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鱼藤酮下调对BV-2小胶质细胞中Drosha蛋白水平和白介素-1β表达影响的研究
目的 在鱼藤酮处理BV-2小胶质细胞后,观测细胞中Drosha蛋白水平的变化以及相关炎症因子的表达改变.方法 在不同浓度及时间的鱼藤酮处理后,用蛋白免疫印迹检测细胞中Drosha的蛋白水平,同时通过荧光定量PCR的方法检测Drosha下游miR 181a及其靶向炎症因子白介素-1β的表达.随后,在使用miRNAmimics补偿miR 181a的水平降低后,进一步观测白介素-1β的表达改变.结果 在鱼藤酮处理BV-2小胶质细胞后,Drosha蛋白水平呈现为浓度和时间依赖地降低,同时,其下游miR 181a的表达水平也被下调,而miR-181a的靶向炎症因子白介素-1β的表达增强.在使用miRNA mimics增加miR-181a的水平后,可抑制白介素1β的表达增强.结论 鱼藤酮在BV-2小胶质细胞通过影响Drosha蛋白及其下游miR-181a的水平,调节白介素1β的表达.
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MiR-181a在急性髓系白血病中的表达及其对细胞增殖的影响
目的:研究microRNA181a(miR-181a)在急性髓系白血病(AML)细胞系中的表达及功能.方法:采用定量PCR检测AML细胞株(NB4、HL-60、K562及MV-4-11)中miR-181a的表达水平;采用CCK-8计数法检测miR-181a对人AML细胞系NB4、HL-60及K562增殖的影响;采用流式细胞术分析细胞周期的改变.结果:miR-181a在大部分AML细胞系(NB4、HL-60及MV-4-11)中表达明显增高,在少数AML细胞系(K562)中降低,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).CCK-8检测结果显示,高表达的miR-181a可以促进白血病细胞增殖,且miR-181a可以促进白血病细胞细胞周期转变,促进G0/G1期细胞向S及G2期细胞转变.结论:高表达的miR-181a可以促进AML细胞增殖,在AML中可能起”癌基因”作用,研究miR-181a可能为AML治疗提供新的方法.
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IFN-α可以通过抑制miR-181 a水平间接调控SAMHD1的表达
目的：研究IFN-α对不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain containing protein 1, SAMHD1)表达的诱导,以及miR-181a在此过程中的作用。方法以THP-1和Jurkat细胞为细胞模型,用不同剂量 IFN-α(200 IU/ml和1000 IU/ml)处理后定量 PCR检测 SAMHD1 mRNA 和 miR-181a 的表达水平,并用Western blot检测SAMHD1蛋白的表达水平。转染miR-181a过表达质粒p-181a后再用IFN-α(200 IU/ml)处理细胞,检测SAMHD1表达量的变化。结果 IFN-α可以显著增加SAMHD1 mRNA和蛋白水平的表达,同时抑制miR-181a的表达,尤其以Jurkat细胞结果更为显著。过表达miR-181a能够显著降低IFN-α诱导的SAMHD1表达。结论 IFN-α可以通过抑制miR-181a水平间接调控SAMHD1的表达。
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miR-181a在老年急性心肌梗死血清中的表达及其临床意义
目的 研究miR-181a在老年急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达及其临床意义.方法随机选取2016年1月~2017年3月于鹤壁市人民医院收治的AMI患者56例为AMI组,并选取同期体检的健康老人52例为老年健康受试者(HE)组,实时荧光定量PCR检测血清miR-181a的相对表达量,Pearson法分析其表达与血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的相关性,ROC曲线法分析其对老年AMI的诊断价值.结果 miR-181a在老年AMI血清中的相对表达量为(1.60±0.27),显著高于其在健康人血清中的表达(1.18±0.30)(P<0.05);在老年AMI患者血清中,miR-214相对表达量与血清AST(r=0.647,P<0.05),cTnI(r=0.712,P<0.01)均呈正相关;miR-181a诊断老年AMI曲线下面积为0.834,诊断的灵敏度和特异性分别为83.9%和69.2%.结论 miR-181a在老年急性心肌梗死患者血清中呈现高表达,并且其可能是诊断老年急性心肌梗死潜在的生物标志物.
