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  • SARS冠状病毒未知蛋白Orf 9b的克隆、表达和结构分析

    作者:李文;刘阳;兰蕾;刘铭楠

    从SARS病毒基因组中克隆Orf 9b基因并构建pET32-Orf 9b原核表达质粒,在原核细胞中表达目的重组蛋白并将其纯化.经肠激酶酶切后,得到分子量为11 kD的0rf 9b蛋白.ELISA检测表明重组Orf 9b蛋白可以与SARS康复病人血清反应而不与健康人血清反应.用圆二色光谱和红外光谱初步分析了重组Orf 9b蛋白的二级结构组成.圆二色光谱显示重组Of 9b蛋白中α-螺旋占12.5%,β-折叠占40%,无规则卷曲占47.5%,红外光谱显示重组Orf 9b蛋白中α-螺旋占13.7%,β-折叠占47.5%,无规则卷曲占37.9%,两种检测方法对重组Orf 9b蛋白结构分析的结果基本一致,提示Orf 9b蛋白富含β折叠,而α-螺旋含量较少.获得该重组蛋白及对其结构的初步分析为进一步研究Orf 9b蛋白的功能奠定基础.

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