重组IFN-α蛋白联合endostatin基因对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用

目的探讨重组IFN-α蛋白联合endostatin基因对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用.方法兔眼球结膜下注射包有绿色荧光蛋白表达载体的脂质体,3 d后用激光共聚焦显微镜观察角膜绿色荧光蛋白表达.利用碱烧伤法制备兔眼角膜新生血管模型,球结膜下联合注射重组IFN-α蛋白及包有endostatin真核表达载体的脂质体,用裂隙灯显微镜观察对新生血管的抑制作用.结果实验组角膜有很强的绿色荧光,而在对照组则无荧光.联合应用重组IFN-α蛋白和endostatin基因治疗,第7、10、13天角膜新生血管长度、面积明显小于重组IFN-α蛋白和endostatin基因的单独治疗组(P＜0.05).结论重组IFN-α蛋白联合endostatin基因可有效抑制碱烧伤诱导角膜新生血管的生长.

IFN-α对慢性髓系白血病患者血清中细胞因子的影响

目的:研究IFN-α对慢性髓系白血病(CML)患者血清中细胞因子的影响.方法:选取我院2012年3月至2015年12月确诊为CML患者50例,通过随机数表法分为常规治疗组(n=25)和复合治疗组(n=25),选择30例健康人员作为对照组.给予常规治疗组和复合治疗组患者口服羟基脲,在常规治疗组的治疗基础上给予复合治疗组重组人干扰素α2b注射液.采用ELISA法检测血液中ALP、IL-6、PGE-2、MMP-2、及bFGF含量,对比对照组和CML组、CML慢性期和CML急变期组的上述指标的变化,记录治疗6周后细胞遗传学、分子学和血液学的疗效.结果:CML慢性期患者和急变期患者血清中ALP、IL-6、PGE-2、MMP-2及bFGF的含量均明显高于对照组(P＜0.05);CML慢性期患者血清中的MMP-2和bFGF的含量高于CML急变期患者(P＜0.05);CML慢性期患者的ALP、PGE-2和IL-6水平明显低于CML加速急变期患者(P＜0.05);治疗2周、6周后复合治疗组的ALP、IL-6、PGE-2、MMP-2及bFGF水平均显著低于常规治疗组(P＜0.05);治疗结束后常规治疗组的完全血液学缓解率(CHR)为56％,低于复合治疗组的84％(x2=18.667,P＜0.001);常规治疗组的完全细胞遗传学缓解(CCyR)为32％,明显高于复合治疗组的12％ (x2=11.655,P＜0.001);常规治疗组的完全分子学缓解(CMR)为12％,显著高于复合治疗组的4％(x2=4.347,P=0.037).随访中,常规治疗组中位生存期显著短于复合治疗组,但差异无显著意义(P＞0.05).结论:IFN-α能缓解CML患者的症状,抑制CML进程,有效抑制相关疾病细胞因子的表达.

细胞因子体外诱导慢性髓细胞性白血病树突状细胞分化的研究

本研究探讨干扰素(IFN)治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的可能新机制,为临床治疗CML提供新的思路.用Ficoll密度离心法分离骨髓单个核细胞(BMMNC),用不同细胞因子组合体外诱导培养树突状细胞(DC),在倒置显微镜及光镜下观察DC形态,应用流式细胞术检测其表面标志(CD1a,CD83,CD86,HLA-ABC,HLA-DR,CD54),MTT法检测其混合淋巴细胞反应(MLR)能力.结果表明:经不同细胞因子组合所诱导出的DC,其特征性表面分子表达率均高于培养前的DC(P＜0.01);IFN-α+GM-CSF组DC表达HLA-ABC、HLA-DR明显高于IL-4+GM-CSF培养组(P＜0.05);而IFN-α+GM-CSF+IL-4组DC的CD86表达率及MLR水平均高于其它细胞因子组合组(P＜0.05).干扰素耐药组DC表面分子表达率及MLR水平较新诊断组和干扰素治疗有效组均明显减低(P＜0.05),但A、B、C各组的CD86表达率及MLR水平在IFN-α+GM-CSF+IL-4因子组合条件下无明显差异.结论:CML骨髓单个核细胞在含有IFN-α的细胞因子组合条件下可分化为具有形态和免疫表型特征的DC,且表达较高的Ⅰ类和Ⅱ类分子、共刺激分子、黏附分子及MLR,表明干扰素治疗CML的机理可能与DC有关,这一结果提示通过增强内源性DC功能可能提高CML临床疗效.

mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转

为了探索bcr-abl和mdr1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂ST1571是否有交叉耐药及其逆转方法,采用MTT法检测ST1571对K562-n/VCR细胞的抑制作用,采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α-干扰素(IFN-α)单用及CsA与IFN-α联合应用研究对ST1571耐药的逆转作用.结果表明:K562-n/VCR细胞对STI571有交叉耐药性.CsA,IFN-a,TAM 3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用,逆转倍数分别为5.18倍、1.67倍及1.82倍.而半量CsA+IFN-α对K562-n/VCR细胞STI571的逆转倍数为34.87倍.结论:多药耐药基因mdrl的扩增可以导致bcr-abl阳性白血病细胞对STI571的耐药.多药耐药逆转剂CsA,TAM和IFN-α对STI571耐药有明显的逆转作用,CsA与IFN-α半量联合对K562-n/VCR细胞的杀伤作用显著超过全量CsA或IFN-α的逆转耐药作用.本研究结果提示对STI571发生耐药的患者加用CsA和IFN-a,可能会提高其疗效.

α干扰素治疗慢乙肝并发甲状腺功能减低母女二例报告

目前α干扰素（IFN-α）被认为是治疗慢性乙型肝炎有效的药物之一，但它存在如流感样症状等近期不良反应[1]，以及诱导自身免疫性疾病等远期不良反应[2]，其中干扰素诱发甲状腺疾病的问题受到人们的关注，出现甲状腺疾病后的处理方案目前尚未统一。下面就用干扰素治疗慢乙肝母女引起甲状腺功能减低，终取得临床治愈报道如下。

原发性干燥综合征患者外周血浆细胞样树突状细胞变化

目的：探讨原发性干燥综合征（ primary Sj?gren′s syndrome，pSS）患者外周血浆细胞样树突状细胞pDC（ Lin－CD123＋HLA-DR＋）的变化及意义。方法收集疾病组原发性干燥综合征患者39例，正常对照组15例，采用流式细胞术检测pDC占外周血淋巴细胞的比例，ELISA检测15例原发性干燥综合征患者血浆IFN-α、IL-6和TNF-α水平。结果 pSS疾病组外周血pDC占淋巴细胞百分比低于正常对照组（P＜0．05）；抗干燥综合征抗原A（SSA）抗体阳性pSS患者pDC水平显著高于抗SSA抗体阴性pSS患者（P＜0．05）；pSS疾病组血浆TNF-α（P＜0．05）和IL-6（P＜0．05）水平高于正常对照组，pSS疾病组血浆IFN-α水平与正常对照组相比差异无统计学意义（ P＞0．05）；pSS疾病组外周血pDC占淋巴细胞百分比与血浆TNF-α、IL-6和IFN-α水平之间无相关性。结论 pSS患者外周血pDC占淋巴细胞百分比降低，外周血TNF-α、IL-6水平增高，可能参与原发性干燥综合征的发病机制。

IFN-α可以通过抑制miR-181 a水平间接调控SAMHD1的表达

目的：研究IFN-α对不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain containing protein 1, SAMHD1)表达的诱导,以及miR-181a在此过程中的作用。方法以THP-1和Jurkat细胞为细胞模型,用不同剂量 IFN-α(200 IU/ml和1000 IU/ml)处理后定量 PCR检测 SAMHD1 mRNA 和 miR-181a 的表达水平,并用Western blot检测SAMHD1蛋白的表达水平。转染miR-181a过表达质粒p-181a后再用IFN-α(200 IU/ml)处理细胞,检测SAMHD1表达量的变化。结果 IFN-α可以显著增加SAMHD1 mRNA和蛋白水平的表达,同时抑制miR-181a的表达,尤其以Jurkat细胞结果更为显著。过表达miR-181a能够显著降低IFN-α诱导的SAMHD1表达。结论 IFN-α可以通过抑制miR-181a水平间接调控SAMHD1的表达。