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miR-181a和miR-181b抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭
目的 探讨miR-181a和miR-181b对胶质瘤细胞增殖和侵袭等影响.方法 通过实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株中的表达情况.我们合成miR-181a和miR-181b寡聚核苷酸及构建pre-miR-181a和pre-miR-181b表达载体,转染胶质瘤细胞,通过MTT、Transwell实验、流式检测和软琼脂实验,观察上调miR-181a和miR-181b表达后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、转化能力和细胞凋亡的影响.结果 miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株较正常脑组织均呈过低表达;miR-181a表达水平与胶质瘤等级呈负相关.上调miR-181a和miR-181b表达能有效抑制胶质瘤细胞生长,降低其转化和侵袭能力,诱导凋亡.结论 胶质瘤中异常低表达的miR-181a和miR-181b可能发挥着肿瘤抑制因子作用.
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miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移
目的 研究miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.方法 利用生物信息学软件预测出侵袭转移相关基因SLUG为miR-181a的候选靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-181a对靶基因SLUG的直接调控作用.在SACC-LM细胞中沉默SLUG后通过细胞划痕和Transwell实验检测转染后细胞侵袭迁移能力的改变.结果 生物信息学软件预测发现,SLUG mRNA序列中包含miR-181a的结合位点.双荧光素酶报告基因实验证实,与对照组相比,miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-3' UTR共转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P＜0.05),而miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-mut-3'UTR共转染组细胞内荧光素酶活性无明显变化(P＞0.05),即SLUG为miR-18la的靶基因.转染SLUG siRNA可成功沉默SACC-LM细胞中内源性表达的SLUG,同时细胞的侵袭迁移能力明显下降(P＜0.05).结论 SLUG为miR-181a的靶基因.miR-181a可靶向调控SLUG,从而调控涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.
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miR-181a对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响
目的：研究与唾液腺腺样囊性癌(SACC)侵袭转移相关的微小RNA(miRNA),探讨miR-181a对SACC侵袭和迁移的影响。方法选择1对不同侵袭迁移能力的SACC细胞株(SACC-LM/SACC-83),采用miRNA芯片技术分析细胞株中miRNA的表达差异,初步筛选出与SACC侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a的表达,进行细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果 miRNA芯片结果显示,高侵袭迁移能力的SACC细胞株miR-181a表达明显下降。细胞划痕和Transwell实验结果表明,SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后体外侵袭迁移能力明显受到抑制(t=-5.235,P<0.05)；SACC-83细胞转染miR-181a LNA后体外侵袭迁移能力有所提高(t=7.713,P<0.05)。结论不同侵袭迁移能力的SACC细胞株中存在多种miRNA的差异表达。 miR-181a的表达降低可能导致SACC细胞侵袭迁移能力的增强。
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miR-181a在转染乙型肝炎病毒基因组的nepG2.2.15细胞中的表达研究
目的 鉴定分析microRNA(miRNA)miR-181a在转染了乙型肝炎病毒(HBV)基因组的HepG2.2.15细胞中的表达情况,探讨miR-181a在与HBV相关的肝脏疾病中的作用.方法 以本课题组基因芯片结果为基础,设计并合成miR-181a探针,采用Northern blotting检测miR-181a在HepG2.2.15和HepG2细胞(对照组)中的表达水平,应用生物信息学方法结合mRNA表达谱芯片结果预测miR-181a的靶基因,选取靶基因HLA-A2,应用流式细胞仪分析HLA-A2分子在上述2种细胞中的表达.结果 Northernblotting结果显示,与对照组相比,miR-181a在HepG2.2.15细胞中的表达量显著增高;miR-181a可能的靶基因包括C8A、IDH1和HLA-A等,miR-181a可能通过其种子序列与其靶基因HLA-A的3'-UTR区部分互补结合来调节HLA-A的表达;流式分析也显示HLA-A2分子在HepG2.2.15细胞中的表达量(43.9%)显著低于HepG2细胞(96.6%).结论 miR-181a在HBV转染的HepG2.2.15细胞中高表达,并可能下调靶基因HLA-A的表达,推测这可能是HBV感染后病毒逃避免疫反应、持续复制的机制之一.
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miR-181a在人类恶性肿瘤中作用机制的研究进展
microRNA(miRNA)是一组长度为20～ 25个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶基因mRNA结合在转录后水平调控靶基因的表达.microRNAs在细胞发生发展、增殖、凋亡和分化等众多生物学过程中发挥着重要作用.研究表明,异常表达的miR-181a通过调控功能蛋白的表达水平及信号通路而与众多肿瘤的发生发展密切相关,涉及的生物学过程包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡和生存.本文就miR-181a分子的基因结构、基因表达与调控、生物学功能以及与人类恶性肿瘤发生的关系的研究进展作一综述.
