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基于近红外光谱技术的散结镇痛胶囊中龙血素A、B的含量测定
目的:利用近红外光谱分析技术(NIRS)快速测定散结镇痛胶囊中龙血素A、B的含量.方法:利用HPLC法测定散结镇痛胶囊龙血素A、B的含量,运用偏小二乘法(PLS)建立NIRS与HPLC测定值之间的多元校正模型,对未知样品进行预测.结果:龙血素A、B的定量校正模型相关系数r分别为0.987 9、0.981 5,校正集验证均方差(RMSEC)分别为0.021 3、0.020 7,内部交叉验证均方差(RMSEV)分别为0.025 5、0.023 6,对预测集进行预测,预测值与真实值的相关性良好.结论:近红外光谱法对散结镇痛胶囊中龙血素A和龙血素B含量预测结果较好,能满足制药中检测的精度要求,为中药生产过程的在线、无损定量分析提供了依据.
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HPLC测定龙血竭提取物中龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮的含量
目的:建立龙血竭提取物中龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮的含量测定方法.方法:采用Kromasil C18色谱柱流动相乙腈-1％冰醋酸梯度洗脱,体积流量1 mL· min-1,柱温40℃,进样量10μL,检测波长龙血素A,B为278 nm,7,4'-二羟基黄酮为330 nm.结果:龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮分别在10.05 ～60.36 μg,10.08 ～60.48 μg,3.26 ～19.56 μg呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为108.6％( RSD 0.99％),109.6％( RSD 1.03％),102.7％(RSD 1.24％).结论:方法简便易行,结果准确,可用于龙血竭提取物的质量控制.
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HPLC同时测定龙血竭及其提取物中5个有效成分的含量
目的:建立HPLC同时测定龙血竭及其提取物中龙血素A,龙血素B,7,4’-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇含量的方法.方法:采用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相乙腈-1％冰醋酸,梯度洗脱;流速1 mL· min-1;柱温40℃;检测波长龙血素A和龙血素B为278 nm,7,4’-二羟基黄酮、紫植茋和白藜芦醇为319 nm.结果:5个有效成分在40 min内均达到基线分离,线性关系良好(r≥0.999 7).龙血竭中龙血素A,龙血素B,7,4'-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的平均回收率分别为102.9％,96.81％,97.29％,100.7％,103.7％,RSD分别为0.23％,1.5％,0.42％,0.58％,0.34％;龙血竭提取物中龙血素A,龙血素B,7,4’-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的平均回收率分别为102.2％,96.93％,97.90％,102.0％,103.3％,RSD分别为1.7％,0.91％,1.4％,1.5％,1.2％.结论:本方法操作简便、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为龙血竭及其提取物的质量控制提供了一个很好的参考.
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影响国产血竭中龙血素B含量测定的干扰成分的分离鉴定
目的 HPLC法测定龙血素B含量时鉴定其近旁杂质峰的结构,便于进行龙血竭的质量控制.方法 HPLC法确定龙血素B及近旁杂质峰位置,硅胶柱层析用于龙血素B近旁杂质峰的分离,质谱和核磁共振用于结构鉴定.结果龙血素B近旁杂质峰为龙血素A.结论龙血素A与龙血素B结构相近,用HPLC法很难完全分开,有必要对原来质量标准进行修订.
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RP-HPLC测定龙血竭胶囊中龙血素A和B的含量
目的:建立RP-HPLC测定龙血竭胶囊中龙血素A和B的含量.方法:以C18反相键合硅胶为固定相,乙腈-1%冰醋酸(34.5:65.5)为流动相,检测波长为280nm,用外标法定量.结果:龙血素A在9.8～250ng范围有良好线性关系,r=0.9996,方法回收率为97.68%;龙血素B在10.8～216ng范围有良好线性关系,r=0.9993,方法回收率为96.77%.结论:本方法是测定龙血竭胶囊中龙血素A和B含量的简便、快速、可靠的定量方法.
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国产血竭中龙血素A和龙血素B的含量测定及两者的相关性分析
目的:RP-HPLC法测定不同品牌国产龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量,并对龙血素A和龙血素B含量进行相关性分析.方法:采用反相高效液相色谱法,乙腈-冰醋酸(1→90)(40:60)为流动相,流速:1.0ml/min;UV检测波长:270nm;柱温:室温.结果:龙血素A浓度4～24μg/ml范围内和峰面积呈线性相关,回归方程Y=855.8+8037.1X(r=0.9999);龙血素B在20～120μg/ml范围内和峰面积呈线性相关,回归方程为Y=219.3+8081.8X(r=0.9999).结论:所测6种国产血竭样品中龙血素B含量均未达到部颁标准的规定,龙血素A的含量明显高于龙血素B的含量,龙血素A和龙血素B的含量呈现明显的相关性.
