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大蒜新素抑制人巨细胞病毒即刻早期抗原表达的实验研究
目的:通过研究大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期抗原(HCMV IEA)的抑制作用,探讨大蒜新素体外对HCMV感染的预防、阻断和治疗效应及其机制.方法:采用细胞形态观察和MTT比色法检测大蒜新素的细胞毒性.以流式细胞术定量检测和比较大蒜新素不同剂量, 不同处理时间(24,48,72,96 h)以及病毒感染不同阶段(病毒吸附前、吸附时和吸附后)应用大蒜新素时HCMV IEA表达水平变化.结果:人胚肺成纤维细胞对大蒜新素的大耐受浓度为9.60 mg·L-1.病毒吸附后持续用药可显著抑制HCMV IEA的表达,用药72 h HCMV IEA抑制率达89.3%;大蒜新素预处理细胞后感染病毒,HCMV IEA抑制率为28.6%;药物与病毒吸附同时应用,即刻早期抗原(IEA)抑制率仅为10.3%.结论:大蒜新素体外持续用药可显著抑制HCMV IEA的表达;其预防作用较弱;即时抑制效应不明显.大蒜新素对IEA表达的明显抑制可能是大蒜新素抗HCMV效应的主要作用机制之一.
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大蒜新素对HCMV主要即刻早期抗原IE72和IE86在人胚肺成纤维细胞中表达的影响
目的:研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期抗原(IEAs)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响.方法:建立HCMV AD169毒株(MOI为2.5和0.25)感染细胞模型和大蒜新素(IC50和MTC浓度)干预模型.用Western Blot 检测药物处理后感染细胞中HCMV主要IEAs(IE72和IE86)表达强度变化,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应相比较.结果:在高MOI和低MOI感染时,不同浓度大蒜新素均能使HCMV IE72和IE86表达强度明显下降,对IE86表达的抑制率为IE72的2倍左右.与GCV相比,大蒜新素对IE72的抑制率低于GCV,而对IE86的抑制效应高于GCV.结论:大蒜新素明显抑制HCMV IE72和IE86表达,对IE86的抑制尤为显著,这可能是大蒜新素抑制HCMV增殖的关键作用环节之一.
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大蒜新素对鼠巨细胞病毒感染小鼠脾细胞IL-12基因转录、表达和功能的影响
目的:阐明大蒜新素对鼠巨细胞病毒(MCMV)感染小鼠脾细胞TH1类细胞调控因子IL-12基因转录、表达和功能的影响和其在抗MCMV机制中的作用.方法:60只BALB/c小鼠随机分成大蒜新素治疗组(20只)、安慰剂组(20只)和正常对照组(20只).治疗组在造模后24 h开始腹腔注射大蒜新素一般剂量(25mg·kg-1),每天1次,共14 d;安慰剂组和正常对照组注射等量生理盐水.各组分别于治疗后第3,5,7,10,14天各处死4只小鼠,RT-PCR法检测各组小鼠脾细胞IL-12 p35,IL12 p40 mRNA表达强度;双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中TH1细胞调控因子IL-12 p70蛋白和TH1类细胞因子IFN-γ的蛋白表达水平.结果:安慰剂组在感染后第3天IL-12 p70蛋白和IL-12 p35 mRNA表达显著增高,但第5天后急剧下降,显著低于正常小鼠;IFN-γ在感染后第3天达峰值,随后逐渐下降,在感染后第10～14天降至正常水平;而p40 mRNA则从感染第3天开始持续高水平表达.治疗组在治疗后第3天IL-12 p70蛋白,IL-12 p35,IL-12 p40 mRNA水平均显著增高达峰值(P＜0.05),但随后快速下降,在第5～14天稳定在正常细胞水平;IFN-γ亦在治疗后第3天表达至峰值,第5天稍有下降,但随后表达逐渐上调,在治疗后第7～14天显著高于安慰剂组和正常对照组(P＜0.01).结论:大蒜新素能完全纠正MGMV感染后第5～14天诱导的IL-12 p70蛋白和IL-12 p5 mRNA表达下调以及IL-12 p40 mRNA表达上调;同时还能持续上调IFN-γ表达,提示其还可能通过其他途径促进IFN-γ分泌.大蒜新素的上述作用有助于纠正MCMV诱导的TH1/TH2细胞网络失衡,增强特异性细胞免疫功能和抗病毒因子的分泌而有利于机体清除MCMV病毒,可能是其抗MCMV效应的另一作用机制.
