减毒鼠伤寒沙门氏菌运送的鸡传染性支气管炎病毒s1基因DNA疫苗及其免疫效力研究

为研制鸡传染性支气管炎新型基因工程疫苗,构建和表达了运送鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌.首先将鸡传染性支气管炎病毒M41株的全长s1基因插入到嵌合CpG DNA的真核表达质粒pVAX1中,构建出重组真核表达质粒pVAX1-S1-CpG.然后将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建出运送DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1-CpG).将重组菌SL7207(pVAX1-S1-CpG)分别以1×109 CFU,5×109 CFU,1×1010 CFU的剂量滴鼻和口服接种4日龄雏鸡,2周内所有试验鸡均无任何不良反应,试验结果表明重组菌SL7207(pVAX1-S1-CpG)具有良好的安全性.在免疫后35 d,商品鸡体重测定结果表明重组菌免疫不影响鸡体增重.以5×109 CFU重组菌滴鼻和口服两次接种4日龄商品代伊莎褐蛋鸡,二免3周后,血清抗体和小肠黏膜抗体测定结果表明,SL7207(pVAX1-S1-CpG)免疫组抗体水平与空白对照组、空载体对照组之间分别存在极显著性差异(P＜0.01).攻毒试验结果表明,重组菌SL7207(pVAX1-S1-CpG)免疫组有较高的免疫保护效力,与灭活苗和减毒苗效力相当,显示出一定的应用前景.

TLR9与实验性自身免疫性脑脊髓炎

Toll样受体9(toll-like receptor 9, TLR9)通过识别细菌和病毒DNA中未甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG DNA)序列激活天然免疫应答和获得性免疫应答,从而促进宿主抵抗感染性疾病.但一定条件下,TLR9活化亦可促发某些自身免疫性疾病如实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).该文就TLR9的结构、配体、信号转导通路及TLR9在EAE中的作用机制进行综述.

032 CpG DNA治疗变应性哮喘的研究进展

变应性哮喘是由于TH1/TH2细胞比例和功能失衡所引起的疾病,即TH2细胞数目增多和功能亢进,TH2细胞因子如IL-4、IL-5、GM-CSF产生增多,导致嗜酸性粒细胞增生、活化和气道浸润,造成慢性气道炎症反应.CpGDNA具有免疫调节作用,能诱导TH1细胞反应,下调TH2反应,并使TH2向TH1转变,从而抑制气道炎症.本文就CpG DNA的免疫调节作用及其在变应性哮喘中治疗作用的研究进展作一概述.

100 CpG DNA的识别、信号转导及对免疫细胞的效应

近年来研究发现，细菌DNA中含有非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(cytidine-phosphateguanosine，CpG DNA)，能够作为免疫刺激序列(immunostimulatory sequencse，ISS)被某些脊椎动物的免疫细胞识别，从而诱导并增强天然和获得性免疫应答。本文就免疫细胞对CpG DNA的识别、信号转导、CpC DNA对免疫细胞的活化效应及其应用作一综述。

124 CpG DNA是口服蛋白抗原的有效佐剂

016 CpG DNA的佐剂性和安全性优于其他佐剂

CpG DNA佐剂研究进展

CpG DNA是含有非甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸,通过Toll样受体9(TLR9)激活树突状细胞(DC)和B细胞产生免疫应答.CpG DNA可以促进专职抗原呈递细胞有效地呈递抗原,从而增强疫苗的特异性免疫应答.目前使用CpG DNA佐剂的疫苗免疫后能维持长期免疫,具有明显的全身和黏膜免疫效果.临床前和临床试验表明,CpGDNA佐剂安全有效,能够提高传染病和肿瘤疫苗的效能,增强疫苗的免疫原性.

CpG DNA重组质粒对猪囊尾蚴抗原的免疫佐剂效应研究

用CpG基序寡核苷酸的重组质粒(CpG DNA)与猪囊尾蚴抗原制备疫苗免疫小鼠,检测小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类以及体外诱导免疫脾细胞分泌白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,观察其免疫佐剂效应.发现CpG DNA重组质粒中无论插入CpG基序多或少都能增强小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类含量,都具有免疫佐剂效应,但其免疫强度有差别,其中CpG2的佐剂效应强;此外,CpG DNA重组质粒能与铝胶、206佐剂配伍发挥免疫增强协同作用.

