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利用等位基因特异PCR鉴别虎掌南星及其部分混淆品
目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据.方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl 20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,PtrplT08R和Pprpl148F,Pprpl484R,采用等位基因特异PCR方法对虎掌南星、半夏、水半夏3个物种的10个样品进行扩增.结果:引物Pprpl148F和Pprpl484R仅对虎掌南星扩增333 bp条带,半夏、水半夏均无扩增,能准确鉴别虎掌南星.引物Ptrpl94F和Ptrpl708R对半夏、虎掌南星均扩增611 bp条带,水半夏无扩增.结论:本实验建立的等位基因特异PCR方法能准确区别出虎掌南星和半夏、水半夏,为虎掌南星及半夏的正确用药提供了保障.
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遗传性对称性色素异常症一家系中ADAR基因的新突变
目的 研究遗传性对称性色素异常症的RNA特异性腺苷脱氨酶(ADAR)基因的突变.方法 调查一个遗传性对称性色素异常症家系,采集该家系中患者及正常人血样,用聚合酶链反应扩增ADAR基因,并对扩增产物进行直接测序,找到其突变位点.同时在其突变位点附近设计等位基因特异PCR引物,对该家系中的患者及40名无血缘关系健康对照者的该位点进行扩增电泳对比,以确认是突变而不是多态性.结果 该家系中所有患者存在ADAR基因3号外显子c.1642的缺失,导致移码突变(p.P548fsX563).结论 该家系发病是由ADAR基因c.1642 delC突变所致.
关键词： 遗传性对称性色素异常症 ADAR基因 突变分析 等位基因特异PCR -
氯喹抗性相关基因pfmdrl两个突变点的初步研究
目的对氯喹抗性相关基因pfmdrl两突变点进行研究.方法用新颖的等位基因特异PCR和限制性酶切分析技术(AS-PCR/RFLP)检测云南恶性疟的与氯喹抗性相关的pfmdrl基因Asn86Tyr和Asp1246Tyr的突变点,了解其与氯喹抗性表现型的相关性.结果在10个氯喹抗性分离株未检测pfmdrl基因86位氨基酸编码子的突变(Asn86型);而在9个氯喹抗性分离株中检测pfmdrl基因86位氨基酸编码子由A变为T,即86Tyr型.未检测到pfmdrl基因Asn1246Tyr的突变.结论提示在云南恶性疟氯喹抗性流行区,氯喹抗性表现型与pfmdrl基因86Tyr的位点突变符合性仅47.4%,似无明显关系;而基因Asn1246Tyr的位点突变似乎是不存在.这支持除Asn86Tyr突变外,其它基因可能参与了氯喹抗性.
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等位基因特异PCR结合熔解曲线分析快速检测线粒体DNA A1555G突变
目的 建立一种线粒体DNA A1555G突变的快速检测方法.方法 以45例线粒体耳聋患者为研究对象,采用等位基因特异PCR结合熔解曲线分析对线粒体DNA A1555G突变位点进行检测,根据得到的熔解曲线分析线粒体DNA A1555G突变.并与PCR产物直接测序法结果进行比较.结果 线粒体DNA A1555G同质性突变时只出现一个峰且峰尖所对应的Tm为(82±0.5)℃;线粒体DNA A1555G未发生突变时只出现一个峰且峰尖所对应的Tm为(79±0.5)℃;线粒体DNA A1555G异质性突变时出现2个峰且各自峰尖所对应的Tm为(82±0.5)℃和(79±0.5)℃.45例样本的检测结果与PCR产物直接测序法的结果符合率达100%.结论 等位基因特异PCR结合熔解曲线分析具有操作简便、结果准确、快速等特点,可作为线粒体DNA A1555G突变检测的常规方法.
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等位基因特异PCR结合测序检测CYP21A2基因突变的方法
目的 建立一种等位基因特异PCR结合测序检测CYP21A2基因突变的方法.方法 通过对CYP21A2基因和相应假基因CYP21AP序列进行同源性比较,同时设计等位基因特异PCR引物与可扩增CYP21A2和CYP21A2P基因的同源性引物.选择4例先天性肾上腺皮质增生症患者和5名正常对照,比较等位基因特异PCR引物与同源引物测序结果.结果 等位基因特异PCR引物扩增和测序分析结果显示,4例患者均存在突变,分别为IVS2 13A/C＞G、Arg356Trp和Arg149Pro,对照序列正常.同源引物扩增分析只能明确Arg149Pro突变,患者和正常对照均存在IVS2-13A/C＞G和Arg356Trp突变.结论 等位基因特异PCR技术结合测序可简便可靠地进行CYP21A2基因突变检测,具有临床应用推广价值.
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云南省恶性疟原虫多药抗性基因Asn86Tyr多态性调查
目的检测云南恶性疟原虫多药抗性基因(Pfmdr1)Asn86Tyr的多态性,探索其与氯喹敏感性表现型的关系.方法用等位基因特异PCR和限制性酶切片段长度分析技术(AS-PCR/RFLP).结果在86%(19/22)的氯喹抗性分离株中检测到Pfmdr1基因的Asn86Tyr两种多态性,携带编码86Tyr多态变异的占50%,而含编码Asn86多态的也是50%.结论在云南氯喹抗性高度流行区,Pfmdr1基因Asn86Tyr的多态性是普遍存在的.
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等位基因特异PCR检测N-乙酰化转移酶遗传多态性研究
目的与方法:改良一种适用于流行病学研究的N-乙酰化转移酶(NAT2)基因型的等位基因特异PCR(AS-PCR)检测方法,分析了3个NAT2基因突变点:481 T、590 A、857 A,并用此法对76例南京地区健康人群的NAT2基因型多态性进行了研究.从而也检验了该方法.结果:该人群中各基因频率:Wt(野生型)为0.5723:481 T为0.0395;590 A为0.2368;857 A为0.1513.与白种人比较差异有显著性,而与文献报道的亚州人群频率分布特征基本一致.结论:南京地区健康人群中与快反应相关的NAT2基因型占多数(82.9%);本文改良的AS-PCR检测方法经验证为NAT2基因多态性研究的有效实验手段.