人偏肺病毒感染人肺上皮细胞后Toll样受体的表达及其功能

目的 观察人偏肺病毒(human metapneumoviras)感染人肺上皮细胞后Toll样受体(TLR)表达变化及其信号通路的功能,探讨hMPV诱导气道炎症的部分机制.方法 hMPV感染体外培养的人肺上皮细胞株A549,检测病毒在A549细胞中的生长曲线,并通过RT-PCR,real-timeRT-PCR方法检测细胞TLR mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清IFN-α及TNF-α的表达.结果 (1)hMPV可在A549细胞中复制,感染后3 d达高峰10~(5.2)TCID_(50)/ml.(2)RT-PCR结果提示:hMPV感染A549细胞6 h后大部分TLR的表达均上调.(3)定量PCR结果提示:hMPV感染A549细胞后TLR3-4、TLR7-9的表达增高,且有时间依赖性,而紫外灭活的hMPV刺激细胞后TLR表达无明显变化.(4)ELISA结果提示hMPV感染后24 h,IFN-α及TNF-α的表达均明显升高.结论 人偏肺病毒感染A549细胞后可上调TLR表达,其诱导的炎性反应与部分TLR介导的信号转导途径有关.

IFN-α治疗慢性乙型肝炎疗效与记忆性T细胞的相关性

目的 研究IFN-α在治疗慢性乙型肝炎患者中对记忆性T细胞亚群变化的影响,及其临床治疗效果与记忆性T细胞亚群变化的相关性.方法 57例接受IFN-α治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者,分别在治疗前(O周),及疗程期内不同时间点(12周和24周)抽取外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)后加入抗体染色,流式细胞仪检测,统计学分析.结果 非活动性HBsAg携带者CD8效应记忆性T细胞(CD8+TEM)的比例显著高于未经IFN-α治疗的CHB患者;相反,CD8中心记忆性T细胞(CD8+TCM)的百分比则显著低于未经IFN-α治疗的CHB患者(P<0.05);有效组CD8+TEM百分比在IFN-α治疗前和治疗24周时均高于无效组,CD8+TCM百分比在IFN-α治疗前和治疗24周时则低于无效组(P<0.05);有效组IFN-α的剂量明显高于无效组.结论 病毒的清除与效应记忆性T细胞亚群比例可能有关,TEM亚群在数量上占优势可能对IFN-α治疗效果有益.

系统性红斑狼疮患者外周血浆细胞样树突状细胞的变化及意义

目的 研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血浆细胞树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells,pDC)的变化,探讨其在SLE发病中的作用.方法 采用流式细胞术检测外周血pDC水平,并分析pDC表面CD32、CD40、CD86、CD62L、CXCR4的表达,ELISA法检测血清IFN-α浓度.结果 SLE患者外周血pDC水平显著低于正常对照组,其中SLE活动组pDC水平明显低于稳定组,治疗组明显高于初发组.SLE患者中有关节炎、蛋白尿或白细胞减低者外周血pDC水平显著低于无上述临床表现者,且pDC水平与蛋白尿呈明显负相关.SLE患者外周血pDC表面CD32、CD86、CD62L、CXCR4的表达显著高于正常对照组,且pDC水平与CD32、CXCR4的表达呈明显负相关.SLE患者血清IFN-α水平明显高于正常对照组,且pDC水平与IFN-α浓度呈明显正相关.结论 SLE患者外周血pDC水平显著降低,其表面活化、趋化相关分子表达明显异常,大量IFN-α产生,从而促进SLE的发病及疾病进展.

蛋白激酶ERK活化介导IFN-α在人骨髓瘤细胞系U266上的增殖促进效应

目的 研究IFN-α在人骨髓瘤细胞系U266上的生物学效应及其分子机制。 方法 采用MTT方法检测IFN-α对U266细胞生长的影响；采用FACS方法检测IFN-α作用下U266细胞生长周期及其表面IL-6R、gp130等分子表达水平的改变情况；采用免疫印迹方法检测能够介导细胞生长的Ras/MAPK途径中蛋白激酶ERK在IFN-α刺激作用下的活化情况，并同时观察Ras/MAPK途径特异性抑制剂PD98059作用后ERK激酶活化和细胞生长所发生的变化。 结果 IFN-α能够促进U266细胞周期行进，同时表现出细胞增殖促进效应；但它不影响U266细胞上IL-6R和gp130分子的表达。IFN-α可明显激活蛋白激酶ERK，PD98059作用后ERK活化受抑，同时IFN-α在U266细胞上的生长促进效应明显下调。 结论 IFN-α通过激活蛋白激酶ERK介导其在U266细胞上的增殖促进效应。