青蒿素对CpG DNA攻击小鼠保护作用的实验研究

目的:观察青蒿素对CpG DNA攻击小鼠的保护作用及对CpG DNA诱导小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7释放促炎细胞因子的影响.方法:清洁级昆明小鼠60只,随机分为CpG DNA、青蒿素(200mg·kg-1)、CpG DNA+青蒿素(50、100、200mg·kg-1)及生理盐水对照组,每组动物10只.CpG DNA及CpG DNA+青蒿素组小鼠提前1 h腹腔注射D-氨基半乳糖溶液(600 mg·kg-1)进行敏化.CpG DNA组尾静脉给予4 mg·kg-1的CpG DNA敏化;青蒿素组,灌胃给予200mg·kg-1的青蒿素;CpG DNA+青蒿素组在给予不同剂量的青蒿素后,立即给予40mg·kg-1的CpG DNA敏化;生理盐水对照组仅给予相同量的生理盐水.体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,加入不同浓度的青蒿素,观察其对CpG DNA刺激细胞分泌TNF-α及IL-6的拮抗作用及其量效、时效关系.结果:青蒿素可降低CpG DNA引起的小鼠死亡,死亡率由80%降至10%(P＜0.01).青蒿素在20g·ml-1时显著抑制CpG DNA诱导RAW264.7释放TNF-α和IL-6(P＜0.01).提前给予青蒿素,其拮抗CpG DNA诱导细胞因子释放的作用非常显著(P＜0.01),但青蒿素在刺激物CpG DNA给予后再加入,也能观察到显著拮抗作用(P＜0.05).结论:青蒿素对CpG DNA攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制CpG DNA诱导的促炎细胞因子释放有关.

CpG DNA免疫学活性作用的研究进展

早在上世纪80年代.To kunaga等即观察到细菌DNA可增强NK细胞的杀伤活性,并认为其结构基础可能与某些短核苷酸回文结构,尤其是六聚体回文结构相关.

CpG DNA诱导抗生殖器疱疹保护性免疫的应用前景

天然免疫是人体抵抗生殖器疱疹的第一道防线,在急性感染早期限制病毒复制并促进获得性免疫.近发现,哺乳动物的天然免疫系统,通过TLR特异识别保守分子细菌DNA;阴道局部使用人工合成的细菌DNA(即CpG ODN),在疾病动物模型中证实能诱导强大的抗生殖器疱疹的免疫保护作用.这为临床上制定抗生殖器疱疹的新策略提供了科学依据.本文旨在概述CpG DNA诱导抗生殖器疱疹免疫的新进展和发展趋势.

TLR9免疫识别CpG DNA的机制与途径

Toll样受体介导的信号转导通路在对抗外来病原微生物的天然免疫应答中起重要作用.新发现的Toll样受体9(TLR9)是哺乳动物识别细菌DNA中非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG DNA)的主要受体.经典的信号转导途径如NNF-κB活化通路.MAPK通路在对CpG DNA的应答中均被启动.

应用生物传感器技术筛选拮抗革兰阴性菌主要病原分子的中药

目的 建立以CpG DNA和脂质A为靶点的生物传感器筛选平台,从传统抗炎中药中筛选同时具有拮抗细菌基因组DNA及脂质A活性的中药并按其活性物质的含量进行排序.方法 将CpG DNA和脂质A分别包被于生物传感器的生物素样品池和非衍生板以建立靶点,测定114种中药提取液去鞣质后与CpG DNA的亲和力;选择亲和力较高的35种药物与定量CpG DNA(16.5 μg/mL) 37 ℃混合孵育30 min,再测定其与CpG DNA的亲和力,以评价中药提取液中活性物质的含量.选择亲和力较高的中药与脂质A反应进行再次筛选.结果 114种中药中,侧柏叶、薄荷、半枝莲等35种中药与CpG DNA具有较高亲和力(>100 RU);地骨皮、侧柏叶等14种中药中,与CpG DNA特异性结合的活性物质,测得含量均较高.经另一检测靶点脂质A再次筛选后得到8种特异性亲和力较高的备选中药.结论 应用生物传感器跟踪检测技术筛选具有结合革兰阴性菌主要致病分子作用的中药具有可行性.