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miR-181a在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞786-O功能的影响
目的 探讨miR-181a在肾透明细胞癌中的表达及miR-181a对肾透明细胞癌细胞系786-O功能的影响.方法 通过qRT-PCR的方法检测miR-181a在42对肾透明细胞癌肿瘤及瘤旁组织和细胞系786-O、769-P、A498、Caki-1中的表达水平;以miR-181a mimics、miR-181a inhibitor转染786-O细胞系,通过MTS实验观察其增殖能力的改变,并通过流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 miR-181a在肾透明细胞癌中的表达明显高于瘤旁组织,同时其在细胞系786-O、769-P、A498、Caki-1中的表达明显高于其在人肾小管上皮细胞HKC中的表达.在786-O细胞系中,转染miR-181a mimics可以明显促进其增殖,诱导G1/S期转换并抑制凋亡;而miR-181a inhibitor则抑制增殖,诱导G1期阻滞并促进凋亡.结论 miR-181a在肾透明细胞癌中高表达并参与肿瘤的发生和发展,提示miR-181a可能成为肾癌治疗的潜在靶点.
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miR-181a与乳腺癌关系的研究进展
微小RNA(microRNAs, miRNAs)是一类高度保守的非编码单链RNA,通过与靶基因mRNA的3′非编码区特异性结合,在转录后水平沉默靶基因表达,从而发挥着功能.一些研究表明miR-181a的表达与肿瘤密切相关,对肿瘤的形成、侵袭及转移起着很重要的作用.miR-181a在乳腺癌中的作用,目前还有诸多争议,一些研究表明miR-181a具有抑癌基因的作用,而另一些研究发现其具有促进肿瘤生成、转移的作用.本文就其在乳腺癌细胞中发挥作用的潜在作用机制,以及其未来临床应用可能,如作为肿瘤标志物用于早期乳腺癌诊断,评估病人化学药物治疗(以下简称化疗)敏感性,作为辅助化疗药物增强化疗敏感性药物等方面进行综述.
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微小RNA miR-181a促进慢性粒细胞白血病K562细胞分化
目的 探讨微小RNA miR-181a对慢性粒细胞白血病(CML) K562细胞的作用.方法 构建了miR-181a过表达的慢病毒载体,采用实时定量PCR方法检测CD235a和γ球蛋白的表达,评价K562细胞向红系分化的程度,检测CD61和CD41的表达,评价K562细胞向巨核系分化的程度,采用CCK实验检测细胞增殖情况.结果 氯高铁血红素佛及波酯诱导后,miR-181a在K562细胞中过表达能够增强CD235a、γ球蛋白、CD61和CD41的表达水平(P＜0.05);miR-181a过表达能够明显抑制K562细胞的增殖(P＜0.05).结论 miR-181a过表达促进K562细胞的分化并抑制其细胞的增殖.
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miR-181a和miR-181b调控bcl-2影响白内障发生机制研究
目的 探讨miR-181a和miR-181b靶向调控bcl-2及其在年龄相关性白内障发生中的作用机制.方法 临床病例系列研究.对2014年10～12月在中国医科大学附属第四医院眼科利用生物信息学软件,预测miR-181a和miR-181b可能调控的靶基因;利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜miR-181a、miR-181b及其预测靶基因的表达;利用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-181a和miR-181b mimic和inhibitor,调节人晶状体上皮细胞中miR-181a和miR-181b的表达水平,利用Real time q-PCR方法验证转染效率,并检测预测靶基因的表达变化.结果 生物信息学软件预测到bcl-2可能为miR-181a和miR-181b的靶基因.与对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组,miR-181a和miR-181b的表达均显著升高,而bcl-2的表达显著降低.miR-181a和miR-181b mimic转染组miR-181a和miR-181b的表达显著升高,bcl-2的表达显著降低;miR-181a和miR-181b inhibitor转染组,miR-181a和miR-181b的表达显著降低,bcl-2的表达显著升高.差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 miR-181a和miR-181b在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达,其可能靶向bcl-2,对其负性调控,从而影响白内障的发病过程.
