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左归丸对激素性骨质疏松大鼠腰椎骨组织mTORC1 mRNA表达的影响
目的 探讨左归丸防治激素性骨质疏松的可能作用机制.方法 18只SD大鼠随机分为空白组、模型组、左归丸组,每组6只.模型组、左归丸组皮下注射地塞米松磷酸钠注射液0.6 mg/kg,每3天注射1次,构建激素性骨质疏松大鼠模型.左归丸组在造模第1天开始给予左归丸溶液1.9g/(kg·d)灌胃,空白组、模型组给予生理盐水灌胃1ml/ (100g·d),连续8周.检测大鼠腰椎骨密度、生物力学指标及腰椎骨组织Runt相关转录因子2(Runx2)、组织蛋白酶K(CTSK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1) mRNA表达,HE染色观察腰椎形态学改变,检测大鼠血清碱性磷酸酶(AKP)活性. 结果 HE染色显示,模型组骨小梁内骨细胞数量减少,骨小梁表面成骨细胞及破骨细胞稀疏;与模型组比较,左归丸组骨小梁内骨细胞数量、骨小梁表面成骨细胞及破骨细胞明显增多.与空白组比较,模型组大鼠骨密度、骨矿物质含量、压缩强度、能量吸收值、mTORC1 mRNA表达及血清AKP活性降低(P＜0.05);而左归丸组大鼠腰椎骨密度、骨矿物质含量、压缩强度、mTORC1 mRNA表达及血清AKP活性水平高于模型组(P＜0.05).结论 左归丸能有效改善激素性骨质疏松,mTORC1可能是其重要靶点.
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葡萄糖通过mTORC1信号通路调控成纤维细胞增殖
目的 研究葡萄糖对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 将小鼠皮肤成纤维细胞培养在含不同浓度葡萄糖的培养基里,用MTT法检测细胞增殖,7-MGTP pulldown实验检测细胞翻译起始情况,Western blot检测mTORC1信号通路分子的活化.结果 与培养基葡萄糖浓度为5.5 mmol/L相比较,当浓度为15 mmol/L时,促进细胞增殖,与7-MGTP结合的翻译起始复合物增加,mTORC1信号通路活化；当25 mmol/L时,抑制细胞增殖,与7-MGTP结合的翻译始复合物减少,mTORC1信号通路中与细胞增殖相关的4EBP1和与细胞生存相关的Akt的磷酸化减弱.结论 葡萄糖通过对mTORC1信号通路的双向调节作用调控成纤维细胞增殖.
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护骨素对高糖环境人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制研究
目的 探讨护骨素对高糖环境人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响及其机制.方法 (1)HUVECs分别在正糖(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖(33 mmol/L葡萄糖)、高糖+护骨素(0.5、1、2μg/ml)、高渗(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)环境培养48 h,以流式细胞术及Hoechst 33 258核染色检测各组细胞凋亡情况,Western印迹分析各组Bcl-2、Bax蛋白表达水平；(2) HUVECs分别在正糖、高糖、高糖+护骨素(2 μg/ml)、高糖+雷帕霉素(10 ng/mL)、高糖+雷帕霉素(10 ng1/ml)+护骨素(2μg/ml)环境培养24 h,Western印迹分析各组mTORC1下游核糖体蛋白S6激酶(S6K)、p-S6K、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1 (4EBP1)及p-4EBP1蛋白表达水平;(3) HUVECs分别在正糖、高糖、高糖+护骨素(2μg/ml)环境培养24 h,Western印迹分析各组mTORC1上游马铃薯球蛋白(tuberin)、p-tuberin蛋白表达水平.结果 (1)与正糖组比较,高糖组细胞凋亡率、Bax表达水平显著增加(P＜0.05),Bcl-2表达显著降低(P＜0.05)；高糖+护骨素组细胞凋亡率、Bax表达水平明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05),Bcl-2表达明显高于高糖组,而又低于正糖组(P＜0.05)；高渗组与正糖组比较无统计学差异；(2)与正糖组比较,高糖组p-S6K、p-4EBP1表达水平显著增高(P＜0.05)；高糖+护骨素组p-S6K、p-4EBP1表达水平明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05)；高糖+雷帕霉素组与高糖+护骨素组比较无统计学差异；(3)与正糖组比较,高糖组p-tuberin表达水平显著增高(P＜0.05)；高糖+护骨素组p-tuberin表达水平明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05).结论 护骨素对高糖环境HUVECs具有保护作用,其机制可能通过下调tuberin-mTORC1活性,从而实现对高糖损伤的血管内皮细胞的保护效应.
关键词： 高糖 人脐静脉内皮细胞 护骨素 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1 -
PRAS40蛋白的研究进展
40 kD大小的富含脯氨酸蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)底物蛋白(prolin-rich Akt substrate of 40 kD,PRAS40)是2003年Roth等从胞质锚定蛋白14-3-3的伴侣蛋白及Akt激酶的底物中首先鉴定的.PRAS40的活化主要方式为磷酸化修饰,并具有多个磷酸化位点.PRAS40参与调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTO RC1),Akt,NF-κB和核糖体蛋白L11(ribosomal protein L11,RPL11)等多条信号通路,影响细胞的增殖、衰老、自噬、凋亡、外泌体分泌等.
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姜黄素通过抑制外伤性癫痫鼠脑组织中mTORC1的表达发挥抗癫痫效应
目的 探讨姜黄素在外伤性癫痫鼠中的抗癫痫效应及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin,mTOR complex 1,mTORC1))表达的影响.方法 120只SD雄性大鼠按抽签法随机分为对照组、模型组和干预组,每组40只.模型组与干预组构建大鼠皮质铁离子注射癫痫模型,对照组予以生理盐水注射,干预组于造模前1h腹腔注射姜黄素,连续14 d.各实验组于造模后6、24 h、3、7、14 d时间点进行相应实验.观察大鼠癫痫发作情况,记录大鼠皮层脑电图特点,透射电镜观察注射侧皮层神经元,Western blot检测大鼠注射侧皮层mTORC1蛋白的表达及其磷酸化程度(p-mTORCl),免疫组化法检测p-mTORCl蛋白在大鼠注射侧皮层中的表达.结果 对照组未见癫痫发作,干预组较模型组癫痫发作次数明显减少(P＜0.05),发作程度明显减轻(P＜0.05);脑电图提示干预组脑电波波幅及癫痫波次数较模型组明显减低(P＜0.05);电镜见模型组大鼠神经元变性、死亡等改变,干预组大鼠神经元亚细胞结构基本正常;Western blot检测结果显示mTORC1蛋白在模型组中各时间点磷酸化激活程度均显著高于对照组(P＜0.05),并于术后24 h达到峰值,在干预组中p-mTORCl显著低于模型组(P＜0.05);免疫组化结果提示p-mTORC1在对照组中低表达,模型组中显著高于对照组(P＜0.05),干预组中p-mTORC1显著低于模型组(P＜0.05).结论 在外伤性癫痫大鼠中,姜黄素可能通过抑制mTORC1磷酸化激活而发挥抗癫痫效应.
关键词： 姜黄素 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1 外伤性癫痫 三氯化铁
