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抗HIV-1细胞毒性T细胞克隆的体外功能研究
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)特异细胞毒性T细胞(Cytotoxic T-lymphocytes,CTL)是产生保护性免疫应答反应的重要宿主细胞.由于HIV 1特异性CTL免疫应答反应的异质性,CTL有效抗HIV-1病毒反应的功能机制仍然不明确.为了研究HIV-1特异性CTL抗病毒反应的功能特性,本研究应用分离培养的HIV-1特异性CTL克隆细胞株在细胞水平直接测定抗原肽刺激CTL产生的多种功能反应.选取12株具有不同HLA分子和抗原识别表位的HIV-1特异性CTL克隆细胞平行进行多种体外功能实验,包括杀伤活性实验、脱颗粒功能实验、胞内多重细胞因子测定实验,并对CTL的细胞毒性颗粒成分和耗竭分子表达进行定量分析.本研究发现HIV-1特异性CTL克隆细胞的杀伤活性与脱颗粒功能紧密相关,杀伤活性和脱颗粒功能又与多种细胞因子的生成水平和多重功能性相关.这些发现提示HIV-1特异性CTL克隆细胞的多种功能反应之间具有协同调节的机制特点.
关键词： 人类免疫缺陷病毒1型 细胞毒性T细胞 免疫应答反应 功能实验 -
用携有存活蛋白基因的重组腺病毒载体转染树突状细胞诱导细胞毒T细胞抗淋巴瘤免疫效应
本研究探讨转染survivin(SVV)基因的树突状细胞(DC)体外诱导特异性抗淋巴瘤的免疫效应.对人外周血DC进行诱导培养,以Ad-SVV转染DC,用Western blot鉴定Survivin的表达,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,以ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12含量.结果表明:在MLR中,刺激应答比(S/R)为1:5、1:10、1:50和1:100时,转染Ad-SVV的DC有较强刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;转染Ad-SVV的DC组所诱发的CTL活性明显高于对照DC组;转染病毒后第2天,转染Ad-SVV的DC组的IL-12分泌水平高于对照DC组.结论:含存活蛋白基因的DC能够在体外诱导特异性CTL效应,对CA46细胞有明显的杀伤作用.
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丙型肝炎病毒非结构区5个细胞毒性T细胞表位的鉴定
目的 采用T细胞表位预测软件结合体外实验鉴定丙型肝炎病毒(HCV)特异性细胞毒性T细胞(CTL)表位.方法 采用T表位预测软件Rankpep预测HCV特异性CTL表位,选择候选CTL表位加以合成;用候选CTL表位肽分别刺激HCV感染者以及健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的斑点形成细胞(spots forming cells,SFC)的水平,采用细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining,ICS)检测PBMC中肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞的水平.结果 用5条候选CTL表位肽[NS3 450(TVPQDAVSR)、NS3 594(GPTPLLYRL)、NS4b 78(SMMAFSAAL)、NS5a 416(SEENVSVVF)和NS5a 367(TVSSALAEL)]分别刺激10个HCV感染者和2个健康者的PBMC后,健康者的PBMC不产生IFN-γ而7个HCV感染者的PBMC产生IFN-γ;HCV感染者的PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的细胞的频率为(5-36)SFC/105 PBMC,肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞占总CD8+T细胞的百分比为0.02%～0.25%.结论 ELISPOT结果和ICS结果证实5条肽NS3 450、NS3 594、NS4b 78、NSSa 416和NS5a 367为全新的HCV特异性CTL表位.
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丙型肝炎病毒CTL表位的HLA-A2限制性及其免疫学效应研究
目的 研究前期鉴定的5条丙型肝炎病毒(HCV)特异性细胞毒性T细胞(CTL)表位的HLA-A2限制性及其免疫学效应.方法 基于T2胞株,采用MHC-肽复合物稳定性试验研究前期鉴定的HCV特异性CTL表位与HLA-A2分子的亲和力;采用细胞内细胞因子染色(intracellular cy-tokine staining,ICS)和ELISPOT研究七述HLA-A2限制性CTL表位体外刺激HLA-A2刚性外周血单个核细胞(PBMC)产生肽特异性CTL的效应;采用CTL杀伤试验研究上述肽特异性CTL杀伤靶细胞(负载相同肽的T2细胞)的效应.结果 前期研究鉴定的5条CTL表位肽中,NS4b_78(SMMAF-SAAL)和NS5a_367(TVSSALAEL)与HLA-A2分子有高亲和力(FI1);ELISPOT结果显示NS4b_78(SMMAFSAAL)和NS5a_367(TVSSALAEL)可诱导高水平的分泌IFN-γ的效应细胞[分别为(60±6)SFC/10~4PBMC vs(4±1)SFC/10~4PBMC,P<0.001;(10±3)SFC/10~4PBMC vs(2±1)SFC/10~4PBMC,P<0.001];ICS结果证实这两条肽刺激HLA-A2阳性PBMC后,在CD8~+T细胞中产生了高百分比的CD8~+IFN-γ~+T[分别为(2.33±0.22)%vs(0.05±0.01)%,P<0.001;(0.36±0.06)%vs(0.03±0.01)%,P<0.001];并且,肽特异性CTL可特异性杀伤负载相同肽的T2细胞.结论 NS4b_78(SMMAFSAAL)和NS5a_367(TVSSALAEL)受HIA-A2限制,并具有较好的免疫原性.
