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鸭胚成纤维细胞中鸭瘟强毒的增殖特性研究
通过细胞培养物光学显微观察、细胞超薄切片研究、定量PCR检测技术对鸭胚成纤维细胞中鸭瘟强毒的增殖特性进行了研究.结果表明:鸭瘟强毒接种鸭胚成纤维细胞后42 h,可使细胞培养物出现大量明显的蚀斑病变.细胞培养物的超薄切片电镜观察研究表明,病毒核酸在胞核内常集中分布,呈直径35～45 nm的圆形颗粒状;核衣壳在胞核和胞浆内都有分布,呈直径90～100 nm的网形颗粒状;成熟病毒位于胞浆空泡内,呈直径150～300 nm的圆形,有囊膜和皮层结构;病毒通过囊膜与胞膜融合入侵细胞,在核内生成核酸、装配核衣壳,在胞浆中得到皮层,出芽到胞浆空泡内获得囊膜,通过胞吐作用释放到胞外.定量PCR研究表明:鸭瘟强毒接种细胞后10 h开始明显复制,接毒后30 h时含量趋于稳定,接毒后22 h时开始向胞外释放,50 h时达大值,细胞和上清中病毒含量的增幅均为103左右,病毒主要存在于细胞中,其含量为上清的102～103倍.
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大蒜新素注射液抗鼠肝炎病毒3型的体外实验研究
目的:探讨大蒜新素(allitridin)在细胞水平对鼠肝炎病毒3型(mice hepatitis virus,MHV-3)的抑制作用.方法:细胞培养、蚀斑试验测定病毒滴度;MTT法进行药物毒性试验;蚀斑抑制试验检测大蒜新素的抗MHV-3活性,改变给药时间探索大蒜新素抗MHV-3作用环节.结果:大蒜新素半数中毒浓度(TC50)为75 mg/L,抗MHV-3病毒的半数有效浓度(IC50)为2.7 mg/L,治疗指数(TI)为27.78,大蒜新素对MHV-3病毒的抑制作用存在明显的量效反应关系(P＜0.01),并且对MHV-3病毒有预防和中和作用(P＜0.01).结论:大蒜新素在L2细胞中对MHV-3病毒有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的.
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HCMV AD169株感染复数(MOI)的确定
目的 通过蚀斑形成试验测定人巨细胞病毒(HCMV)AD169株的蚀斑(PFU)确定其感染复数(MOI)并纯化病毒.方法 HCMV AD169株接种7～8代HF细胞单层,37℃吸附,0.007琼脂糖覆盖层,1周后加第2层覆盖,2周后用0.000 5结晶紫染色5 min,记数,计算PFU及MOI;染色前,镜下挑取蚀斑保藏并鉴定.结果蚀斑经0.000 5结晶紫染色在HF细胞单层上呈紫色,很易识别,散在均匀分布,着色深,与周围区域界限明显,MOI=3.41×104.结论探索出HCMV AD169株感染复数(MOI)的测定方法.
关键词： 巨细胞病毒属/分离和提纯 蚀斑 感染复数 -
SARS灭活疫苗毒种特性和效力试验方法的研究和建立
目的验证SARS灭活疫苗生产用毒种和建立疫苗效力试验方法和评价疫苗有效性的方法和初步标准.方法将SARS灭活疫苗进行系列稀释后免疫小鼠、原液疫苗免疫家兔,用异株病毒作为攻击毒以蚀斑减少法测定血清中和抗体,并与一组SARS病人恢复期血清的中和抗体水平进行比较,初步建立疫苗的效力试验方法和评价标准.结果疫苗以不同稀释度免疫小鼠,能产生随不同稀释度疫苗相应梯度的中和抗体滴度,用原倍疫苗免疫的小鼠血清中和抗体可达495.2;原倍疫苗免疫家兔所产生的中和抗体GMT为55.0～79.9.无论是小鼠或家兔所产生的中和抗体对广东分离的病毒均较北京分离的病毒为高.南北不同区域的SARS病人恢复期血清中和抗体GMT为50.12～54.95,且发现北方人群样本的抗体高于南方人群样本.结论用小鼠和家兔作疫苗的效力试验模型具有较好的敏感性和重复性,且产生的抗体水平较高;选用的攻击病毒对多批用不同毒株生产的疫苗免疫后的动物抗体具有较高的一致性,可用于评价疫苗的效力.
