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PLSCR1在苦参碱逆转APL细胞维甲酸耐药中的意义
目的 观察磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1,PLSCR1)在苦参碱(matrine,MAT)诱导维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)耐药急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化的表达,并探讨其与环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)途径的相关性.方法 以ATRA敏感的APL细胞系NB4以及ATRA耐药株NB4-R1为研究对象.通过NBT还原实验以及流式细胞仪(CD11b)检测0.1 mmol/L MAT联合1μmol/LATRA对两细胞株分化标记的影响;采用Western blot、实时荧光定量PCR技术测定细胞PML/RARα、PLSCR1蛋白及基因表达;同时应用PKA拮抗剂H89联合作用,观察细胞分化抗原及上述蛋白/基因表达的变化.结果 MAT联用ATRA能明显提高NB4-R1细胞NBT及CD11b阳性率,并显著下调PML/RARα融合蛋白/基因的表达(P ＜0.05,P＜0.01).单用ATRA能使NB4细胞PLSCR1在蛋白及mRNA水平表达均得到明显增强(P＜0.01),而在NB4-R1细胞内同样表达上调,但仅蛋白水平差异有统计学意义(P＜0.01).在联用MAT后,两细胞株PLSCR1蛋白表达进一步上升(P＜0.01),并且NB4-R1细胞mRNA表达水平差异有有统计学意义(P＜0.05).上述作用均能被10 μmol/L H89逆转(P ＜0.05,P＜0.01).结论 MAT联合ATRA能显著诱导NB4-R1细胞获得再分化,同时抑制PML/RARα融合基因/蛋白的表达,这可能与其上调PLSCR1表达有关.
关键词： 磷脂爬行酶1 蛋白激酶A拮抗剂 苦参碱 急性早幼粒细胞白血病 维甲酸耐药 -
姜黄素联合全反式维甲酸诱导耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究
本研究旨在探讨姜黄素联合全反式维甲酸(ATRA)对耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的影响及其分子机制.以耐药的NB4-R1细胞为实验对象,对细胞进行计数和细胞形态学观察,应用流式细胞术(FCM)检测姜黄素单用或联合ATRA对NB4-R1细胞增殖、分化的影响;用Western blot检测AKT磷酸化在细胞分化中的变化.结果显示,全反式维甲酸对NB4-R1细胞增殖无影响,但可增强姜黄素对NB4-R1生长的抑制作用.单用姜黄素或全反式维甲酸对细胞分化无影响,姜黄素联合全反式维甲酸可明显诱导细胞CD11b表达,细胞在形态上呈明显分化特征.全反式维甲酸可在短时间内促进NB4细胞AKT第473苏氨酸磷酸化,而对NB4-R1细胞中的AKT磷酸化影响不大.姜黄素可以促进NB4-R1细胞AKT磷酸化,而联合全反式维甲酸可进一步增强AKT磷酸化.结论:PI3 K/AKT通路失活可能是导致APL细胞耐药的因素之一,而姜黄素通过活化PI3K/AKT信号通路逆转APL耐药,促进NB4-R1细胞分化.
关键词： 姜黄素 急性早幼粒细胞白血病 维甲酸耐药 细胞分化 -
姜黄素诱导维甲酸耐药的NB4-R1细胞凋亡及其机制
为了探讨姜黄素时维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞生长抑制作用及其机制,以耐药的NB4-R1 细胞为实验对象,用MTT法检测细胞生长情况,用光学显微镜观察细胞形态特征,用流式细胞术测定细胞线粒体电位变化.用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平.结果表明,虽然NB4-R1细胞对维甲酸耐药,但对姜黄素的敏感性与对维甲酸敏感的NB4细胞一致,姜黄素至少对NIM-R1细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性.细胞形态学检查显示,经20μg/L姜黄素处理后的细胞内出现凋亡小体.流式细胞术检测发现,NIM-R1细胞经姜黄素处理后线粒体膜电位下降.Western blot检测显示,caspase 3前体表达下降,活化caspase 3表达升高,BCL-XL表达降低,剪切形式的PARP表达水平明显上调.结论:姜黄素能抑制NB4-R1细胞生长并诱导其凋亡.
关键词： 姜黄素 急性早幼粒细胞白血病 维甲酸耐药 细胞凋亡 -
尿多酸肽联合环腺苷酸诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的实验研究
目的 探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)单独和联合环腺苷酸(cAMP)对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞的作用.方法 以维甲酸耐药的APL细胞株NB4-R2为体外模型,观察使用CDA-Ⅱ单独和联合cAMP处理前后细胞生长和形态的改变;同时利用流式细胞术检测细胞的凋亡特征,包括细胞内DNA含量的分布、亚二倍体(sub-G1)细胞群所占比例、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平等;并通过电泳鉴定因基因组DNA非随机性降解导致的梯状DNA.结果 CDA-Ⅱ可以通过降低细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,诱导NB4-R2细胞发生凋亡;cAMP则能显著加强CDA-Ⅱ的这一促凋亡作用1 g/L CDA-Ⅱ联合100 μmol/L cAMP共同处理NB4-R2细胞48 h和72 h时Bcl-2阳性细胞比例分别下降至(15.1±4.8)%和(7.3±2.9)%.100 μmol/L cAMP单独作用可使MB4-R2细胞的Bcl-2阳性率由(92.0±0.6)%下降至(75.3±2.0)%.结论 尿多酸肽CDA-Ⅱ联合cAMP对于维甲酸耐药的APL细胞株具有强烈的诱导凋亡效应.
