基于特征碎片离子的质谱导向策略用于中药白鲜皮中喹啉类生物碱成分的追踪分离

白鲜皮作为一味传统中药,常应用于中药复方、临床以及实验研究中.喹啉类生物碱为其中一类主要活性成分,具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、抗血小板聚集等多种活性.该研究首先对白鲜皮中生物碱成分进行化学分离,得到8个喹啉类生物碱(1～8),发现常规化学分离手段已难以再分离得到喹啉类生物碱成分,期望通过建立质谱分析策略用于指导靶向性获得白鲜皮分离剩余部分Fr.8中更多喹啉类生物碱成分.该研究基于超高效液相色谱-电喷雾离子源串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS),以白鲜皮中分离得到的8个喹啉类生物碱为对照品,研究该类成分的裂解规律,基于其特征离子m/z 200建立母离子扫描策略,再用于剩余部分Fr.8中喹啉类生物碱的靶向分析与分离,终又得到2个喹啉类生物碱8-methoxyflindersine (9)和N-metilatanina(10),其中化合物10为首次从该属植物中分离得到.结果表明,该方法不仅能快速、灵敏地对白鲜皮中喹啉类生物碱成分进行分析,还能够有效指导目标化合物的分离.

基于物质基础评价不同干燥工艺对天舒胶囊质量的影响

从天舒胶囊所含化学成分的角度,考察热风循环干燥、喷雾干燥2种干燥方式对天舒胶囊质量的影响,运用UPLC-DAD技术首次建立天舒胶囊UPLC指纹图谱,并通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对其主要成分进行鉴定,共鉴定出62个化合物,其中21个化合物为首次在天舒胶囊中被报道.实验表明这2种干燥方式对天舒胶囊中化学成分的种类无影响,但在部分成分的含量上有差别;且以10批热风循环干燥样品生成的共有模式作为对照图谱,喷雾干燥样品的指纹图谱相似度为0.877,2种干燥方式样品的指纹图谱相似程度很高.该研究首次采用UPLC-DAD技术结合UPLC-Q-TOF-MS/MS技术快速、全面、准确评价不同干燥方式下天舒胶囊化学成分的差异,为天舒胶囊质量评价提供依据.

采用UPLC-ESI-MS/MS以及主成分聚类分析研究不同品种金银花的化学成分及其差异

建立快速定性鉴别7个不同品种金银花药材中化学成分的UPLC-ESI-MS/MS方法.采用AcQuity UPLC TM BEH C18色谱柱,流动相采用乙腈和0.1%乙酸,梯度洗脱17 min.检测到33个化学成分,并且分离良好.其中6个咖啡酰奎尼酸类(包括咖啡酸)、8个黄酮类以及8个环烯醚萜类化学成分的结构通过与标准品对照或根据其质谱裂解模式得到进一步确认.在此基础上采用主成分分析法对7个品种的金银花进行分类研究.以经对数转换的主要咖啡酰奎尼酸类(包括咖啡酸)的相对含量作为变量,不同品种金银花药材得到了较好的分类.结果表明,本方法适用于不同品种金银花的化学成分及其差异的研究并对其进行分类.

UPLC-ESI-MS/MS法测定八子补肾胶囊中14种成分的含量

建立UPLC-ESI-MS/MS法测定八子补肾胶囊中14种成分的含量.Waters ACQUITY BEH C18柱(50mm×2.1 mm,1.7 μm),柱温为40℃;流动相为A(乙腈)-B(0.1％乙酸),梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI源),源温度为150℃,毛细管电压为2.0 kV,离子源补偿电压为50 V,脱溶剂气温度为500℃,脱溶剂气流量为800 L·h-1,锥孔气流量为150 L·h-1,雾化气压力为7.0 Bar(1 Bar=100 kPa),接口处加热,采用多反应监测模式.在本方法条件下,14种成分的线性关系良好(r2≥0.999 1),定量限为0.11～4.52 ng·mL-1.精密度为0.8～2.1％.平均回收率范围为97.89％～101.9％.该方法操作简便、快速、准确度高、重现性好,可用于八子补肾胶囊的质量控制.