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miR-181a调控海马神经元突触生长在癫痫发生中的作用及机制
目的 探讨miR-181a调控海马神经元突触生长在癫痫发生中的作用及机制.方法 从出生24h内的SD大鼠分离海马神经元进行原代培养,将miR-181a-mimic、miR-181 a-inhibitor及scramble miRNA转染到神经元细胞内,未转染组作为对照组,各组细胞培养24h后,免疫荧光检测突触的长度及数目;将后续实验分为对照组、无镁组及无镁+miR-181a-mimic组,脱氧核苷酸转移酶介导三磷酸脱氧乌苷-生物素刻痕末端标记法(TUNEL)检测阳性细胞率;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞毒性;根据标准曲线计算培养液中的NAD+含量;Western印迹检测蛋白激酶B(Akt)和糖原合酶激酶(GSK3β)磷酸化蛋白及总蛋白的表达.结果 miR-181a-mimic组海马神经元细胞突触的长度及分支数均显著低于对照组,而miR-181a-inhibitor组海马神经元细胞突触的长度及分支数均显著高于对照组(P＜0.01).scramble miRNA不影响突触的生长;无镁+miR-181a-mimic组在1h和24 h的阳性细胞率均显著低于无镁组(P＜0.01).无镁24h组和无镁+miR-181a-mimic组细胞漏出率均显著高于对照组,NAD+含量显著低于对照组(P＜0.01),而无镁+miR-181a-mimic组细胞漏出率显著低于无镁24h组,NAD+含量显著高于无镁24 h组(P＜0.01);无镁24h组Akt和GSK3β磷酸化蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),无镁+miR-181a-mimic组Akt和GSK3β磷酸化蛋白表达显著高于对照组及无镁24 h组(P＜0.01);Akt和GSK3β总蛋白表达在三组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-181a影响海马神经元突触生长,并通过调控PI3 K/Akt/GSK3β信号通路降低神经元细胞的凋亡及细胞漏出率,提高NAD+含量对癫痫起保护作用.
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转化生长因子-β1促进miR-181a表达诱导肝星状细胞-T6细胞活化
目的 观察转化生长因子-β1 (TGF-β1)对miR-181a表达的影响,以及miR-181a对体外培养的肝星状细胞(HSC) T6细胞的作用.方法 TGF-β1处理HSC-T6细胞后,检测miR-181a和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.miR-181a mimics转染HSC-T6细胞后,Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原a2链(collagen I a2,Col Ⅰ A2)蛋白表达,CCK-8计数法检测细胞增殖.结果 TGF-β1处理组细胞中miR-181a和miR-181b表达量较对照组细胞明显升高,miR-181a转染组细胞中α-SMA和ColI A2表达量明显高于对照组细胞,miR-181a对HSC-T6增殖无明显影响.结论 在HSC-T6中,TGF-β1促进miR-181a表达,miR-181a可促进HSC-T6细胞活化和分泌胶原,进一步明确了TGF-β1促进HSC-T6活化的机制.
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miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究
目的:探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用.方法:利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平.过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达.利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变.Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达.通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理.结果:QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞.SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平升高.裸鼠肺转移模型miR-1引a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组(P＜0.05).结论:miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移.
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miR-181a调控结肠癌细胞生长的作用和机制研究
结肠癌是指结肠黏膜上皮在环境或遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变,是常见的恶性肿瘤之一,占所有恶性肿瘤的10％～15％[1].结肠癌的发病原因与遗传、结肠腺瘤、息肉病、慢性炎症、高脂肪、少纤维饮食习惯等都有一定关系[2],结肠癌发病隐匿,病程慢早期无明显的临床表现,出现明显症状时大多已到了中晚期,病死率仅次于肺癌和肝癌,是危害人们健康的可怕杀手[3].
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miR-181a在实体瘤及血液恶性肿瘤中的研究进展
miRNAs是一种参与转录后调控的非编码小RNA,其可通过与靶基因的3'UTR区结合负性调控靶基因.但由于其与靶基因具有低互补性,造成一个miRNA可以对应多个靶基因.因此,miRNAs在疾病的发生发展过程中起到错综复杂的作用.论文讨论近年来miR-181a在实体瘤及血液恶性肿瘤病理发展过程中起到的作用,旨在揭示miR-181a与实体瘤及血液恶性肿瘤间复杂的反馈关系.
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miR-181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达
目的 目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用.方法 收集怀孕0～6.5d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达.制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24h后采用0.5mmol/L 8-Br-cAMP 和1μmol/L Medroxyprogesterone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用.结果 早孕小鼠子宫组织中 miR-181a 的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕 4.5d达到高峰(2.60±0.15倍,P＜0.01,n=5),孕 5.5d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P＜0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P＜0.01).荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P＜0.05).结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控.
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miR-181a重组穿梭载体的构建及其对人骨肉瘤细胞迁移侵袭能力的影响
目的 探讨miR-181a对入骨肉瘤细胞迁移侵袭能力的影响.方法 通过构建miR-181a重组穿梭载体,并将其转染到人骨肉瘤细胞MG63中,以Transwell实验检测人骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力.结果 pGV314-miR-181a重组穿梭载体组相对于空白对照组及pGV314空载体组,细胞迁移和侵袭的能力获得增强,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-181a能显著提升入骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力.
