-deacetyl baccatin Ⅲ,7)、7-O-β-D-木糖-10-乙酰基巴卡亭Ⅲ(7-O-β-D-xylose-10-deacetyl baccatin Ⅲ,8).结论 化合物3为首次从红豆杉属植物中得到,化合物1、5、7、8为首次从东北红豆杉植物中分离得到,并利用二维核磁共振技术首次对化合物6的碳谱数据进行了全归属.