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鸦胆子蛋白质组成分析及其酶解物细胞毒性研究
对鸦胆子进行蛋白质组成分析,并对其球蛋白酶解物细胞毒性进行研究.采用顺序抽提法提取鸦胆子清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4类蛋白组分,并用凯氏定氮法进行定量;采用不同种蛋白酶水解鸦胆子球蛋白,MTT法考察其小分子量(≤3 kDa)酶解物对人乳腺癌MCF-7的细胞毒性.结果表明:鸦胆子总蛋白含量为17.47％,清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白和残渣蛋白分别占总蛋白含量的15.01％,8.11％,2.47％,44.92％,23.62％;球蛋白的胃蛋白酶酶解物(≤3 kDa)对人乳腺癌MCF-7具有显著的细胞毒性,且作用72 h后,IC50为(6.52 ±0.01)mg·L-1.鸦胆子蛋白质含量较为丰富,其多肽组分具有明确的体外细胞毒性,可进一步开发抗肿瘤活性成分.
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鸦胆子球蛋白酶解物对黑色素瘤细胞毒性研究
目的:优化鸦胆子球蛋白提取工艺,采用酶解法获得多肽组分,并对其细胞毒性进行研究.方法:运用L,9(33)表设计正交试验,筛选球蛋白提取佳工艺参数,等电点法浓缩蛋白;采用不同蛋白酶水解球蛋白,经超滤(MWCO=3 kDa)后收集滤过液,MTT法考察小分子量酶解物对鼠源黑色素瘤B16的细胞毒性.结果:球蛋白佳工艺参数为:NaC1浓度5％、提取时间1.5h、固液比1:12;胃蛋白酶为优蛋白酶源,其水解产物(≤ 3 kDa)对B16细胞具有显著的细胞毒性,72 h时,IC50为1.08 μg·mL-1.结论:鸦胆子球蛋白源多肽组分具有明确的体外细胞毒性,有望进一步从中获得高活性抗肿瘤肽.
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抗肿瘤多肽的研究新进展
抗肿瘤多肽具有分子质量小、特异性高、免疫原性低、生物利用度高等优点,且易于合成和改造,其在肿瘤治疗领域的应用研究近年来受到广泛关注.目前,已有多种抗肿瘤多肽及其衍生物上市或进入临床研究,对于肿瘤的临床治疗具有重要价值.综述抗肿瘤多肽在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤细胞生长和转移以及用作疫苗和药物载体等方面的研究新进展.
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文蛤多肽抑制肿瘤细胞微管蛋白聚合
目的 探讨文蛤多肽( Mere15)抑制人肺癌A549细胞增殖作用及其机制.方法 MTT比色法检测细胞增殖抑制率；流式细胞仪分析细胞周期分布的变化；微管蛋白免疫荧光检测技术检测Mere15对微管蛋白聚合的影响；Western blot检测Mere15对p21蛋白表达的影响.结果 Mere15可抑制A549细胞生长,抑制率呈剂量和时间依赖性；随着处理时间的增加,A549细胞G2/M期比例逐渐升高,微管蛋白聚合受到抑制,p21蛋白表达水平逐渐升高.结论 Mere15具有抑制A549细胞增殖的作用,其机制可能与抑制微管蛋白聚合有关.
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抗肿瘤多肽TAT-N15p55PIK表达和纯化方法的改进及其应用
[目的]改进原核蛋白纯化方案,纯化抗肿瘤多肽TAT-N 15p55PIK.[方法]通过SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色和灰度扫描,筛选纯化蛋白适合的菌株、确定目的蛋白浓度和纯度的准确检测方法,以及佳诱导浓度.以咪唑洗脱,PBS透析和去除内毒素等方法,研究融合蛋白佳纯化方案.以细胞免疫荧光和5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法检测经纯化的融合蛋白对间质肿瘤细胞增殖的影响.[结果]筛选出适蛋白表达菌株；确定1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)为佳的蛋白诱导表达浓度；以BCA法和SDS-PAGE灰度扫描相结合的方法测定纯化蛋白的浓度及纯度；通过改进后的纯化步骤,融合蛋白纯度从36％提高为61％,浓度从0.72μg/μl提高为1.5μg/μl,可100％转导入Hela细胞,转导入T淋巴细胞白血病细胞Jurkat 48h能够显著抑制细胞增殖,抑制率为20.31％(P＜0.01).[结论]经纯化的TAT-N 15p55PIK具有一定的抑制间质肿瘤细胞增殖的能力,为融合蛋白TAT-N 15p55PIK的抗肿瘤临床应用奠定了重要的工作基础.
关键词： 抗肿瘤多肽 TAT-N15p55PIK 蛋白纯化 肿瘤治疗 -
多肽 AP25与多西他赛联合用药对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制活性研究
目的：检测多肽 AP25与多西他赛联合使用治疗实验性乳腺癌的活性是否优于单用两种药物的活性，为临床合理用药提供依据。方法建立人乳腺癌 MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型，以多西他赛（10 mg·kg －1）和多西他赛（5 mg· kg －1）为阳性对照，观察 AP25单用及与多西他赛联合应用对肿瘤生长的抑制作用，用金氏公式计算 Q 值，评价联合用药的作用效果。结果动物实验表明，AP25与多西他赛联合使用抑瘤率明显提高，AP25（20 mg·kg －1）与多西他赛（10 mg·kg －1）联合使用具有较明显的抑制 MDA-MB-231肿瘤生长的作用，0.85＜Q ＝0.99＜1.15，联合作用为相加；AP25（20 mg·kg －1）与多西他赛（5 mg·kg －1）联合使用具有明显抑制 MDA-MB-231肿瘤生长的作用，Q ＝1.18＞1.15，联合作用为协同。结论多肽 AP25与多西他赛联合用药明显抑制肿瘤生长，两种药物联合使用可以降低多西他赛的给药剂量，从而降低毒副作用。
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蝎毒抗肿瘤多肽对小鼠肝癌细胞H22及移植瘤的抑制作用
目的观察纯化蝎毒抗肿瘤多肽(APBMV),＜3500kD灌胃对小鼠肝癌H22动物移植瘤的抑制作用及对H22细胞的体外抑制杀伤作用.方法将接种H22的带瘤小鼠分为对照组、环磷酰胺治疗组和纯化蝎毒抗癌多肽治疗组.其中APBMV浓度1.2mg/ml、0.8mg/ml,以0.5ml灌胃,给药10d后处死,取实体瘤称重并计算肿瘤生长抑制率.采用噻唑蓝(MTT法)、集落形成抑制实验,用丝裂霉素C(MMC)为阳性对照药品,以蝎毒提取物SVC I、SVCⅡ、SVCⅢ、SVCⅣ各组分(浓度分别为45μg/ml、60μg/ml、75μg/ml、90μg/ml),分别处理人大肠癌细胞H22,观察H22的生长情况.结果 APBMV在应用的前两个剂量范围内对H22移植瘤有明显的抑制作用,抑制率大于50%,与对照组比较差异显著(P＜0.05),三个不同剂量组之间差异亦显著,有明显的量效关系.SVCⅢ对Lovo细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组,与对照组差异显著(r=0.98,P＜0.01),SVCⅠ、SVCⅡ、SVCⅣ对细胞H22的影响,在所用药物浓度内与对照组比较,无显著性差异,细胞毒性作用不显著.结论口服APBMV能有效的抑制H22移植瘤的生长和对H22细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用.
