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BCG-HPV16E7c疫苗对小鼠免疫效应的实验研究
目的 研究卡介苗(BCG)-人乳头状瘤病毒16型 (HPV16) E7c疫苗对小鼠的免疫效应和致病性.方法 用本研究组制备的BCG-HPV 16E7c疫苗腹腔内接种清洁级BALB/c鼠, 同时设磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、BCG空白菌对照组及BCG-pBCG 3000空白载体对照组,用酶联免疫法检测各组血清特异性抗体、流式细胞仪测定脾脏T淋巴细胞亚群及肝、肺组织病理学检查.结果 免疫后第2周和第4周BCG-HPV16E7c组每只小鼠的血清中检测到抗HPV16E7c特异性抗体,在第4周诱导产生的特异性IgG抗体滴度明显高于第2周,平均滴度为1∶200;免疫后第4周BCG-E7c组与各对照组比较,CD8+T细胞的百分率显著升高(P<0.05);免疫组小鼠肝、肺组织病理学检查和BCG对照组比较未观察到更为严重的病理学变化.结论 本研究组构建的BCG-HPV16E7c疫苗能诱导小鼠的体液免疫应答和细胞免疫应答,对小鼠无明显的毒性作用.
关键词： 宫颈癌 疫苗 人乳头状瘤病毒16型 免疫效应 -
宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构变异及其意义
目的了解宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因的结构及其原核表达蛋白的免疫原性.方法运用PCR的方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列,ITPG诱导原核表达HPV16 E7蛋白,ECL Western blot的方法检测表达蛋白的免疫原性.结果宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构中存在两处点突变,分别是第43位密码子由标准株CAA变为TAA,第76位密码子由标准株CGT变为TGT.原核表达的HPV16 E7变异蛋白不能被HPV16 E7单克隆抗体识别.结论宫颈癌组织中HPV16 E7基因存在两个点突变,突变后的E7蛋白失去了免疫原性.将这种变异的HPV16 E7用于疫苗的研究开发,可能因其表达蛋白丧失恶性生物学行为而具有较高的安全性.
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人乳头状瘤病毒16型E6基因的序列及其在HeLa细胞中的表达
人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)16型E6原癌蛋白作为抗原，能诱发机体产生细胞免疫和体液免疫，是宫颈癌治疗性疫苗研究的热点［1］。我们用PCR方法从重庆宫颈癌组织中扩增出HPV16 E6基因，并在HeLa细胞中成功表达E6原癌蛋白，为宫颈癌治疗性核酸疫苗的研究打下了基础。1 资料与方法1.1 资料1.1.1宫颈癌活检组织 取自重庆医科大学附属第二医院门诊患者。病理诊断为宫颈鳞状细胞癌。组织离体后迅速投入液氮，-70℃冷冻保存。1.1.2 引物 根据标准株［2］序列设计，上下游引物是5’TTGAAGCTTATGCACCAAAAGAGAACTGCAATG 3’和5’CATTCTAGATTACAGCTGGGTTTCTCTACGTG 3’，分别有HindⅢ，XbaⅠ酶切位点。由上海生工生物工程公司合成。
关键词： 宫颈癌 人乳头状瘤病毒16型 分子克隆 表达 -
HPV16的新型伪病毒对DNA特异性B细胞的靶向实验研究
目的:构建人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞(R4A)的靶向性.方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP表达型质粒,形成伪病毒.透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,并转染R4A细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率.结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染R4A细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达.结论:HPV16的新型伪病毒能成功转染R4A细胞,为系统性红斑狼疮(SLE)的靶向治疗提供了理想的策略.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 伪病毒 靶向性 -
宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义
目的探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义.方法运用PCR方法扩增HPV16 E6/E7基因,分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列,宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法.结果宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检出率为45%,显著高于宫颈炎组织中5%的检出率,两者有统计学差异.HPV16 E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异.结论HPV16 E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用.宫颈组织中HPV16 E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段.
关键词： 宫颈癌 人乳头状瘤病毒16型 E6基因 PCR -
HPV16 L1基因的原核表达及免疫反应性鉴定
目的:在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒16型(HPV 16)主要衣壳蛋白L1, 并鉴定其免疫反应性.方法: 将HPV-16 L1基因克隆入原核表达载体pThioHisC中, 构建重组表达载体.以重组载体分别转化大肠杆菌Top10和DH5α, 在IPTG诱导下表达外源基因, 用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定和分析.结果: 构建了HPV-16 L1基因的原核表达质粒pThioHisC/HPV-16 L1, 并在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)约为70 800的蛋白.表达的蛋白能与抗HPV-16 L1抗体发生特异性反应.结论: 在原核细胞中成功地表达HPV-16 L1基因, 为HPV-16 L1疫苗的研制提供了必要的基础.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 主要衣壳蛋白 原核表达 免疫反应性 -
基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗对Hela细胞的杀伤作用研究
目的:构建基于人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16型的肿瘤疫苗,并检测其对Hela肿瘤细胞的杀伤活性.方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP和白喉毒素(Diphtheriatoxin,DT)A链(DT-A)的双表达质粒,形成伪病毒疫苗.透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,并转染Hela肿瘤细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率和对Hela肿瘤细胞的杀伤能力.结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染Hela肿瘤细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达和对Hela肿瘤细胞的杀伤作用.结论:基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗能成功转染Hela肿瘤细胞并产生杀伤活性,为肿瘤的基因治疗提供了依据.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 肿瘤疫苗 杀伤活性 -
35例维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E7致癌基因突变分析
目的本研究旨在检测HPV16E7基因在新疆南部维吾尔妇女宫颈癌组织中的突变.方法从35份新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取组织DNA,作为模板,PCR扩增HPV16 E7全长基因,PCR 产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16E7基因的突变.结果 PCR检测结果宫颈癌组织中HPV16E7阳性率为82.86%(29/35);27个E7分离片段的测序和序列分析表明,26个分离株E7基因与原型相同,1个分离株E7基因核苷酸发生2处突变,即647位(在HPV16基因组中的位置)的A→G,氨基酸由Asn变异为Ser;845位的T→C,氨基酸不变.结论新疆南部地区维吾尔妇女宫颈癌患者感染的HPV16中存在E7基因的变异株,该变异株可能是由人口流动传入.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 宫颈癌 E7 基因突变
