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猪瘟病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及鉴定
根据猪瘟病毒衣壳蛋白(C)基因序列设计一对引物,RT-PCR扩增获得编码猪瘟病毒衣壳蛋白的C基因,将其插入到含有葡萄球菌核酸酶(SN)基因的真核表达载体pcDNA-SN中,筛选获得重组质粒pcDNA-C-SN.脂质体转染猪肾细胞(PK-15),并经G418稳定筛选,通过RT-PCR、免疫印迹和间接免疫荧光鉴定表达的融合蛋白,体外DNA消化试验检测核酸酶活性.结果表明融合蛋白(C-SN在PK-15细胞中获得了稳定表达,能够被兔抗猪瘟病毒衣壳蛋白多抗所识别,并具有良好的核酸酶活性,能够对DNA进行切割.同时,稳定表达融合蛋白C-SN的PK-15细胞系中能够有效抑制猪瘟野毒的增殖,使其感染性降低102~103倍.这些结果为进一步将衣壳蛋白靶向病毒灭活策略应用于抵抗猪瘟病毒感染奠定了基础.
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抗J亚群禽白血病病毒的鸡胚成纤维细胞系建立
将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-J env)插入pcDNA3.1真核表达载体,构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞.细胞经传30代后,冻存.13个月后复苏,置不含药物的培养基中传代培养.连续传40代后,分别用PCR、Southern blot、间接免疫荧光(IFA)及Western blot对该细胞中的env基因进行了检测,并进行了抗病毒感染分析.研究结果表明,通过Zeocin药物筛选获得了稳定表达ALV-J env基因的鸡胚成纤维细胞系,命名为pcDNA-env-DF-1细胞.该细胞在体外抗ALV-J感染试验中,能抵抗1×104个TCID50病毒感染量,提示所构建的细胞系具有良好的抗病毒作用.这一细胞系的构建为研究ALV-J Env蛋白与宿主细胞表面受体相互作用分子机理提供了很好的工具.
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自然杀伤细胞表面受体NKp46的研究进展
一、自然杀伤细胞(natural killer cells,NK细胞)简介NK细胞来源于骨髓的淋巴细胞,是机体抵抗病毒感染和防止肿瘤发生的第一道防线,与T细胞不同,NK细胞无需抗原的刺激即可杀伤靶细胞.NK细胞表面活化性受体和抑制性受体的平衡调控NK细胞的活性[1].NK细胞表面受体包含在免疫球蛋白超家族(immunogloblin gene superfamily,IgSF)或细胞毒性T淋巴细胞受体(cytotoxic T lymphocytes receptor,CTLR)两个超家族中.NK细胞表面的活化受体分为人类白细胞抗原I(human leukocyte antigen-I,HLA-I)类分子相关受体和非相关受体,前者包括杀伤细胞免疫球蛋白样受体二区域(killer cell immunoglobulin-like receptor,2 do-mains short,KIB2DS),杀伤细胞免疫球蛋白样受体三区域(killer cell immunoglobulin-like receptor,3 domains short,KIR3DS)及NK细胞受体2C(natural killer cell group 2C,CD94/NKG2C);后者主要有NK细胞受体2区域(natural kil-ler cell group 2D,NKG2D)和自然细胞毒性受体(natural cytotoxicity receptors,NCR;包括Nkp46、Nkp30、Nkp44)及DNAX辅助分子1(DNAX accessory molecule-1,DNAM-1)[2];而相应的抑制性受体为KIR2DL、KIR3DL及CD94/NKG2A等.
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T淋巴细胞亚群和病毒感染
细胞免疫功能在人体抗病毒感染中发挥重要作用,各种病毒感染性疾病的转归与细胞免疫功能尤其是与T淋巴细胞功能密切相关.临床上目前缺乏体内直接检测T淋巴细胞功能的手段,主要靠体外间接的方法来评估.如检测外周血中T淋巴细胞及各亚群数量和比例、增殖功能及产生细胞因子的能力,主要方法有ELISA、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、流式细胞术(FCM),其中FCM鉴于其独特的优势在临床中应用广泛.
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Toll样受体与病毒感染研究进展
Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是模式识别受体家族的一员,在哺乳动物中至今已发现有11种TLRs.TLRs识别病毒后能够刺激前炎症因子的产生,激活抗原提呈细胞,启动机体的天然免疫和获得性免疫,是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁.激活的TLRs既可促进机体抗病毒保护免疫反应,也可恶化病毒诱导的疾病.本文综述了TLRs与病毒的相互作用以及在病毒感染中的正负反馈调节作用,对深入了解病毒的致病机制和发展抗病毒疗法具有指导意义.