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丹参酮ⅡA对初治、复发及耐药人急性早幼粒细胞白血病细胞体外诱导分化作用
丹参酮ⅡA(TanⅡA)是从活血化瘀中药丹参中提取的有效成分.体外研究表明,TanⅡA对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用及诱导分化作用[1].近来有学者发现,0.5μg/mlTanⅡA在体外能诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞及维甲酸耐药APL细胞株MR-2细胞分化成熟[2,3].在此基础上,我们选择11例临床初治、复发及全反式维甲酸(ATRA)耐药的APL患者白血病细胞进行原代培养,进一步证实TanⅡA对APL细胞体外诱导分化作用,为其临床运用提供更加可靠的实验室依据.
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细胞色素P450介导的维甲酸耐药机制及其逆转
全反式维甲酸(ATRA)作为诱导分化剂可使大多数急性早幼粒细胞白血病(APL)患者取得完全缓解,但是几乎普遍发生的维甲酸耐药,使APL患者完全缓解后短期内复发,并失去对维甲酸的反应性,严重影响其疗效.对于ATRA耐药机制的解释,认为系统的细胞色素P450介导的ATRA代谢增强,使得ATRA水平难以维持.现就细胞色素P450介导的维甲酸耐药机制及其逆转的研究进展综述如下.
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亚砷酸治疗急性早幼粒细胞白血病的护理干预
1995年哈尔滨医科大学第一医院率先应用三氧化二砷(亚砷酸,ATO)治疗急性早粒细胞白血病(APL)取得成功,它与维甲酸联合应用明显提高了APL患者的完全缓解率和长期无病生存率,特别是对于维甲酸耐药或不耐受患者,ATO具有极高临床应用价值.但是,长期以来,受到传统思想的影响,加之毒副作用较多,国人视其为一种毒药,因此,在临床应用中,恰当的护理干预显得尤其重要.我科自2009年4月～2011年6月对9例APL患者应用ATO治疗,现将护理体会介绍如下.1临床资料本组共9例,均为我院住院患者,诊断标准符合全国统一标准[1].男1例,女8例,年龄27～66岁.以0.1％ AS2O3注射液10 ml稀释于5％GS 500 ml中,持续静脉滴注4～6 h,1次/d,应用14～28 d为一个疗程.
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环磷腺苷和其衍生物8-CPT-cAMP诱导分化效应的比较实验
目的:比较环磷腺苷和其衍生物8-CPT-cAMP在联合全反式维甲酸(ATRA)诱导耐药型早幼粒白血病细胞株NB4-R1分化中的作用.方法:将环磷腺苷和8-CPT-cAMP分别与ATRA联合处理NB4-R1细胞株,在不同时间点收集细胞,观察细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)的还原能力,以及细胞表面分化抗原CDllb的表达情况.结果:单独使用环磷腺苷或8-CPT-cAMP均无法诱导NB4-R1细胞分化;但8-CPT-cAMP可以恢复NB4-R1细胞对ATRA的反应性,8-CPT-cAMP与ArIRA合用可以使NB4-R1细胞表面分化抗原CD11b的阳性率达到(86.5±7.78)%,与对照组和ATRA单用组相比均有显著性差异;同时,细胞对NBT的还原能力也明显升高,比对照组或ATRA单用组提高了5倍左右.而环磷腺苷与ATRA联合处理只能诱导NB4-R1细胞出现部分分化的特征,CD11b的阳性率可上升至(50.7±3.11)%,但细胞对NBT的还原能力却没有明显提高.结论:环磷腺苷对维甲酸耐药型细胞株NB4-R1细胞的分化具有一定的促进作用,但是效果明显不如其衍生物8-CPT-cAMP.
关键词： 环腺苷酸 维甲酸耐药 急性早幼粒细胞白血病 细胞分化 -
小剂量三氧化二砷(As2O3)治疗复发APL 5例
急性早幼粒白血病(APL)是以异常早幼粒细胞增生为特征的一种疾病,初治时对维甲酸较为敏感,缓解率可达85%以上,但多次复发的APL往往对维甲酸耐药.既往的报道证实砷剂治疗复发性APL疗效较佳[3],因此我们对应用小剂量三氧化二砷治疗的5例复发APL患者,进行疗效评估.
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尿多酸肽诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的实验研究
目的 探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞NB4及耐维甲酸的NB4-R1细胞的凋亡作用.方法 以NB4和NB4-R1细胞作为体外模型,观察CDA-Ⅱ作用前后细胞的形态和生长增殖情况.流式细胞术检测细胞凋亡特征.Western印迹法检测凋亡调控蛋白蛋白激酶C(PKCδ)及Caspase-3的水解活化.结果 CDA-Ⅱ作用于NB4和NB4-R1细胞后,细胞生长受到抑制；形态上观察到分化和凋亡现象；Annexin V-PI法发现,用药24 h后NB4和NB4-R1细胞凋亡比例分别上升至(58.7±3.1)％和(87.8±0.5)％；PKCδ和Caspase-3水解活化.结论 CDA-Ⅱ作用于细胞后,水解活化Caspase-3,裂解PKCδ生成活性片段,诱导细胞凋亡.
