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PLSCR1在苦参碱逆转APL细胞维甲酸耐药中的意义
目的 观察磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1,PLSCR1)在苦参碱(matrine,MAT)诱导维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)耐药急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化的表达,并探讨其与环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)途径的相关性.方法 以ATRA敏感的APL细胞系NB4以及ATRA耐药株NB4-R1为研究对象.通过NBT还原实验以及流式细胞仪(CD11b)检测0.1 mmol/L MAT联合1μmol/LATRA对两细胞株分化标记的影响;采用Western blot、实时荧光定量PCR技术测定细胞PML/RARα、PLSCR1蛋白及基因表达;同时应用PKA拮抗剂H89联合作用,观察细胞分化抗原及上述蛋白/基因表达的变化.结果 MAT联用ATRA能明显提高NB4-R1细胞NBT及CD11b阳性率,并显著下调PML/RARα融合蛋白/基因的表达(P ＜0.05,P＜0.01).单用ATRA能使NB4细胞PLSCR1在蛋白及mRNA水平表达均得到明显增强(P＜0.01),而在NB4-R1细胞内同样表达上调,但仅蛋白水平差异有统计学意义(P＜0.01).在联用MAT后,两细胞株PLSCR1蛋白表达进一步上升(P＜0.01),并且NB4-R1细胞mRNA表达水平差异有有统计学意义(P＜0.05).上述作用均能被10 μmol/L H89逆转(P ＜0.05,P＜0.01).结论 MAT联合ATRA能显著诱导NB4-R1细胞获得再分化,同时抑制PML/RARα融合基因/蛋白的表达,这可能与其上调PLSCR1表达有关.
关键词： 磷脂爬行酶1 蛋白激酶A拮抗剂 苦参碱 急性早幼粒细胞白血病 维甲酸耐药 -
干扰磷脂爬行酶1基因表达对结直肠癌细胞增殖和粘附的影响
目的 探讨PLSCR1在结直肠癌细胞增殖和粘附过程中的作用.方法 常规培养3株结直肠癌细胞,采用免疫细胞染色和免疫印迹法筛选PLSCR1高表达的细胞株.设计三条RNA干扰片段及一条阴性对照片段,稳定转染高表达PLSCR1的结直肠癌细胞株,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法验证干扰结果,筛选出对PLSCR1蛋白抑制率高的干扰片段,通过MTT方法来评估转染后结直肠癌细胞增殖能力的变化,采用细胞粘附实验来评估转染后结直肠癌细胞粘附能力的变化.结果 免疫细胞染色提示LoVo细胞株高表达PLSCR1,与免疫印迹法结果相一致;转染siRNA-390后,LoVo细胞株PLSCR1的mRNA抑制效果为明显,抑制率为88.4％,免疫印迹法检测进一步验证siRNA-390片段抑制PLSCR1蛋白表达为显著.MTT法、纤连蛋白,粘附和层连蛋白检测显示,siRNA-390干扰下调PLSCR1的表达后,细胞生长变缓,粘附能力下降.结论 干扰PLSCR1能显著抑制肿瘤的增殖和粘附能力,提示PLSCR1可能在结直肠癌浸润和转移中具有一定作用.
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磷脂爬行酶1
磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1,PLSCRl)属于Ca2+结合的棕榈酰化Ⅱ型膜蛋白,而非棕榈酰化的PLSCR1蛋白可定位于细胞核内,并与基因组DNA序列结合.初的研究显示,PLSCR1参与细胞膜磷脂跨膜活动.随后的研究发现多种细胞因子如真干扰素、表皮生长因子等和白血病细胞分化诱导剂如全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)、佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)等也能够调节PLSCR1的表达.尤其重要的是,PLSCR1蛋白可与多种蛋白如c-Ab1、EGFR、c-Src、PKCδ和onzin等相互作用,提示PLSCR1在细胞信号传递中的作用.越来越多的证据表明PLSCR1的确参与细胞生长、分化、凋亡过程,并可能与肿瘤尤其与白血病发病学存在关系.
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磷脂爬行酶1在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨磷脂爬行酶1 (PLSCR1)在肝细胞癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化检测44例肝细胞癌组织、癌旁组织及10例正常肝组织中PLSCR1的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征的关系.结果 肝细胞癌组织中PLSCR1阳性表达高于癌旁组织和正常肝组织(P＜0.01),癌旁组织与正常肝组织比较差异无统计学意义(P＞o.05).PLSCR1的表达与肝细胞癌患者HBsAg和TNM分期密切相关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、甲胎蛋白、分化程度及淋巴结转移无明显相关(P＞0.05).结论 PLSCR1在肝细胞癌组织中高表达,可能与肝细胞癌的发生、发展有关.