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复方龙血竭胶囊质量标准研究
目的：对复方龙血竭胶囊质量标准进行修订完善。方法：以二氯甲烷替代原标准中TLC鉴别中所使用的三氯甲烷；修订完善含量测定方法，采用Agilent SB-C18柱（4.6 mm ×250 mm，5μm），流动相为乙腈-0.4％磷酸溶液（37∶63），检测波长275 nm，流量1.0 mL· min-1，柱温30℃。结果：修订后的含量测定方法专属性强，龙血素A在0.0208～0.5200μg范围内呈现良好线性关系，平均回收率为100.46％，龙血素B在0.0259～0.6475μg范围内呈现良好线性关系，平均回收率为100.95％。结论：本法简便、准确，重现性良好，可以更好地控制复方龙血竭胶囊的质量。
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HPLC同时测定龙血竭及其提取物中5个有效成分的含量
目的 观察HPLC 同时测定龙血竭及其提取物中龙血素A,龙血素B,7,4'-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的含量的效果,探讨其优势,为研究提供科学依据.方法 采用Kromasil 100-5 C18(250 mm ×4.6 mm,5 μm) 色谱柱; 流动相乙腈-1%冰醋酸;流速1.2 mL/min;柱温40 ℃;检测波长龙血素A 和龙血素B 为270 nm,7,4'-二羟基黄酮、紫檀茋和白藜芦醇为300 nm.结果 5 个有效成分在35 min 内均形成了基线分离,线性关系良好(r≥0.999 7).龙血竭中龙血素A,龙血素B,7,4'-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的平均回收率分别为101.9%,95.81%,96.29%,101.7%,102.7%,RSD分别为0.21%,1.4%,0.39%,0.57%,0.33%; 龙血竭提取物中龙血素A,龙血素B,7,4'-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的平均回收率分别为101.2%,97.23%,96.09%,101.0%,102.3%,RSD 分别为1.5%,0.91%,1.3%,1.4%,1.3%.结论 采用HPLC 同时测定法效率高、操作简便、准确率高,重复性和稳定性良好,大大提高了龙血竭及其提取物的研究效率,对其学科发展有重要意义.
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HPLC-DAD法对通络活血胶囊中非法使用龙血竭的鉴别
目的 建立通络活血胶囊及类似制剂中非法使用龙血竭的鉴别方法.方法 采用HPLC法对该制剂中非法使用龙血竭成分进行检测,并使用二极管阵列检测器(DAD)辅助定性.结果 该法可以准确鉴别出制剂中是否含有龙血素A和龙血素B,进而确定是否使用了龙血竭,并与血竭能够很好地区分.结论 HPLC-DAD法准确、专属,可作为检测此类制剂非法使用龙血竭的参考依据.
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高效液相色谱法测定骨复康胶囊中龙血素A的含量
目的 建立骨复康胶囊中龙血素A的含量测定方法.方法 采用HPLC法测定骨复康胶囊中龙血素A的含量.Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;甲醇-1%冰醋酸溶液(55:45)为流动相;检测波长为280 nm;流速为1.0 l/min;柱温:35℃.结果 龙血素A在0.476～4.284 μg 范围内呈现良好的线性关系;回收率为99.51%,RSD为0.78%(N=6).结论 该方法简便、准确,重现性好,可用于骨复康胶囊的质量控制.
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HPLC-DPPH评价剑叶龙血树中抗氧化活性成分及构效关系
目的 采用HPLC-DPPH法评价剑叶龙血树主要成分的抗氧化活性并分析其构效关系.方法 采用HPLC法测定剑叶龙血树中白藜芦醇、龙血素A、龙血素B、紫檀芪、7,4’-二羟基黄酮,色谱条件:Phenomenex lura C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长306 nm.通过对比剑叶龙血树药材溶液加1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)反应前后的各化合物色谱峰面积衰减情况,以各化合物峰面积比值计算清除率,评价各化合物抗氧化活性.结果 二苯乙烯类、二氢查耳酮类成分为剑叶龙血树中主要抗氧化活性成分;抗氧化能力强弱依次为紫檀芪(清除率73.19％)＞白藜芦醇(清除率71.10％)＞龙血素B(清除率39.01％)＞龙血素A(清除率12.14％).从构效关系上分析,二苯乙烯类化合物,当羟基甲基化后,其抗氧化能力并未减弱;二氢查耳酮类化合物,苯环上甲氧基取代成对称结构有助于发挥其抗氧化能力;而仅有C-7,4’位羟基取代的黄酮类化合物未显示抗氧化活性.结论 建立的HPLC-DPPH评价方法能量化表达剑叶龙血树中主要抗氧化成分,为筛选药效指标成分及建立全面谱-效相关质量标准奠定基础.
