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紫檀芪对长波紫外线辐射所致人成纤维细胞急性光损伤的保护作用
目的 探讨紫檀芪(pterostilbene)对长波紫外线(UVA)辐射所致的人成纤维细胞急性损伤的保护作用,初步分析其分子机制.方法 TTI法测定紫檀芪对人皮肤成纤维细胞活力的影响,紫檀芪与人皮肤成纤维细胞共培养24h后,以20J/cm2的UVA剂量进行照射,然后采用乳酸脱氢酶释放法测定细胞活力,DCFH-DA测定胞内活性氧(cellular reactive oxygen species,ROS)水平,彗星实验检测DNA损伤,Western印迹检测核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白细胞定位以及siRNA沉默Nrf2.结果 与对照相比,UVA照射后乳酸脱氢酶相对释放率增加为164.53％(P＜0.001).而UVA照射前4μmol/L和8 μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则细胞乳酸脱氢酶相对释放率分别恢复到对照组的100.11％ (P ＞0.05)和98.69％ (P ＞0.05).流式细胞术分析显示,经UVA辐照后,其ROS水平上升至对照细胞的264.4％(P＜0.001),UVA照射前4μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则活性氧(ROS)水平恢复至对照细胞的113.50％ (P＜0.05).彗星实验结果显示,空白对照组细胞的尾部DNA百分比为(1.795±2.147)％,UVA辐照组为(65.50±12.418)％,与空白对照组相比DNA损伤显著增加(t =40.68,P＜0.000 1);而紫檀芪预处理后再接受UVA辐照组为(13.53±8.152)％,与UVA辐照组相比其DNA损伤显著减轻(t=27.85,P＜0.000 1).紫檀芪处理提高了细胞核中的Nrf2蛋白水平.转染siRNA-Nrf2后,细胞活性与对照细胞差异无统计学意义(P＞0.05),但经UVA照射,紫檀芪的预处理细胞活性为对照组的35.32％ (P ＜0.000 1),紫檀芪的保护作用显著降低.结论 紫檀芪能有效防御UVA所致成纤维细胞急性光损伤.这种保护作用可能与紫檀芪激活Nrf2信号通路相关.
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DART/Q-TOF-MS快速鉴定龙血竭中5个酚酸类成分
目的:建立一种可以快速鉴定龙血竭中5个酚酸类成分的方法.方法:采用实时直接分析(DART)离子源结合四极杆串联飞行时间质谱(Q-TOF-MS),氦气流速为3.1 L·min-1,气体温度为250℃,样品传输速度为0.2 mm·s-1.Agilent 6538 Q-TOF毛细管电压为1 kV,RF电压为250 V,一级质谱扫描质荷比范围m/z 50 ～ 800,二级质谱扫描质荷比范围m/z30～ 500,碰撞能量为25V 结果:通过对照品与样品的一级、二级质谱图对比快速鉴定了样品中5个化学成分,分别为龙血素A、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮、白藜芦醇和紫檀芪.结论:本法经过方法学验证,可用于快速分析鉴定龙血竭中的酚酸类成分.