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iKIR-HLA错配和aKIR活化在异基因造血干细胞移植中分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应的作用
自然杀伤( natural killer,NK)细胞是一类重要的免疫细胞,在机体免疫应答中起着抗病毒感染、抗肿瘤和免疫调节的作用.NK细胞活化后通过释放穿孔素启动靶细胞的凋亡,特异性地杀伤靶细胞[1].同时,NK细胞还能分泌细胞因子和趋化因子如y干扰素(IFN-y)、肿瘤坏死因子(TNF)-α以及GM-CSF等,是机体天然免疫的主要承担者,也是获得性细胞免疫核心调节细胞.除了直接作用于靶细胞以外,这些杀伤介质还可以促进其他免疫细胞的分化与活化[2].
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中药抗病毒感染的研究近况
病毒是指一大类绝对细胞内寄生复制增殖的只含一种类型核酸的非细胞型微生物,所致的疾病在所有感染性疾病中占75%以上,且后遗症较多.大多数病毒对抗生素等西药不敏感,目前已成为困扰医学界的一大难题.医用外源性干扰素、白细胞介素-2等能抑制病毒复制,提高机体细胞免疫功能,治疗前景良好,但费用昂贵,且大量使用尚有一定不良反应.而中医药临床防治具有独特效果,毒副作用小,药源丰富,价格低廉,通过调节整体免疫功能抑制病毒复制,阻止病毒致细胞病变,改善临床症状快等,在治疗病毒感染性疾病上历史悠久,应用广泛,显示出了独特的优势.笔者就近5 a来中医药防治病毒感染性疾病中,对中药抗病毒感染作用及其机制的实验研究和抗病毒感染临床应用等方面作一概述.
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关于乙型肝炎患者实施抗病毒感染治疗的有效性分析
目的:研究乙型肝炎患者实施抗病毒感染治疗的有效性.方法:随机选取60例在我院确诊的乙型肝炎患者作为主要研究对象.一组患者为感染治疗组,一组患者为对照分析组,各组患者30例,对照分析组患者接受常规治疗,感染治疗组患者则需要接受抗病毒感染治疗,对比两组治疗结果.结果:感染治疗组治疗总有效率为90.00%,对照分析组治疗总有效率为66.67%.感染治疗组不良反应发生率为10.00%,对照分析组不良反应发生率为23.33%.治疗后感染治疗组患者IL-18以及IFN-γ与对照分析组患者相比有着明显的差异.感染治疗组患者HbeAg、HBV-DNA的阴转率以及ALT复常率和对照分析组相比,有着明显的差异.两组差异明显,具有明显的统计学意义P<0.05.结论:在乙型肝炎患者治疗过程中使用有效的抗病毒感染治疗可以促使乙型肝炎患者治疗总有效率得到明显的提升.
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视黄酸诱导基因-I样受体与抗病毒固有免疫的研究进展
机体的固有免疫应答在抵抗病毒感染方面发挥着重要作用,该应答的前提是参与固有免疫的细胞通过模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)对病毒的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)进行识别,发生受体配体反应,进而诱导干扰素和促炎症细胞因子的表达,发挥抗病毒免疫效应.
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microRNA与免疫系统
microRNA是一种长约22 nt的非编码性小RNA,通过与靶基因的3'非翻译区(3'-UTR)结合来调控靶基因的表达.microRNAs的功能涉及多种生物学过程,与细胞分化、器官形成、肿瘤发生等密切相关.近年来发现,microRNAs在免疫细胞的产生、发育以及免疫应答过程中有着重要的作用.本文主要对microRNAs在免疫系统中的发展及对免疫功能调控的新研究进展作一综述.
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TLR信号转导通路及其抗病毒感染机制的研究现状
Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是近年来发现的机体识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)从而激活固有免疫应答的重要受体系统,并可激起适应性免疫应答,其通过介导多种信号转导通路激活固有免疫,与宿主抵抗病毒感染、炎症反应及自身免疫性疾病有直接关系.本文就TLR的分子结构、分布、识别的配体、信号转导通路及抗病毒感染机制等的研究现状作一综述.