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大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期、早期和晚期基因转录水平的影响
目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期(ie)、早期(e)和晚期(1)基因在转录水平的影响,探讨大蒜新素抗HCMV效应的作用机制.方法 建立HCMV AD169株(MOI =2.5)感染细胞和大蒜新素(9.6 mg·L-1)处理感染细胞模型,并用相应剂量(2.3 mg·L-1)的更昔洛韦(GCV)作比较,用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞感染后0.5,2,4,6,12,24h病毒u1122,ul123,ul54,ul83 mRNA水平的动态变化.结果 大蒜新素处理组ul122,ul123 mRNA的表达量始终明显低于感染对照组(P＜0.05),而更昔洛韦处理组ul122 mRNA在0.5 ～6 h与病毒对照组无明显差异.大蒜新素对AD169 ul122,ul123 mRNA的抑制率在感染后24h分别为75.2%,70.4%.2药物处理组ul54 mRNA表达量始终低于病毒对照组(P＜0.05),大蒜新素和更昔洛韦对ul54 mRNA的抑制率在感染后24h分别为45.4%,27.2%.在感染后6h各组ul83 mRNA表达明显增多,以病毒感染对照组变化为明显.大蒜新素和更昔洛韦对ul83 mRNA的抑制率在感染后24h分别为45.9%,26.2%.结论 大蒜新素可显著抑制HCMV AD169毒株ie基因(ul122和ul123)的转录,导致其mRNA表达明显降低,对e基因(ul54)和l基因( ul83)转录水平亦有所抑制,表明病毒ie基因可能是大蒜新素抗HCMV作用的主要环节.
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大蒜新素治疗小鼠巨细胞病毒性心肌炎作用研究
目的探讨大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎治疗作用及其抗CMV机制. 方法 60只BALB/c小鼠随机分成大蒜新素治疗组(20只)、安慰剂组(20只)和正常对照组(20只).大蒜新素治疗组接种MCMV K181后24 h开始用大蒜新素一般剂量(25 mg/kg)腹腔注射,每天1次,共14 d;安慰剂组和正常对照组仅用等量生理盐水.各组分别于治疗后第3、5、7、14天各处死5只小鼠,观察小鼠心肌组织病理损害;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠心肌组织细胞因子IFN-γ表达水平;用RT-PCR方法检测小鼠脾核转录因子T-bet mRNA表达强度. 结果 MCMV感染下调小鼠T-bet mRNA和TH1类细胞因子IFN-γ的表达(P＜0.01);大蒜新素能诱导MCMV性心肌炎模型小鼠转录因子T-bet mRNA和细胞因子IFN-γ的表达显著增加(P＜0.01),并显著改善MCMV感染小鼠心肌组织病理损害(P＜0.05). 结论大蒜新素通过上调转录因子T-bet mRNA表达进而促进TH1类细胞因子IFN-γ分泌,诱导和促进TH1优势应答反应,增强机体特异性细胞免疫功能而发挥抗MCMV作用.
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大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响
目的探讨大蒜新素(即大蒜素注射液)对鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus, MCMV)感染小鼠脾转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响. 方法 20只BALB/c小鼠被随机分成大蒜新素治疗组(10只)和安慰剂组(10只).均在MCMV Smith株接种24 h后分别用大蒜新素一般剂量(每天25mg/kg)和等量生理盐水腹腔注射,每天1次,连续2周.另设正常对照组(10只):不接种病毒,仅用等量生理盐水治疗.用PFU/ml测定小鼠脾组织病毒滴度;用RT-PCR方法检测小鼠脾转录因子T-bet/GATA-3 mRNA表达强度;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清细胞因子IFN-γ和IL-10表达水平. 结果 MCMV感染小鼠14 d,T-bet mRNA和IFN-γ的表达基本下降至基线水平,而GATA-3 mRNA和IL-10的表达显著增强;大蒜新素能诱导MCMV感染模型鼠转录因子T-bet mRNA和IFN-γ的表达显著增加(P<0.01),而转录因子GATA-3 mRNA和IL-10的表达显著下降(P<0.01);同时显著降低小鼠脾组织匀浆中病毒滴度(P<0.01). 结论 MCMV感染可导致TH1/TH2类细胞因子表达失衡,主要表现为IFN-γ表达明显降低和IL-10表达明显增高;大蒜新素通过上调转录因子T-bet mRNA的表达促进IFN-γ的分泌,并下调转录因子GATA-3 mRNA的表达抑制IL-10的分泌.