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一测多评法测定龙血竭中5种有效成分
目的 建立龙血竭中5种有效成分的一测多评法,探讨一测多评法在龙血竭质量控制中的应用.方法 采用高效液相色谱法,使用Fortis Xi C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-1.0％冰醋酸水溶液(B),梯度洗脱,0～10 min,25％～30％A;10～60 min,30％～50％A,体积流量1.0 mL/min;检测波长278 nm;柱温30℃;进样量10 μL.以紫檀芪为内参,分别建立7,4'-二羟基黄酮、白藜芦醇、龙血素A和龙血素B相对于紫檀芪的相对校正因子,分别采用外标法和一测多评法测定5种成分的量,并比较二者结果的相对误差.结果 7,4'-二羟基黄酮质量浓度在10.23～102.27 μg/mL、白藜芦醇质量浓度在11.01～110.14μg/mL、龙血素A质量浓度在9.47～94.72 μg/mL、龙血素B质量浓度在11.59～115.90μg/mL、紫檀芪质量浓度在24.35～243.52 μg/mL线性关系良好;4种化学成分相对于紫檀芪的相对校正因子分别为0.626、1.064、1.154、0.837;且在不同实验条件下耐用性良好(RSD＜3.0％);一测多评法的计算结果与外标法测得结果无显著差异.结论 建立的一测多评法可作为龙血竭中5种有效成分的测定方法,一测多评法为龙血竭质量控制提供了新的模式与方法.
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基于指纹图谱分析和多成分同时定量的龙血通络胶囊质量评价研究
目的 建立龙血通络胶囊指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价龙血通络胶囊提供依据.方法 采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长为280、325 nm.测定10批次龙血通络胶囊,建立指纹图谱,同时采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认及对部分特征峰进行定量分析.结果 得到分离度、重复性均较好的龙血通络胶囊指纹图谱,标示出18个共有峰,相似度在0.92以上;采用LC-Q-TOF/MS方法指认了16个共有峰,其中7个共有峰经对照品比对,分别为白藜芦醇、7,4'-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、紫檀茋、2,6-二甲氧基-4,4'-二羟基二氢查耳酮和2-甲氧基-4,4'-二羟基二氢查耳酮,并对这7个成分进行了定量分析,平均回收率在98.47％～101.93％(RSD均小于2.27％).结论 同时对龙血通络胶囊指纹图谱和7个指标成分进行分析,方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一.
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散结镇痛胶囊中酚酸类成分的指纹图谱研究和多指标成分定量测定
目的 建立散结镇痛胶囊中酚酸类成分的UPLC指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价散结镇痛胶囊提供依据.方法 采用UPLC法,色谱柱为Phenomenex Kinetex 2.6 μm C18 100A柱,乙腈-水梯度洗脱,体积流量为1.7 mL/min,柱温40℃,检测波长为280、325 nm.结果 得到分离度、重现性均较好的散结镇痛胶囊酚酸类成分UPLC指纹图谱,标示出15个共有峰,各批次样品相似度均在0.96以上;通过对照品比对,确定了5个成分,分别为白藜芦醇、7,4’-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B和紫檀芪,并对其进行定量分析.结论 同时对散结镇痛胶囊中酚酸类成分进行UPLC指纹图谱和5个指标成分分析,方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一.
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不同产地龙血竭中5种成分的HPLC法测定
目的 建立龙血竭的5种成分定量分析方法,为科学评价和有效控制龙血竭的质量提供依据.方法 采用Phenomenex Kinetex C18柱(100 mm×4.6 mm,2.6 μm),以乙腈-水梯度洗脱,体积流量:1.7 mL/min,柱温:40℃,检测波长为280nm和325 nm.结果 白藜芦醇、7,4′-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B和紫檀芪分别在7.76～248.4 μg/mL (r=0.999 9)、6.84～219 μg/mL (r=1.000 0)、5.75～184 μg/mL (r=1.000 0)、10.08～322.6 μg/mL (r=1.000 0)和23.71～758.6 μg/mL (r=0.999 8)呈良好的线性关系,平均回收率分别为97.61％、99.24％、102.72％、101.75％、102.65％,RSD值分别为1.16％、0.87％、0.86％、0.49％、1.10％.结论 本方法快速、简便、准确,其结果可为龙血竭质量标准的制定提供一定的依据.