关键词： 尿多酸肽 急性早幼粒细胞白血病 细胞凋亡 维甲酸耐药 -
TopoⅡβ在苦参碱诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的作用研究
[目的]探讨TopoⅡβ在苦参碱诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病(acute promye locyticleukemia,APL)细胞分化的作用.[方法]以全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)敏感的APL细胞系NB4及其ATRA耐药细胞株NB4-R1作为研究对象,选取对数生长期细胞,分为空白细胞对照组、ATRA组、苦参碱组、ATRA+苦参碱组.培养3d后,研究各组细胞形态的变化；用NBT还原实验分析细胞分化能力的变化；流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化；免疫组化法检测拓扑异构酶TopoⅡβ亚型的表达变化.[结果]与ATRA组相比,0.1mmol·L-1苦参碱可协同1μmol· L-1维甲酸诱导NB4-R1细胞分化,使NBT还原阳性率明显增高(12％ VS 41.33％),并能诱导NB4-R1细胞表面分化抗原CD11b的表达百分率升高(32.776±6.610 VS 46.888±7.847)％;而对NB4细胞则无明显变化.单用苦参碱对NB4及NB4-R1细胞内TopoⅡβ均无明显作用；维甲酸联合苦参碱能降低耐药细胞株NB4-R1细胞内TopoⅡβ含量(P＜0.05).[结论]苦参碱体外能协同ATRA使NB4-R1细胞分化成熟,其作用机制可能与调控TopoⅡβ的表达有关.
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维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异表达蛋白分析
背景与目的:维甲酸耐药机制有待进一步的深入研究.蛋白质组学以所有蛋白质为研究对象,从细胞水平及整体水平研究蛋白质的组成及其变化规律.本实验应用蛋白组学技术整体比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞蛋白表达谱,筛选差异表达蛋白,以期获得维甲酸耐药相关蛋白.方法:提取维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的总蛋白,通过双向凝胶电泳分离,获得二者高质量的蛋白表达谱,经PDQuest v7.1软件比较分析,筛选出二者间差异表达的蛋白质点,通过质谱仪鉴定表达差异的蛋白.结果:获得了分辨率高、重复性好的APL细胞的双向电泳图谱.PDQuest v7.1软件分析结果表明,MR2细胞及NB4细胞的pH 4～7双向凝胶电泳所展示的蛋白点分别有(890±45)个和(912±56)个.二者间有57个差异显著的蛋白点,其中23个在MR2细胞中上调,34个下调.经质谱鉴定了10个蛋白,鉴定成功率达70%,鉴定的蛋白涉及癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质.结论:应用双向凝胶电泳技术整体展示了维甲酸耐药细胞株MR2及敏感细胞株NB4的蛋白表达谱,并分析、鉴定、筛选出与维甲酸耐药相关的差异表达蛋白,为进一步从多因素角度研究认识维甲酸耐药机制提供了新的线索.
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APL对全反式维甲酸耐药的机理及克服研究进展
全反式维甲酸(ATRA)是急性早幼粒细胞白血病(APL)有效的诱导分化剂,用于APL患者诱导治疗,有很高的完全缓解(CR)率。其良好疗效已被国内外学者所公认,ATRA现已列为APL诱导缓解治疗的首选药物。然而，快速发生的耐药性是ATRA治疗APL的一大缺点。ATRA诱导CR后单用ATRA维持治疗的多数患者易在短期内复发，复发后临床上往往对ATRA产生耐药，再用ATRA治疗，疗效不佳；此外，少数初治的APL病例亦对ATRA不敏感。故ATRA抵抗成为临床甚为棘手的问题。尽管一些可能的机理已经被提出，但目前APL对ATRA耐药的机理仍不清楚，而且克服耐药的治疗策略仍未建立〔1〕。为此，本文就这两方面的研究现状综述如下。
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IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究
目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制.方法:IFN-α、 IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后, 采用MTT比色法检测细胞的增殖, 用光镜观察、 NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化, 用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia, PML)蛋白的表达.结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖; IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著; 但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用, 二者之间均无统计学意义(P＞0.05).两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化; 二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著, 但IFN-γ+ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α+ATRA组(P＜0.05).两种IFN都能诱导PML蛋白的表达.结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合, 可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关.
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雄黄治疗维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病临床研究
目的观察诱导凋亡剂雄黄对耐维甲酸(ATRA)的急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗效果及毒副作用.方法对比应用雄黄治疗APL2 0例前后结果.结果完全缓解(CR)17例,部分缓解(PR)1例,总有效率(CR +PR)90%.结论雄黄对ATRA耐药的APL仍有较高的缓解率,二者无交叉耐药,毒性小,适用于临床推广应用.