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大蒜新素对巨细胞病毒感染细胞周期蛋白基因表达谱的影响
目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)对感染细胞周期蛋白基因表达谱的影响及大蒜新素的干预效应. 方法利用基因芯片技术对比分析大剂量大蒜新素处理正常细胞和感染细胞(MOI=2.5)72*!h以及同期培养的感染和正常细胞周期相关蛋白基因(239条)表达谱的变化. 结果感染细胞有24条(10.04%)基因发生有意义的差异性表达;其中9条表达增加,15条表达降低.大蒜新素对11条HCMV感染所致表达改变的基因无影响;使HCMV感染下调作用消除的基因有11条;使HCMV感染上调作用消除的基因有2条.另外,药物对感染细胞和正常细胞基因表达均有影响的有2条;仅引起正常细胞基因表达改变的有3条. 结论 HCMV感染使部分细胞周期相关蛋白基因差异性表达可能是HCMV导致宿主细胞周期紊乱的原因之一.大蒜新素至少可使HCMV所致13条基因差异性表达作用消除,提示药物干预了病毒对细胞周期的影响.
关键词： 大蒜新素 人巨细胞病毒 细胞周期相关蛋白基因 基因芯片 -
大蒜素抗肿瘤的作用机制
大蒜素(diallyl trisulfide,allicin)又名大蒜新素,化学名二烯丙基三硫化物,是从大蒜球茎中分离出的一种化合物,有多种生物活性,有抗真菌、抗细菌、降血酯、降血压、防治动脉粥样硬化等心血管疾病的作用,并具有良好的抗癌,防癌的作用.大蒜素的抗肿瘤机制为:(1)阻断致癌物的合成、抗突变、抗畸变;(2)对肿瘤细胞的影响:直接杀伤;抑制肿瘤细胞增生,诱导细胞周期特异性阻滞,诱导凋亡、诱导肿瘤细胞分化及对细胞通讯的影响;(3)调节机体免疫功能:包括对红细胞、巨噬细胞,T淋巴细胞、NK细胞及IL-2的调节;(4)其他:对抗肿瘤药物的增敏作用和抗耐药.研究结果显示,大蒜素确实有很好的抗中瘤作用.对大蒜素抗肿瘤作用机制的研究很多,提示了大蒜素抗肿瘤作用是通过多个途径完成的.
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蒜素联合亚胺培南对耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌体外抗菌活性研究
鲍曼不动杆菌是目前临床上常见的条件致病菌,其耐药性特别是对碳青霉烯类抗生素的耐药性近几年来增长迅速[1],甚至出现了只对黏菌素敏感而其他抗生素均耐药的菌株[2],如何有效治疗多重耐药的鲍曼不动杆菌成为目前临床上一项重要的课题.大蒜素(allicin)又名大蒜新素,化学名为二烯丙基三硫化物,是从蒜的球形鳞茎中提取的挥发性油状物,是大蒜的主要有效成分.近年来,国内外学者对大蒜素的化学性质、药理作用和临床疗效进行了多方面的研究,证明大蒜素杀菌力强,抗菌谱广[3].本研究对大蒜素在抑制多耐药鲍曼不动杆菌的效果进行了初步探讨,现将结果报道如下.
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大蒜素的药理作用研究概况
大蒜为百合科葱属草本植物,有效成分为大蒜素.大蒜素(Allicin)又名大蒜新素,化学名为二烯丙基三硫化物,其结构式:CH2=CH-CH-S-S-S-CH2-CH=CH2.
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大蒜新素对脑缺血再灌注大鼠海马的保护作用
目的 探讨大蒜新素对脑缺血再灌注海马组织的保护作用与钙转运的关系.方法 采用4血管闭塞法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,大蒜新素10,20和30 mg·kg-1分2次于缺血前30 min和再灌注后10 min经尾静脉注入,每次注射总量的1/2.再灌注后24 h取大鼠海马,甲苯胺蓝染色显微镜下观察海马组织学改变及存活神经元密度;定磷比色法测定Ca2+-转运ATP酶活性;原子吸收法测定钙含量.结果 全脑缺血10 min再灌注24 h时,海马CA1区形态学改变明显,神经元密度明显降低;海马组织Ca2+-转运ATP酶活性降低;组织钙含量显著增加.静脉给予大蒜新素可使缺血再灌注海马组织形态学改变程度明显减轻,存活神经元密度增加,Ca2+-转运ATP酶活性增加,组织钙含量降低.结论 大蒜新素对全脑缺血再灌注后海马组织具有明显的保护作用;增加Ca2+-转运ATP酶活性、减少组织钙含量可能是其保护作用的机制之一.