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龙血素A对白色假丝酵母菌毒力因子ALS3、SAP4作用的体外研究
目的 研究龙血素A对白色假丝酵母菌生物膜的抑菌作用,并初步研究龙血素A是否通过影响或干扰白色假丝酵母菌毒力因子的转录和表达实现的.方法 建立白色假丝酵母菌生物膜体外模型,MTT法计算龙血素A对白色假丝酵母菌生物膜的抑制率;激光共聚焦观察龙血素A对不同时间白色假丝酵母菌生物膜的抑菌效果;RT-PCR技术检测药物作用下白色假丝酵母菌毒力因子表达水平的变化.结果 随着药物浓度的增加,龙血素A对白色假丝酵母菌生物膜的抑菌作用增强.激光共聚焦观察显示龙血素A使白色假丝酵母菌生物膜内活菌死菌比例下降.RT-PCR结果表明龙血素A抑制了毒力因ALS3、SAP4的表达.结论 龙血素A对白色假丝酵母菌生物膜有抑制作用,并在毒力因子ALS3、SAP4的表达过程中起到明显的抑制作用.
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HPLC法同时测定龙血竭片中龙血素A和白藜芦醇
目的 建立HPLC法同时定量测定龙血竭片中龙血素A和白藜芦醇.方法 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈(A)-1％冰醋酸(B)进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长260nm,柱温35℃,用外标法定量.结果 龙血素A在0.02～0.64 μg范围有良好的线性关系(r2 =0.999 1),平均加样回收率为101.8％,RSD为1.8％；白藜芦醇在0.02 ～0.70 μg范围有良好的线性关系(r2 =0.999 8),平均加样回收率为104.2％,RSD为0.8％.结论 本方法操作简便,结果准确,可同时测定龙血素A和白藜芦醇的量.
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生肌化瘀膏质量标准研究
目的:建立生肌化瘀膏(龙血竭、大黄、当归、等)的质量标准.方法:采用TLC法对处方中龙血竭、大黄和当归进行定性鉴别,采用HPLC法测定制剂中龙血素A和龙血素B的含量.结果:TLC能特异性地鉴别龙血竭、大黄和当归.龙血素A进样量在3.65～365 μg/mL范围内,线性关系良好,回归系数r=0.999 9(n=7),平均回收率为100.3,RSD为1.33(n=6);龙血素B进样量在3.62～362μg/mL范围内,线性关系良好,回归系数r=0.999 9(n=7),平均回收率为99.1,RSD为1.50(n=6).结论:该法专属性强,简便,准确,可作为控制生肌化瘀膏质量的方法.
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不同工艺提取的龙血竭中龙血素A、B的含量的测定
目的:测定不同提取工艺提取的龙血竭中龙素A和龙血素B的含量.方法:采用HPLC法,以C18反相键合硅胶为固定相,乙腈-1%冰醋酸(34:66)为流动相,检测波长为280nm,用外标法定量.结果:龙血素A在98～490ng范围有良好线性关系,r=0.9996,方法平均回收率为97.45%,RAD为1.82%.龙血素B在43.2～259.2 ng范围有良好线性关系,r=0.9993,方法平均回收率为96.92%,RSD为1.57%.免加热工艺提取的龙血竭中龙血素A和龙血素B含量匀高于传统工艺提取的血竭.结论:免加热工艺为一种独创的、提取率高的新技术,具有推广价值.
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龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响
目的:观察龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响.方法:采用龙血素A与MCF-7细胞体外共培养(药物组)干预手段,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;免疫荧光检测细胞增殖标志性蛋白Ki67 的表达;免疫印迹检测凋亡调节蛋白Bax、Bcl-XL/S的表达;annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果:与对照组相比,药物组细胞增殖受到明显抑制,且存在浓度及时间依赖性;药物组Ki67表达显著减少,Bax表达明显增加,Bcl-XL/S表达明显减少;细胞凋亡率增高,上述指标间比较差异均有统计学意义.结论:龙血素A对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用.
