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新分离的副粘病毒Tianjin株的全基因组序列分析
副粘病毒Tianjin株是一株对普通棉耳狨猴具有高致病性,并可能与人类下呼吸道感染密切相关的毒株.为了明确其基因结构、变异特点及种系进化地位,采用RT PCR、测序和拼接,获得了副粘病毒Tianjin株全基因组序列,与GenBank登录的副粘病毒科7个属和尚未分类的28株病毒及7株仙台病毒代表株,进行同源性比较及系统进化分析.结果表明,副粘病Tianjin株属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、呼吸道病毒属,与仙台病毒关系近.基因组全长及组成规律与仙台病毒相似,只是L基因末尾A15240C变异而使L蛋白增加了一个谷氨酸残基.副粘病毒Tianjin株存在440个独特的核苷酸变异位点,导致110个氨基酸残基的改变,系统进化上构成独立的分支.副粘病毒Tianjin株在基因组序列、宿主亲嗜性和致病性等方面与已知仙台病毒存在较大的差异,可能代表仙台病毒的一个新基因型.
关键词： 副粘病毒Tianjin株 仙台病毒 同源性比较 系统进化分析 -
副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析
1999年,本实验室从群体性暴发的急性呼吸道感染素致死的普通棉耳绒猴肺组织中分离到一株副粘病毒,命名为副粘病毒 Tianjin株.经研究发现该动物中心的工作人员都有此病毒抗体,且正常人群(献血员)抗体阳性率高达46%,急性呼吸道感染的患儿抗体阳性率为19.28%,提示此病原体与人类可能有密切的关系.
关键词： 副粘病毒Tianjin株 NP基因 同源性及进化分析 -
副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析
目的 分析副粘病毒Tianjin株NP蛋白与其他SeV的同源性及种系进化关系,探讨其变异及抗原性. 方法 克隆NP基因,对其核苷酸和氨基酸序列进行同源性及进化分析.在原核系统中分3段表达NP蛋白. 结果 经Western blot分析,重组蛋白NP1、NP2和NP3能与副粘病毒Tianjin株抗血清特异反应,具有天然抗原性.Tianjin株与仙台病毒BB1株NP的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.5%和96.2%,与其他仙台病毒的同源性,在85.1%～88.7%和92.4%～94.7%之间.Tianjin株NP蛋白共有15个独特的氨基酸变异位点和11个与BB1株共有的变异位点.Tianjin株与BB1株NP核苷酸序列的差异大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异. 结论 副粘病毒Tianjin株属于仙台病毒新的进化分支.重组NP蛋白具有抗原性.
关键词： 副粘病毒Tianjin株 NP基因 原核表达 同源性及进化分析 -
副粘病毒Tianjin株RT-PCR检测方法的建立及初步应用
目的 建立检测副粘病毒Tianjin株的RT-PCR方法 ,为临床标本的检测提供参考依据.方法 根据副粘病毒Tianjin株F蛋白的基因序列,设计出一对特异性引物,以Tianjin株总RNA逆转录的cDNA为模板进行PCR扩增,然后对该方法 的敏感性、特异性进行检测.并将该方法 应用于临床84例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本的检测.结果 通过此方法 成功扩增出约500 bp的预期条带.将Tianjin株鸡胚尿囊液(血凝效价为1:1280)稀释到320倍时仍可出现阳性条带,对新城疫病毒、甲型流感病毒鼠肺适应株、人副流感病毒Ⅰ型、柯萨奇病毒B3m株、单纯疱疹病毒Ⅰ型及鸡胚尿囊液的PER检测结果 均呈阴性.84例下呼吸道感染患儿BALF标本中,其中2例阳性,阳性率为2.38%,与本实验室建立的双抗体夹心ELISA法检测结果 相接近.结论 建立的副粘病毒Tianjin株RT-PCR检测方法 是一种快速、灵敏、特异的方法 ,为患病儿童中Tianjin株感染情况的调查奠定了重要的基础.
关键词： 副粘病毒Tianjin株 仙台病毒 RT-PCR