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薄层扫描法测定大蒜中蒜氨酸的含量
葱属植物大蒜(Allium sativum Linn.)被誉为天然广谱抗菌药物,在心脑血管疾病预防、抗肿瘤、提高免疫力和抗衰老等方面有一定功能,并能降血糖、提高机体对葡萄糖的耐受量功能,对肝脏具有保护作用.蒜氨酸(alliin)是大蒜的功效成分,以稳定、无臭的形式存在于大蒜鳞芽中,在水的参与下与存在于细胞壁中的蒜酶(alliinase)发生化学反应,产生大蒜素(allicin),进一步分解产生大蒜新素等.由于大蒜成分的多样性和不稳定性,至今尚未有统一的标准方法对大蒜中的蒜氨酸进行含量测定.本实验以蒜氨酸为对照品,用薄层扫描法测定了大蒜中的蒜氨酸含量.为大蒜中功效成分的含量测定提供了质控依据.
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小檗碱、齐墩果酸和大蒜新素对糖代谢作用的体外研究
目的研究小檗碱、齐墩果酸和大蒜新素能否通过直接作用于肝细胞或刺激胰岛素分泌而产生降糖作用.方法采用与人肝细胞表型相似的HepG2细胞,检测24 h培养液中葡萄糖的消耗量.采用能稳定分泌胰岛素的βTC3细胞检测胰岛素的释放量.用MTT法监测细胞增殖的情况.结果小檗碱可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加69.1%(P<0.0001),齐墩果酸和大蒜新素可使糖耗量轻度增高.齐墩果酸还使βTC3细胞的胰岛素分泌量减少25%～29%(P<0.01),小檗碱和大蒜新素对胰岛素分泌没有明显的影响.结论小檗碱能通过肝细胞发挥显著的降糖作用.
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大蒜素的药理作用及其开发应用
大蒜素(allicin)又名大蒜新素,化学名二烯丙基三硫化物(CH2=CH-CH2-S-S-S-CH2-CH=CH2),是从蒜的球形鳞茎中提取的挥发性油状物,为大蒜的主要有效成分,被誉为天然广谱抗生素.近年来,大蒜素以其来源广、结构简单、生物活性作用明显、不易产生耐药性、价格低廉等优点,在防治心血管疾病的研究中日渐受到重视[1].大蒜素已被证实有抗心律失常、保护心肌、降低血压、抗动脉粥样硬化、改善冠心病心绞痛等作用.本文对其药理作用及开发应用的研究进展做一综述.
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大蒜新素抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导调节性T细胞扩增的体外研究
目的 在细胞水平研究大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染鼠胚肺成纤维细胞(MEF)诱导调节性T细胞(Treg)异常扩增的抑制作用.方法 建立MEF和T淋巴细胞的共培养体系,采用MEF对大蒜新素的大耐受浓度(MTC)处理MCMV感染的MEF 3 d后,再用实时定量PCR检测T细胞中叉头蛋白3(Foxp3)mRNA表达水平,流式细胞术检测效应性T细胞哑群杀伤性T细胞Ⅰ型(Tc1)、杀伤性T细胞Ⅱ型(Tc2)、辅助性T细胞Ⅰ型(Th1)和辅助性T细胞Ⅱ型(Th2)的百分比,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测共培养体系中自细胞介素10(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β的蛋白表达,标准蚀斑法检测共培养体系中的病毒负荷量,并与安慰剂组进行统计学分析比较.结果 MEF对大蒜新素的MTC浓度为9.83μg/ml.MTC浓度的大蒜新素可部分拮抗MCMV诱导的Foxp3基因表达上调(87±5比114±8,P<0.01);分别上调Tc1、Tc2和Th1百分比至(12.42±1.23)%、(4.28±0.56)%、(13.25±0.68)%,与安慰剂组[(6.85±0.92)%、(2.34±0.42)%、(9.32±0.86)%]比较差异均有统计学意义(均P<0.01);使IL-10和TGF-β蛋白表达水平分别降至(29.98±3.15)pg/ml和(3.48±0.23)ng/ml,均显著低于安慰剂组水平[(38.21±4.02)pg/ml和(5.31±0.59)ng/ml,均P<0.05];同时将体系中的病毒负荷量由(6.79±0.39)降至(5.03±0.08)(均P<0.01).结论 大蒜新素在体外可通过抑制Treg途径来增强抗病毒免疫.
