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紫檀芪对长波紫外线辐射所致人成纤维细胞急性光损伤的保护作用
目的 探讨紫檀芪(pterostilbene)对长波紫外线(UVA)辐射所致的人成纤维细胞急性损伤的保护作用,初步分析其分子机制.方法 TTI法测定紫檀芪对人皮肤成纤维细胞活力的影响,紫檀芪与人皮肤成纤维细胞共培养24h后,以20J/cm2的UVA剂量进行照射,然后采用乳酸脱氢酶释放法测定细胞活力,DCFH-DA测定胞内活性氧(cellular reactive oxygen species,ROS)水平,彗星实验检测DNA损伤,Western印迹检测核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白细胞定位以及siRNA沉默Nrf2.结果 与对照相比,UVA照射后乳酸脱氢酶相对释放率增加为164.53％(P＜0.001).而UVA照射前4μmol/L和8 μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则细胞乳酸脱氢酶相对释放率分别恢复到对照组的100.11％ (P ＞0.05)和98.69％ (P ＞0.05).流式细胞术分析显示,经UVA辐照后,其ROS水平上升至对照细胞的264.4％(P＜0.001),UVA照射前4μmol/L紫檀芪预处理细胞24h,则活性氧(ROS)水平恢复至对照细胞的113.50％ (P＜0.05).彗星实验结果显示,空白对照组细胞的尾部DNA百分比为(1.795±2.147)％,UVA辐照组为(65.50±12.418)％,与空白对照组相比DNA损伤显著增加(t =40.68,P＜0.000 1);而紫檀芪预处理后再接受UVA辐照组为(13.53±8.152)％,与UVA辐照组相比其DNA损伤显著减轻(t=27.85,P＜0.000 1).紫檀芪处理提高了细胞核中的Nrf2蛋白水平.转染siRNA-Nrf2后,细胞活性与对照细胞差异无统计学意义(P＞0.05),但经UVA照射,紫檀芪的预处理细胞活性为对照组的35.32％ (P ＜0.000 1),紫檀芪的保护作用显著降低.结论 紫檀芪能有效防御UVA所致成纤维细胞急性光损伤.这种保护作用可能与紫檀芪激活Nrf2信号通路相关.
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UVA诱导人皮肤成纤维细胞光老化模型中miR-222的调节作用
目的 探讨miR-222在长波紫外线(UVA)诱导的光老化模型中的调节作用.方法 分离并培养人皮肤成纤维细胞(HDFs),用0,2.5,5.0和7.5J不同剂量UVA辐射诱导光老化模型,用实时定量PCR和Western-blot分别检测miR-222和基质金属蛋白酶1(MMP1)的表达情况.用miR-222的功能模拟物和miR-222的功能抑制物分别转染HDFs,检测MMP1表达情况.对HDFs细胞分别转染miR-222功能模拟物、miR-222阴性对照物、miR-222功能抑制物和miR对照的功能抑制物,转染24h后予UVA辐射诱导光老化模型,检测MMP1表达情况.结果 HDFs经不同剂量UVA辐射后,MMP1表达与对照组相比显著升高(P＜0.01),同时miR-222表达与对照组相比显著降低(P＜0.01).miR-222转染HDFs后再予UVA辐射,miR-222转染组MMP1表达显著低于miR对照组(t=5.616,P＜0.05),而miR-222抑制物转染组MMP1表达与miR对照组相比无显著的改变.结论 人皮肤成纤维细胞光老化模型中UVA辐射可导致miR-222表达降低,从而上调MMP1表达.
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长波紫外线对体外人纤维细胞急性损伤后细胞凋亡的影响
目的 探讨UVA致HSF急性损伤后对细胞增殖、凋亡的影响方法采用辐照剂量分别为0 J·cm–2、5J·cm–2、10 J·cm-2、20J·cm-2的UVA照射,造成HSF急性损伤,通过MMT、PI染色法进行细胞增殖与凋亡检测结果.随着UVA照射剂量的增加,细胞增殖活性呈明显降低趋势(r=-0.791,P=0.000).随着UVA照射剂量的增加,细胞凋亡率呈明显增加趋势(r=-0.969,P=0.000).
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枸杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤光老化模型保护机制
目的：探讨不同浓度枸杞叶(LBL)含药血清对长波紫外线(UVA)辐射致人真皮成纤维细胞(HSF)损伤的防护机制方法采用强度10J2cm -2的UVA照射损伤HSF造模,实验分为空白组、对照组、UVA模型组、空白血清组、UVA +高剂量LBL组、UVA +低剂量LBL组和UVA +VitC组。显微镜观察HSF形态，用MTT法检测细胞增殖活性,衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色法计算衰老细胞率结果与空白组比较，UVA照射HSF损伤法可造成细胞增殖活性降低，衰老率增高(P均<0.01)；与UVA+空白组比较，各含药血清组细胞活性增高，细胞衰老率降低(P均<0.01)。结论： LBL通过提高细胞增殖活性，降低衰老率发挥其保护HSF光损伤的机制。
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枸杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤光老化模型细胞I型胶原及MMP-1表达的调节作用
目的：探讨不同浓度枸杞叶(LBL)含药血清对长波紫外线(UVA)辐射致人真皮成纤维细胞(HSF)损伤的防护作用及分泌 COL1、MMP-I 的调节作用影响。方法采用强度10J2cm-2的UVA照射损伤HSF造模,显微镜观察HSF形态，酶联免疫吸附试验检测MMP-1及COL1含量。结果与空白组比较，UVA照射HSF损伤法可造成MMP-1含量增加，1型胶原含量降低,(P均<0.01)；与UVA+空白组比较，各含药血清组MMP-1表达降低，1型胶原表达升高，(P均<0.01)；与UVA+VitC组比较，各LBL组1型胶原含量升高， MMP-1含量降低(P均<0.05)；结论： LBL通过改善调节1型胶原及MMP-1的含量发挥其保护HSF光损伤的机制。
