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金龙蛇颗粒含药血清对人淋巴管内皮细胞体外成管、迁移及凋亡的影响
目的 观察金龙蛇颗粒含药血清(Jinlongshe Granule drug-containing serum,JG-DS)对人淋巴管内皮细胞(human lymphatic endothelial cells,HLECs)体外成管、迁移及凋亡的影响.方法 制备JG-DS;将第3代HLECs分为2组:对照组(采用生理盐水血清进行培养)和实验组(采用JG-DS培养).两组细胞培养12h后,采用Matrigel基质胶成管实验检测HLECs成管能力;Transwell法检测HLECs迁移能力;采用流式细胞术、Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染法检测HLECs凋亡率.结果 10％ JG-DS作用12h后,HLECs小管总长度为(3 084.49±326.27) μm,明显低于对照组的(7 058.93±4 567.39)μm,差异有统计学意义(P＜0.01);HLECs迁移指数为(99 ±26)个,明显低于对照组的(160 ±32)个,差异有统计学意义(P＜0.05).两组HLECs凋亡率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 金龙蛇颗粒对HLECs体外成管及迁移有抑制作用,可能是其抑制肿瘤微淋巴管生成的机制之一.
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人淋巴管内皮细胞对卵巢癌淋巴结定向转移细胞分泌蛋白表达的分析*
目的：初步探讨人淋巴管内皮细胞（HLEC）对卵巢癌淋巴结定向转移细胞（SKOV3-PM4）分泌蛋白的影响。方法：将细胞体系分为4组（A组：SKOV3；B组：SKOV3+HLEC；C组：SKOV3-PM4；D组：SKOV3-PM4+HLEC），采用抗体芯片和iTRAQ-2D-LC-MALDI-TOF/TOF/MS方法检测各组细胞培养基中的蛋白，筛选出差异明显的分泌蛋白，对其行生物信息学分析，并采用ELISA方法在人血清标本和细胞培养基中进行验证。结果：抗体芯片与质谱分析结果提示，C组与A组相比、D组与C组相比Progranulin（GRN）、VEGFA表达上调，SPARC、IGFBP7表达下调。经过综合生物信息学分析，IGFBP7和VEGFA联系紧密，相互影响。与正常组血清相比，VEGFA在卵巢癌中的表达高，IGFBP7表达低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：淋巴结定向转移与淋巴管内皮细胞微环境关系密切，共培养后的差异蛋白涉及到基质细胞蛋白、细胞黏附作用因子等方面。其中VEGFA、GRN的表达上调及SPARC、IGFBP7的表达下调与卵巢癌淋巴结定向高转移密切相关。
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罗勒多糖对HLECs中VEGFR-2/3表达的影响
目的 研究罗勒多糖对人淋巴管内皮细胞(HLECs)的血管内皮细胞生长因子受体-2/3(VEGFR-2/3)表达的影响,揭示罗勒多糖抗肿瘤转移的分子机制.方法 乏氧条件下体外培养HLECs,实验分为3组,A组为不加罗勒多糖处理的空白对照组,B组(罗勒多糖,200 μg· mL-1),C组(罗勒多糖,400 μg· mL-1),观察各组HLECs体外成管能力;实时荧光定量PCR检测罗勒多糖处理的HLECs中VEGFR-2/3 mRNA的表达;免疫细胞化学分析VEGFR-2/3蛋白的表达差异.结果 HLECs体外成管数目分别为:29.6±5.47(A组),23.6±3.68(B组),19.2±2.00(C组);与A组比较,B、C组均能减少HLECs的体外成管数目(P＜0.05).VEGFR-2 mRNA相对表达量分别为:1(A组),0.59±0.25(B组),0.90±0.13(C组);与A组比较,B、C组VEGFR-2 mRNA相对表达量下降,但差异没有统计学意义.VEGFR-3 mRNA相对表达量分别为:1(A组),0.52±0.19(B组),0.19±0.09(C组);与A组比较,B、C组VEGFR-3 mRNA相对表达量均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).VEGFR-2蛋白表达累积光密度分别为:2.51±0.03(A组),2.42±0.03(B组),2.12±0.03(C组);与A组比较,B、C组VEGFR-2 mRNA相对表达量下降,但差异没有统计学意义.VEGFR-3蛋白表达累积光密度分别为:3.72±0.28(A组),2.91±0.26(B组),2.82±0.20(C组);与A组比较,B、C组VEGFR-3蛋白相对表达量均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 罗勒多糖可降低HLECs体外成管能力和并显著下调VEGFR-3的表达,这可能是罗勒多糖抑制淋巴管新生,抗肿瘤转移的分子机制.
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口腔癌相关成纤维细胞对人淋巴管内皮细胞增殖、迁移、侵袭、成管的影响
目的 研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用.方法 通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs.利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs(实验A组)、NFs(实验B组)与人淋巴管内皮细胞(HLEC)共培养,以DMEM高糖培养基作为空白对照组,在倒置相差显微镜下观察各组HLEC的增殖、迁移、侵袭、成管能力.结果 培养96、144、192 h,实验A组HLEC的数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P＜0.01).培养96 h后,实验A组HLEC的迁移和侵袭数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P＜0.01).培养24 h后,实验A组HLEC的成管数目多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P＜0.01).结论 口腔CAFs促进了HLEC的增殖、迁移、侵袭和成管作用,并且CAFs的促进作用大于NFs.