IFN-α诱导HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G的表达

目的 了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制.方法 HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100 U/ml、400 U/ml、800 U/ml and1200 U/ml)刺激,10 h后提取细胞总RNA,RT-PCR和实时定量RT-PCR检测HuH7细胞内APOBEC3G的mRNA水平变化,Western blot分析APOBEC3G蛋白水平的表达;分别构建不同长度的含有IRF-E(IFN regulatory factor element)位点的APOBEC3G起始密码上游序列报告质粒、不含IRF-E和IRF-E位点突变的虫荧光素酶报告质粒,报告基因分析IFN-α刺激后APOBEC3G起始密码上游IRF-E位点对APOBEC3G表达的影响.结果 IFN-α上调HuH7细胞APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量依赖的效应.序列分析发现APOBEC3G起始密码上游的-298～-283和-57～-47位碱基分别存在IRF-E和ISRE(IFN stimulated response element)序列.报告基因分析结果显示,干扰素使含有IRF-E序列的APOBEC3G启动子报告质粒的虫荧光素酶的活性增加6～8倍,而不含IRF-E序列和IRF-E位点突变的报告质粒的虫荧光素酶活性在干扰素刺激后几乎没有变化.结论 IFN-α可通过IRF-E位点上调APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,从而发挥抗病毒效应.

冰毒对HIV感染者TLR9和IFN-α表达的影响

目的 了解吸食冰毒的HIV感染者体内的TLR9和IFN-α基因表达水平,探讨冰毒对HIV复制的影响及其免疫机制.方法 采集吸食或不吸食冰毒的HIV感染者和正常人的血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),检测HIV-1病毒载量、CD4+T淋巴细胞计数及PBMCs中CD4、CD3、CCR5、CXCR4表达的比率.同时,采用实时定量PCR检测研究对象PBMCs中TLR9和IFN-α的基因表达水平.结果 纯吸食冰毒HIV阳性组[Meth HIV(+)]病毒载量明显高于不吸食冰毒HIV阳性组[Non-Meth HIV(+)],而CD4细胞计数明显低于后者(P＜0.05);Meth HIV(+)组PBMCs中CD4、CD3、CCR5、CXCR4表达的比率均低于不吸毒HIV阴性对照组(Control,P＜0.05);纯吸食冰毒HIV阴性组[Meth HIV(-)]和Meth HIV(+)组TLR9和IFN-α基因表达水平均明显高于Control组和Non-Meth HIV(+)组(P＜0.05).结论 冰毒可能通过上调体内TLR9和IFN-α的基因表达促进HIV的复制.

IFN-α联合5-FU对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究

目的 探讨α-干扰素(IFN-α)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及机制.方法 培养人肝癌细胞HepG2,实验分为4组,对照组不加药物干预,5-Fu组加入40 μg/ml 5-Fu,IFN-α组加入4 000 U/ml IFN-α,联合用药组加入40 μg/ml 5-Fu和4 000 U/ml IFN-α.培养48 h后收集细胞,采用MTT法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡情况,细胞免疫化学法检测各组Bcl-2、Caspase-3蛋白表达.结果 IFN-α组抑制作用较弱,为3.73％,5-FU组抑制率为22.50％,联合用药组抑制作用显著增强,抑制率为63.65％;联合用药组对肝癌HepG2细胞的周期影响大,G0/G1期比率明显增加,为(80.10±4.33)％,S期细胞比率明显减少,为(18.76±3.47)％,细胞增殖指数(PI)低,为(20.11±4.53)％,差异有统计学意义(P＜0.05);联合用药组肝癌HepG2细胞凋亡率为(22.51±4.41)％,明显高于其他组(P＜0.05);联合用药组Bcl-2蛋白表达率为(10.24±2.30)％,明显低于其他组(P＜0.05);联合用药组Caspase-3蛋白表达率为(30.12±1.81)％,明显高于其他组(P＜0.05).结论 IFN-α联合5-FU能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过调节Bcl-2、Caspase-3蛋白而发挥作用.

