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五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA氧化损伤的保护作用研究
基于Nrf2/HO-1通路和碱基切除修复(BER)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA氧化损伤的保护作用.将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1g·kg-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg-1),2月龄SD大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只.给予普通饲料或含药饲料饲养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用.采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;免疫荧光检测睾丸组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达和定位;Westernblot法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达水平,BER相关蛋白脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)和X线修复交错互补基因1(XRCC1)表达的变化情况.结果显示,五子衍宗方能显著提高睾丸SOD活力,降低MDA含量;免疫荧光结果显示,五子衍宗方能明显上调Nrf2的表达,下调8-OHdG的表达;Western blot结果显示,五子衍宗方能显著上调Nrf2,HO-1,NQO1的蛋白表达,显著下调APE1,OGG1,XRCC1的蛋白表达水平.综上所述,五子衍宗方可通过调节Nrf2/HO-1和碱基切除修复通路减轻自然衰老大鼠睾丸DNA氧化损伤.
关键词： 五子衍宗方 Nrf2/HO-1通路 碱基切除修复(BER) 衰老 睾丸 DNA损伤 -
毛蕊异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制研究
[目的]明确毛蕊异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制.[方法]使用Langendorff装置制备心肌缺血再灌注损伤模型,实时监测心功能参数,并检测冠脉流出液中冠脉流量(CK)、心功能参数(LDH)以及心脏组织中MDA和SOD水平;TTC染色方法观察组织病理学损伤;采用Western Blot考察毛蕊异黄酮对氧化应激状态下的Nrf2、HO-1、AKT、ERK蛋白表达影响.[结果]毛蕊异黄酮能显著增加缺血再灌注损伤模型大鼠心脏冠脉流量、左室发展压和大上升/下降速率的变化率,从而改善大鼠心功能.同时降低冠脉流出液中CK、LDH水平和心肌组织中两二醛(MDA)含量,增加超氧化物歧化酶(SOD)、琥珀酸脱氢酶(SDH)等抗氧化酶的活力;并通过激活Nrf2基因,从而调节其下游的抗氧化基因.[结论]毛蕊异黄酮通过激活Nrf2/HO-1信号通路发挥抗氧化应激作用,进而改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,发挥保护心肌作用.
关键词： 毛蕊异黄酮 缺血再灌注 Nrf2/HO-1通路 -
黄芩素-7-甲醚对缺氧致PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究黄芩素-7-甲醚对缺氧PC12细胞的保护作用.方法 将PC12细胞分为正常对照组、缺氧模型组、芦丁组和黄芩素-7-甲醚组,培养24 h后,MTT法检测黄芩素-7-甲醚对细胞活力的影响;酶标仪法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性以及细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平;2',7’-二氯荧光素探针法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;实时荧光定量PCR和Westemblot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1 (heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA和蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,缺氧导致PC12细胞活力显著降低,LDH、MDA和ROS水平显著升高,抗氧化酶SOD和CAT的活力显著降低.黄芩素-7-甲醚预处理能够逆转这些变化.此外,缺氧能够诱导细胞内Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达增加,而黄芩素-7-甲醚能够进一步提高Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达.结论 黄芩素-7-甲醚对缺氧致PC12细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路,抑制氧化应激损伤有关.
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抑制Kupffer细胞功能对梗阻性黄疸大鼠肝功能的保护作用及其机制
目的:探讨抑制Kupffer细胞的功能对梗阻性黄疸大鼠肝脏Nrf2/HO-1通路的影响和保护肝功能的机制.方法:雄性Wistar大鼠60只,采用数字随机表法将大鼠平均分为6组:假手术组(SHAM组)、假手术+氯化钆处理组(SHAM+ GdCl3组)、梗阻性黄疸7d组(BDL-7D组)、梗阻性黄疸7d+氯化钆处理组(BDL-7D+GdCl3组)、梗阻性黄疸14 d组(BDL-14D)、梗阻性黄疸14 d+氯化钆处理组(BDL-14D+ GdCl3组).在梗阻性黄疸模型建立24 h后由大鼠尾静脉注射氯化钆(GdCl3,20 mg/kg).在相应时间点检测各组大鼠血清检测门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP);肝组织匀浆检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western Blot及免疫组织化学法检测肝组织Nrf2、HO-1蛋白表达情况;肝组织HE染色观察病理变化.结果:AST、ALP、TBIL三个指标在SHAM组、BDL-7D组、BDL-14D组依次增高(P＜0.05),SHAM组与SHAM+GdCl3组未见明显差异;AST、TBIL两个指标在GdCl3干预的梗阻性黄疸组要低于相应的梗阻性黄疸组(P＜0.05),但ALP则未见明显差异.Western Blot结果显示Nrf2及HO-1的表达在SHAM组、BDL-7D组、BDL-14D组的依次增强,且差异均有统计学意义(P＜0.05),在GdCl3干预的梗阻性黄疸组要高于相应的梗阻性黄疸组(P＜0.05),但SHAM+GdCl3组与SHAM组未见明显差异.免疫组化染色结果也显示:SHAM组的Nrf2及HO-1蛋白均只有少量阳性表达.BDL组和BDL+ GdCl3组阳性表达细胞数均较SHAM组与SH AM+ GdCl3组明显增多(P＜0.05),而且相对应的用氯化钆干预的大鼠肝脏Nrf2及HO-1表达要高于对照组.肝脏HE染色结果示:SHAM组和SHAM+ GdCl3组的肝组织未见异常;BDL-7D组肝细胞水肿,肝血窦扩张,肝细胞索排列紊乱,BDL-7D+GdCl3组的表现和BDL-7D组的表现相似但程度较轻;BDL-14D组出现片状坏死灶,汇管区明显增生,而BDL-14D+GdCl3组则表现为中央静脉周围肝细胞水肿,汇管区也明显增生.结论:抑制Kupffer细胞功能对梗阻性黄疸大鼠肝脏有保护作用,其机制可能是抑制炎症反应和上调抗氧化应激Nrf2/HO-1通路的蛋白表达来保护肝功能.
关键词： Kupffer细胞 梗阻性黄疸 肝损害 抗氧化应激 Nrf2/HO-1通路 -
Nrf2/HO-1通路在氧化损伤保护机制中研究进展
Nrf2[NF-E2(Nuclear factor-erythroid 2)related factor 2]属于转录因子亮氨酸拉链转录激活因子(CNC)家族成员,为细胞防御多种应激损伤的关键因子[1].Nrf2是诱导Ⅱ相酶基因表达的必需调节因子[2].Ⅱ相酶中的血红素加氧酶-1(HO-1)对细胞具有保护作用,它可催化血红素产生胆绿素、一氧化碳(CO)和铁,胆绿素可形成胆红素,二者在体内是强有力的自由基清除剂.本文通过介绍氧化损伤的形成和保护机制,并对Nrf2/HO-1通路在氧化保护中的重要作用进行综述.
关键词： Nrf2/HO-1通路 氧化损伤 氧化保护 氧化应激