海洋细菌Bacillus licheniformis中环脂肽类化合物的结构鉴定

从海洋细菌Bacillus licheniformis代谢产物中首次分离得到2个新表面活性肽(1,2),以及2个已知化合物(3,4).应用现代NMR技术解析了它们的化学结构,并应用化学与色谱相结合方法确定了氨基酸的构型.论文还探讨该类化合物的质谱裂解规律,为环脂肽类化合物的结构解析提供了快速分析方法.

UPLC-ESI-MS/MS法研究注射用复方荭草在大鼠体内的排泄

目的 建立UPLC-ESI-MS/MS法同时测定大鼠尿液、粪便和胆汁中原儿茶酸、异荭草素、野黄芩苷、荭草素、牡荆素、木犀草苷和槲皮苷7种物质的分析方法,并对注射用复方荭草(荭蓼、灯盏细辛等)在大鼠体内的排泄规律进行研究.方法 生物样本经甲醇处理,采用Waters Acquity BEH C18色谱柱,乙腈-0.1％甲酸水为流动相,电喷雾离子化,多反应离子监测,分别测定大鼠静脉注射注射用复方荭草后排泄物中7种原形成分.结果 7种成分在大鼠尿液中呈良好线性关系,日内、日间精密度和准确度良好.大鼠静注40 mg/kg注射用复方荭草后,分别有4.98％～22.58％的原形成分在尿液中排出,在粪便及胆汁中各原形药物的浓度均低于低定量限,同时在各排泄物中可检测出相关的代谢产物.结论 该方法特异、快速、灵敏,可用于注射用复方荭草在大鼠体内的排泄研究,该药物在大鼠体内有较广泛的代谢途径,原形药物排出量较少.

UPLC-ESI-MS/MS法分析藤黄炮制前后化学成分的变化

目的 建立超高效液相色谱-电喷雾-串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)法研究藤黄Garcinia hanburyi炮制(高压、豆腐、清水、荷叶制)前后化学成分的变化.方法 分析采用Acquity UPLC BEH C8(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液,梯度洗脱;柱温为35℃;体积流量为0.3 mL/min.主成分分析(PCA)和偏小二乘判别(PLS-DA)法分析炮制前后化学成分的差异.结果 炮制前后,藤黄中化学成分的种类没有明显变化.当加热超过2h,以及豆腐或荷叶炮制后,13种成分的含有量下降,并且gambogenin更为明显.不同炮制方法间存在差异,贡献值依次为gambogenin、莫里林酸、异莫里林酸、R-异藤黄酸、R-30-羟甲基藤黄酸、成分5(未知)、异新藤黄酸、S-30-羟甲基藤黄酸、isogambogenin、S-异藤黄酸、R-藤黄酸、新藤黄酸、S-藤黄酸.结论 不同炮制方法和加热时间对藤黄化学成分有一定影响,其含有量的降低可能是该植物炮制后减毒的原因之一.

UPLC-MS/MS法检测人血浆中莫西沙星浓度

目的 建立快速检测人血浆中莫西沙星浓度的UPLC-MS/MS方法.方法 用乙腈沉淀血浆蛋白的方法处理,运用Waters XEVO TQD三重四级杆液质联用仪,色谱柱为ACQUITY UPLC(R) BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水(含0.1％甲酸),梯度洗脱,流速为0.4 mL·min-1,柱温40℃,内标为左氧氟沙星,质谱条件:电喷雾离子化源(ESI),正离子检测模式;加入200 μL冰乙腈沉淀蛋白,13 000 r·min-1离心10 min,取200 μL上清于进样瓶内,取2 μL上样.结果 莫西沙星的保留时间为1.58 min,线性范围为0.1～10 μg·mL-1(r=0.999 6),低定量限为0.01 μg·mL-1,高、中、低浓度的相对回收率为(96.66±3.8)％,(102.0±1.76)％和(107.2±7.19)％.日内、日间RSD均＜10％,血浆样品体系中的其他内源性物质不干扰测定.结论 该方法准确可靠,操作简便,重复性好,适于检测人血浆中莫西沙星的血药浓度及其药动学研究.

