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感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出B亚群禽白血病病毒
通过血清学、病理学以及病毒学检测,首次在国内从感染ALV-J的海蓝白商品蛋鸡群中分离到B亚群禽白血病病毒(ALV-B).ELISA检测该鸡场血清样品(92份)显示,ALV-A/B型抗体阳性率为16.3%,ALV-J抗体阳性率为13%,其中有1只鸡呈现抗体双阳性.取3只表现临床症状病鸡做病理组织学观察,在肝脏同一位置发现淋巴细胞样瘤细胞和髓细胞样瘤细胞增生灶,其它组织器官(除脑、神经和法氏囊)也有不同程度的两种瘤细胞增生.根据文献设计合成ALV-A、ALV-B、ALV-J、MDV和REV的特异性引物.取该3只病鸡肝脏病料研磨接种DF-1细胞,培养7～10天后提取培养细胞DNA,PCR扩增获得1 100bp的ALV-B特异性片段和924bp的ALV-J特异性片段,其中有1只鸡为ALV-B和ALV-J双阳性,而ALV-A、MDV、REV的PCR结果为阴性,因此获得ALV-B和ALV-J各两株分离株.对ALV-B、ALV-J扩增序列进行遗传进化树分析表明,两ALV-B分离株与其代表株的同源性分别为92.8%和94.7%;两ALV-J分离株与英国原型株同源性分别为96.9%和91.5%,与美国原型株同源性为85.9%和81.5%,与国内分离毒株同源性在87.0%～98.7%之间.本研究在国内分离到ALV-B毒株,并证实了ALV-B、J在同一只鸡体内的混合感染,应引起养禽业及相关研究部门的高度重视.
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禽白血病病毒J亚群自然感染蛋鸡病毒负载、受体表达及致瘤谱关系
J亚群禽白血病病毒(Subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)通过与宿主细胞膜上的受体chNHE1蛋白结合感染细胞并引起宿主发病,进而引起肿瘤.本研究对确诊为ALV-J感染的肿瘤携带鸡进行病理组织学观察和病毒分离,应用荧光定量PCR技术检测ALV-J自然感染蛋鸡体内ALV-J负载量与其受体chNHE1蛋白mRNA表达量,分析ALV-J负载量、受体表达量及致瘤谱之间的相关性.结果显示:ALV-J在蛋鸡及地方品种鸡体内所诱发的肿瘤呈现多样化,但是病毒负载量与肿瘤谱相关性不明显;ALV-J负载量与chNHE1蛋白mRNA表达量呈正相关;组织在发生肿瘤时chNHE1蛋白mRNA表达量升高,可见,chNHE1蛋白不仅是ALVJ感染宿主细胞的受体,而且在肿瘤形成过程中也发挥重要作用.本研究为ALV-J致瘤机制的深入研究提供了科学基础.
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J亚群禽白血病病毒跨膜蛋白gp37基因克隆与表达
禽白血病病毒(ALV)跨膜蛋白(TM)在病毒-细胞融合过程中起关键作用,其蛋白内部存在的许多高度保守序列有可能成为抗病毒的重要靶点.对TM结构和功能的深入研究将为抗禽白血病病毒乃至其它反转录病毒相关制剂的研制提供科学的理论基础.本研究通过PCR从本实验室分离的ALV-J山东汶上毒株获得表达TM的gp37基因,克隆连接pMD18-T载体并测序,从已构建的质粒pMD18-T-gp37中酶切回收gp37基因,构建重组转移载体pFastBacHTb-gp37.利用昆虫杆状病毒表达系统对gp37基因进行表达,通过间接免疫荧光和Western blot 检测gp37基因表达产物,间接免疫荧光显示,重组杆状病毒感染的sf9细胞呈现明显的强阳性反应;Western blot分析,重组病毒感染的sf9细胞蛋白显示出约21kD的阳性条带.结果表明,gp37基因在sf9细胞内表达成功.
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抗J亚群禽白血病病毒的鸡胚成纤维细胞系建立
将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-J env)插入pcDNA3.1真核表达载体,构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞.细胞经传30代后,冻存.13个月后复苏,置不含药物的培养基中传代培养.连续传40代后,分别用PCR、Southern blot、间接免疫荧光(IFA)及Western blot对该细胞中的env基因进行了检测,并进行了抗病毒感染分析.研究结果表明,通过Zeocin药物筛选获得了稳定表达ALV-J env基因的鸡胚成纤维细胞系,命名为pcDNA-env-DF-1细胞.该细胞在体外抗ALV-J感染试验中,能抵抗1×104个TCID50病毒感染量,提示所构建的细胞系具有良好的抗病毒作用.这一细胞系的构建为研究ALV-J Env蛋白与宿主细胞表面受体相互作用分子机理提供了很好的工具.
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J亚群禽白血病病毒NX0101株的TCID50与p27抗原之间的相关性研究
为了研究J亚群禽白血病病毒在细胞上接种后的半数细胞培养物感染量(TCID50)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,并探讨其意义.本试验将J亚群禽白血病病毒NX0101株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10d取样,检测10d的TCID50值与p27抗原的S/P值之间的相关性.同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1代、第5代、第10代、第15代和第20代分别进行TCID50滴度的测定和p27抗原检测.结果表明:在CEF细胞上接种的NX0101株J亚群禽白血病病毒连续10d的TCID50值与p27抗原之间存在显著的相关性(r=0.85277;P＜0.0001)呈正相关；在DF-1细胞系上传的不同代数之间也呈显著正相关(r=0.93000;P=0.0220).由此可以推测J亚群禽白血病病毒的TCID50与p27抗原呈显著正相关,因而可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值对病毒的TCID50值进行估测.
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J亚群禽白血病病毒研究进展
禽白血病病毒(Avian leukosis viruses,ALVs)是以主要引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反录病毒群.