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大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响
目的研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fas mRNA表达的影响.方法用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2.5、0.25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96 h凋亡细胞比率;大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg/mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2.5)后上述各时间点凋亡细胞比率.用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0.25)72 h后bcl-2和fas mRNA表达强度变化,并与正常细胞和感染细胞对比分析.结果正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2.68%);低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多,凋亡率峰值分别达8.85%(96 h)和25.63%(72 h);各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性,峰值分别为4.88%、6.47%和8.35%;但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降,大剂量药物处理72 h时效应为明显,凋亡细胞比率由25.63%降至16.24%.正常细胞高表达bcl-2,低表达fas基因;感染HCMV后,bcl-2表达显著下调,fas表达明显增强;大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞,fas表达水平明显低于感染细胞,但仍未恢复到正常细胞水平.结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂;病毒可通过下词凋亡抑制基因bcl-2和上调凋亡促进基因fas而发挥致凋亡作用.大蒜新素本身可诱导HELF凋亡,但却能明显抑制HCMV诱导的细胞凋亡,其抑制作用可能与药物干扰HCMV影响凋亡调控基因bcl-2和fas表达有关.
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大蒜新素体内外抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导的调节性T细胞扩增实验研究
目的 在体内外水平研究大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染导致调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)异常扩增的抑制作用.方法 72只MCMV感染小鼠随机分为安慰剂组和大蒜新素治疗组;并设72只同期模拟感染小鼠为对照,随机分为模拟感染对照组和大蒜新素对照组.分别于大蒜新素处理后1、7、14、28、60、120 d处死小鼠,获得脾细胞待测.采用Western blotting法检测脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度;流式细胞术分析CD4'CD25'Foxp3'Treg细胞在脾细胞中所占比率的变化.采用小鼠胚胎成纤维细胞对大蒜新素的大耐受浓度处理MCMV感染的胚胎成纤维细胞3 d后,采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测T细胞中Foxp3 mRNA和蛋白的表达水平.结果 整体研究发现,大蒜新素对正常小鼠脾细胞中Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率均无显著影响;但是在MCMV感染小鼠,大蒜新素可在感染慢性期显著减少Foxp3蛋白表达强度、降低调节性T细胞比率.体外细胞模型发现,大耐受浓度的大蒜新素加入共培养体系后可部分拮抗MCMV诱导的Foxp3基因和蛋白表达上调.结论 大蒜新素在体内外均可显著纠正MCMV感染导致的Treg异常扩增.大蒜新素通过影响Treg增殖进而增强抗病毒免疫而有利于机体清除CMV病毒,可能是大蒜新素诱导抗CMV免疫的另一重要机制.
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大蒜新素预防和治疗鼠巨细胞病毒性肝炎的实验研究
目的探讨大蒜新素在体内对鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染小鼠的预防及治疗作用.方法建立BALB/c小鼠MCMV重组病毒(插入LacZ基因)性肝炎模型,采用X-gal染色测定β-gal在肝、肾及肺组织中的表达.70只雌性BALB/c小鼠随机分为大蒜新素预防+治疗组(n=20),大蒜新素治疗组(n=20),更昔洛韦治疗组[60 mg/(kg@d),n=10],安慰剂组(n=10)及空白对照组(n=10).其中前两组又各均分为低、高剂量组[25,75 mg/(kg@d)],检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)水平和评估肝组织组织学活动性指数(HAI),并用原位杂交法检测肝组织中MCMV DNA水平.结果大蒜新素预防+治疗组及治疗组与安慰剂组相比较,ALT、肝脏HAI评分及MCMV DNA杂交的积分光密度均明显降低(P＜0.05),与更昔洛韦治疗组相比无显著差异;大蒜新素预防用药及加大用药剂量并不能显著降低ALT、肝脏HAI评分及MCMV DNA积分光密度水平.结论大蒜新素能减轻MCMV性肝炎模型鼠肝功能损害,改善肝脏病理变化和降低肝组织内病毒DNA负荷量,其治疗效果与更昔洛韦无显著差异,大蒜新素预防用药及加大用药剂量不能增加其病毒抑制效应.
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260大蒜的化学成分及检测方法研究
综述了近几年来对大蒜的化学成分研究概况以及主要成分的检测方法.
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大蒜新素治疗高脂血症59例疗效观察
高脂血症是高血压病和冠心病的主要致病因素[1].国内外大量文献报道或研究证实,调脂治疗能减少冠心病的事件(不稳定型心绞痛、急性心肌梗死、猝死)的发生率[2].因此,调脂治疗正受到广大医务工作者的普遍关注.作者自1998年开始探讨大蒜新素治疗高脂血症59例,现报道如下.