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AIM2炎性复合体识别细胞内DNA启动机体固有免疫应答
天然免疫应答在机体抵抗病毒感染中起到非常重要的作用.多数情况下,进入机体的病毒被免疫细胞表面的模式识别受体识别,引起多种细胞因子包括干扰素等的释放,触发固有免疫应答.但目前对于识别胞浆DNA的受体尚不甚了解.目前发现DAI(DNA-dependent activator of IFN-regulatory factors)和NALP3(neutrophilic alkaline phosphatase)能够参与识别DNA.NALP3识别腺病毒来源的DNA.但有研究发现某些其他类型的DNA可以诱导IL放,启动固有免疫应答.
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RNAi技术抗病毒感染的研究
RNAi技术是近年来发现的一项基因沉默的新技术,在各种疾病的基因治疗研究中,发挥出了巨大的潜力和独特的效果.在抗病毒感染领域,RNAi技术可以防止病毒入侵,抑制病毒复制,减少病毒RNA数量,阻断病毒蛋白的表达,从而发挥防治病毒性疾病的作用.
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MicroRNA是研究肿瘤发生发展与耐药机制的有力工具
MicroRNA(简写为miRNA)是近几年新发现的一类内源性长度为21~25nt的非蛋白质编码的单链小分子RNA,可通过RNA干扰这种独特的方式影响着生命活动中的诸多方面,包括肿瘤的发生、发展、耐药,胚胎的分化、发育,细胞的凋亡及细胞抗病毒感染等.
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2015年下半年美国FDA批准的新分子实体与评价:心血管和精神系统疾病、抗病毒感染、女性性欲低下障碍、糖尿病治疗用药和化疗止吐药
2015年下半年,FDA批准了31个新分子实体和新生物制品。本文介绍和评价心血管和精神系统疾病、抗病毒感染、女性性欲低下障碍、糖尿病治疗用药和化疗止吐药。
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雄黄朱砂抗病毒感染的新方法
目的:介绍抗病毒感染用药的新方法.方法:用现代医学理论揭示病毒蛋白酶的生物特性和病毒的生物弱点.把中药化学、生物化学、微生物学和药理学等学科的医学知识链接起来.寻找抗病毒的新的有效途径.介绍了两种新的抗病毒中药:雄黄和朱砂.并介绍了这两种中药的制剂和用药方法.结果:雄黄和朱砂治疗各种病毒感染确有疗效,其科学性已经得到医学实践的检验.结论:中国有很好的抗病毒药,可治疗各种病毒感染,中医药科学这座巨大的宝库,将为人类医学发展带来更多,更好的贡献.
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中医药抗病毒感染的研究进展
目的:探讨中医药抗病毒感染的研究进展.方法:总结、归纳和分析2001年1月至2011年12月中医药抗病毒感染的实验研究进展、临床应用进展及作用机理.结果:中医药抗病毒应用已经遍及国内常见病毒感染性疾病,疗效显著,中医药对病毒具有多重作用,很少产生耐药性,部分药物还兼有解热、增强机体免疫功能等优势.结论:中医药抗病毒感染性疾病不但疗效显著,而且表现出在治疗方面不同于西药的一些特点和优势,应用前景广泛.
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RNA干涉及其在抗病毒感染中的应用前景
1998年,Fire等[1]在研究控制线虫的基因表达方法时,意外地发现由正义和反义RNA退火形成的双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)引起的基因表达的抑制程度远远高于单独应用正义或反义RNA.
关键词: RNA干涉(RNAi) 抗病毒感染 siRNA -
TLR3/TRIF信号转导通路与病毒性心肌炎的研究进展
Toll样受体(TLRs)是一组天然识别受体,其所识别的配体具有特异性.自从发现TLR3配体为双链RNA(dsRNA)后,近些年来TLR3在抗病毒免疫中的作用引起越来越多的关注,其在病毒性心肌炎发病机制中可能发挥着重要作用.
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SUMO化修饰在病毒感染中的作用研究进展
Small ubiquitin-related modifier (SUMO)是一类重要的类泛素蛋白,其修饰过程与泛素类似,但功能不尽相同,SUMO通过对底物蛋白的修饰来调节蛋白间的相互作用、定位及稳定性等功能.近年来,包括一些病毒蛋白在内的大量底物蛋白陆续被发现,SUMO化作为一种重要的蛋白质翻译后修饰,在病毒对宿主细胞的感染中既可发挥促进病毒感染的作用,也可发挥抑病毒感染的作用.