联合应用伊马替尼和IFN-α治疗慢性髓性白血病的临床效果观察

目的 探讨联合应用伊马替尼和干扰素-α(IFN-α)治疗慢性髓性白血病(CML)的临床效果.方法 选取CML的患者270例作为研究对象,按治疗手段随机分为伊马替尼组、IFN-α组和联合组,观察并比较三组患者的临床疗效和不良反应.结果 联合组的完全血液学缓解(CHR)、完全分子遗传学疗效(CMR)均明显高于伊马替尼组和IFN-α组,CCyR明显高于IFN-α组;联合组的总体生存率(OS)和无进展生存率(PFS)与其他两组相比无显著差异,并且联合组药物的不良反应更为广泛.结论 联合应用伊马替尼和IFN-α能明显提高患者的CHR、CMR,并未提高患者的生存率且增加了药物的不良反应.

干扰素联合胸腺肽和苦参素治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的 评价α干扰素(IFN-α)联合胸腺肽和苦参素治疗慢性乙型肝炎(CHB)的近、远期疗效和安全性,探讨三者联合治疗的协同作用.方法 146例HBV DNA及HBeAg阳性的CHB患者随机分为2组.治疗组采用IFN-α和胸腺肽及苦参素联合治疗,对照组单用IFN-α,疗程均为6个月.结果 2组比较,近、远期疗效均有显著性差异.结论 IFN-α与胸腺肽及苦参素联合治疗CHB具有明显协同作用,可明显改善肝功能,抗病毒效果好,是CHB患者安全有效的治疗方法.

α-干扰素治疗真性红细胞增多症诱发1型糖尿病

真性红细胞增多症(polycythemia vera)是一种以克隆性红细胞增多为主的骨髓增生性疾病,其病因和发病机制尚未明确.采用α-干扰素(interferon-α,IFN-α)单独或联合化疗能明显改善患者的临床症状,减少放血次数以及化疗药物的剂量[1].本文报道一例真性红细胞增多症患者应用IFN-α治疗期间诱发1型糖尿病(T1DM)的罕见病例.

Objective To investigate the dynamic change of hepatitis B virus quasispecies within complete genome during the early stage of IFN-αtreatment and its impact on virological response. Methods Sixteen patients with chronic hepatitis B receiving IFN-αtreatment were investigated. HBV DNA was extracted from serum sample at baseline and week 12. The complete genome of HBV was amplified, then cloned and sequenced. The quasispecies heterogeneity of HBV complete genome was depicted at baseline and week 12. Results The quasispecies heterogeneity of the genome except for C-ORF were comparable in three groups at baseline and week 12. The quasispecies diversity at amino acid levels of responders within C-ORF were higher than that of non-responders at baseline. The quasispecies diversity within the C-ORF of partial responders was reduced in the early stage of IFN-αtreatment. Furthermore, the mean genetic distance at amino acid levels of partial responders was significantly higher than that of the non-responders at week 12. The evolutionary rate was not different between non-responders and partial responders. Conclusions In the immune clearance phase, the patients who had greater viral quasispecies diversity within C-ORF at amino acid level had more chance to obtain the early virological response during IFN-αtreatment.

慢性乙型肝炎联合抗病毒治疗专家共识

干扰素α(IFN-α)、核苷(酸)类似物(NUC)抗病毒单药治疗是目前慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的主要治疗策略,且CHB患者远期预后经抗病毒治疗后获得了显著改善[1-3].然而单药治疗应答率较低,多数患者需长期用药,停药后维持应答率较低,长期治疗耐药变异率较高,限制了CHB患者单药治疗的临床应用.

α-干扰素基因疗法治疗人黑色素瘤的免疫学机理的实验研究

目的探讨IFN-α基因治疗人黑色素瘤的免疫学机理.方法以人IFN-α基因为治疗性目的基因,建立了人IFN-α基因疗法治疗人黑色素瘤的实验模型,并检测机体的NK活性和巨噬细胞的杀伤活性.结果高分泌IFN-α成纤维细胞克隆株体内移植后,能显著提高机体的NK活性和巨噬细胞杀伤活性,在以IL-2为基础的过继疗法合用时,对NK活性和巨噬细胞杀伤活性的增强作用更加明显.结论成纤维细胞介导的人IFN-α基因疗法能显著增强机体的免疫功能,具有较强的抗黑色素瘤的作用,为临床应用细胞因子基因疗法治疗黑色素瘤提供了实验依据.