超高效液相串联质谱法快速测定CYP2 C9酶活性

目的：建立一种超高效液相串联三重四级杆质谱法快速测定CYP2C9体外酶学活性检测的新方法。方法：色谱柱为ACQUITY UPLC? BEH C18柱(100 mm ×2.1 mm,1.7μm)；流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸和0.5%氨水)(40∶60),流速为0.2 ml·min-1,柱温30℃,内标为氯磺丙脲；质谱条件：电喷雾离子化源(ESI),正离子检测模式；用实验室制备的CYP2C91,2,3和13酶在37℃孵育甲苯磺丁脲后,加入800μl冰乙酸乙酯终止反应,10000 g离心后取有机层于氮吹仪下吹干并用200μl流动相复溶后上样。结果：4-羟基甲苯磺丁脲的保留时间为1.21 min,线性范围为0.05~5 ng·μl-1(r=0.9998),低定量限为0.01 ng·μl-1,回收率为99.3%~100.3%。4-羟基甲苯磺丁脲的日内、日间RSD均<5%,孵育体系中的其他内源性物质不干扰测定。CYP2C91,2,3和13孵育甲苯磺丁脲后结果显示突变体CYP2C92,3,13的体外酶学活性分别为野生型CYP2C91的47.3%,11%和0.3%。结论：该方法快速、稳定,该方法操作简便,适于CYP2C9的快速活性检测及抑制药等的相关性研究。

基于GC-MS和UPLC-ESI-MS/MS法研究乌药化学成分

目的:研究湖南产乌药化学成分.方法:分别采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用法和液相色谱-质谱(UPLC-ESI-MS/MS)对乌药中挥发油和甲醇提取物的化学成分进行分析.在GC-MS中,以HP-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)为色谱柱,采用程序升温法,EI离子源,扫描质量范围为m/z 35～ 400 amu;在UPLC-ESI-MS/MS中,以Acquity UPLC BH C18(50mm×2.1 mm,1.7 μm)为色谱柱,采用0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,ESI源,扫描质量范围为m/z 100～1 200.结果:利用GC-MS法共鉴定了乌药中68个挥发性成分,主要为单萜类物质.利用UPLC-ESI-MS/MS法在甲醇提取物中共鉴定出42个化合物,其中24个呋喃倍半萜及其内酯、10个生物碱、6个黄烷醇多酚及其缩合物、1个有机酸和1个甾醇类化合物.结论:系统研究了湖南产乌药中的化学成分,为湖南产乌药的药效物质基础及质量控制研究提供一定的理论依据.

A simple and selective ultra performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry (UPLC-ESI-MS/MS) assay was developed for the determination of the human plasma protein binding of four bioactive flavonoids (such as orientin and vitexin) in Polygonum orientale. Protein precipitation was used for sample preparation. Equilibrium dialysis technique was applied to determine the plasma protein binding under physiological conditions. The separation was achieved through a Waters C18 column with a mobile phase composed of 0.1%formic acid in acetonitrile and 0.1%aqueous formic acid using step gradient elution at a flow rate of 0.35 mL/min. A Waters ACQUITY?TQD system was operated under the multiple reaction monitoring (MRM) mode of positive electrospray ionization. All of the recovery, precision, accuracy and stability of the method met the requirements. Good correlations (r40.99) of the four compounds were found, which suggested that these compounds can be simultaneously determined with acceptable accuracy. Results showed that the plasma protein bindings of the four bioactive flavonoids were in the range of 74-89% over the six concentrations studied. The binding parameters containing protein binding affinity, protein binding dissociation constant, and protein binding site were studied. The maximum ability to bind with protein was also determined in the assay in order to understand the drug-protein binding of each compound better.