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结肠癌组织微环境对树突状细胞的影响
目的 探讨结肠癌组织匀浆上清液模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响,以及血管内皮生长因子A(VEGF-A)在其中所起的作用.方法 制备新鲜结肠癌及癌旁组织匀浆上清液.分离人外周血单个核细胞,含重组人粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和rhIL-4的1640培养液诱导DC,第2天在此基础上设结肠癌匀浆上清组、癌旁组织匀浆上清组、VEGF-A组及正常DC组,第4天加入结肠癌细胞株SW620抗原,第6天加入脂多糖,第8天收集各组细胞.ELISA检测肿瘤组织匀浆上清液中VEGF-A含量.观察DC形态,流式细胞术检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a表达,CCK-8检测T细胞增殖率及杀伤率.结果 结肠癌组织匀浆上清VEGF-A含量明显高于癌旁组织(P＜0.05);与正常DC组相比,结肠癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制,数目减少,表面抗原表达率明显下降(P＜0.01),混合淋巴细胞反应能力及杀伤力也明显下降(P＜0.01);而VEGF-A组细胞数目及形态与正常DC组相比无明显改变,对所检测的Dc表面抗原并无明显抑制(P＞0.05),但在功能实验中它却起到了明显抑制T细胞增殖及杀伤功能的作用.结论 结肠癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及功能有明显的抑制作用,在该过程中VEGF-A起到抑制T细胞免疫功能的作用,但该作用并非通过抑制DC共刺激分子表达而实现.
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HPV多肽致敏的树突状细胞体外激发特异性CTL能力的研究
目的 观察以高危型人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6和E7基因编码的多肽E613-21(KLPDLCTEL)和E786-94(TLGIVCPI)为抗原负载的树突状细胞(DC)体外诱导特异性CTL的能力.方法 采集HPV+HLA-A2+宫颈癌患者外周血,分离单核细胞(Mo)与外周淋巴细胞(PBL)；将Mo诱导成DC后负载E6和E7多肽,用其反复致敏PBL(3次)；ELISA法检测致敏细胞上清细胞因子分泌水平；流式细胞标记法检测致敏细胞中特异性CTL的比例；MTT法检测致敏细胞杀伤靶细胞的能力.结果 11例HPV 16+ HLA-A2+宫颈癌患者DC平均得率为(10.79±0.88) ×l06(每100 ml外周血),CD11c+ HLA-DR+为(97.15±2.41)％,其中CD80+为(84.28±5.39)％,CD83+为(85.17+5.06)％,CD86+为(97.74±0.87)％.PBLs致敏3次后,平均增殖(15.4±1.5)倍；致敏第21天上清细胞因子水平分别为:IL-2(2551.9±195.3) pg/ml、IL-12(554.9士64.0)pg/ml、IFN-γ(2416.9±281.7)pg/ml,TNF-α(632.4±71.1) pg/ml,明显高于未致敏组(P＜0.05),IL-10(235.1+34.7) pg/ml与对照组比较无显著差异；特异性CTL的平均比例为(6.32±1.54)％,明显高于对照组(P＜0.05),对负载E6、E7多肽的T2细胞株杀伤率明显高于对照组(P＜0.05).结论 HPV E6和E7混合多肽负载的DC体外能有效地诱导特异性CTL,刺激Thl型细胞因子的分泌,为治疗型宫颈癌疫苗的研制提供科学依据.
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人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物负载树突状细胞对体外免疫应答的影响
目的:研究人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物对体外免疫应答反应的影响.方法:体外诱导培养人脐血树突状细胞(DC).人卵巢癌细胞SKOV3分别用光动力学方法(激光照射)及冻融的方法制备细胞裂解物,与DC共培养48 h,RPMI1640与DC培养作为阴性对照,采用流式细胞仪检测DC免疫表型CD1a、CD80、CD86、HLA-DR的改变,用ELISA方法检测培养上清IL-12含量的改变.体外培养T细胞,用负载裂解物的DC诱导生成细胞毒性T细胞(CTL),MTT法检测CTL对人卵巢癌细胞的杀伤效应.结果:在体外,人卵巢癌细胞光动力学裂解物较冻融裂解物更能促进DC的成熟,表现为DC细胞表型中共刺激分子CDS0、CD86上调,分泌更多的IL-12,能诱导CTL产生更强的特异性肿瘤细胞杀伤效应.结论:人卵巢癌细胞的光动力学细胞裂解物较冻融细胞裂解物在体外更能促进IX:成熟,并引发CTL的特异性肿瘤杀伤效应,因此,具有更强的肿瘤疫苗样作用.
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慢性乙型肝炎患者外周血Tc和Ts细胞分析
目的:探讨慢性乙型肝炎病毒感染后外周血Tc细胞和Ts细胞状态.方法:用双重染色免疫细胞学技术检测40例慢性乙型肝炎患者外周血Tc和Ts细胞,并与HbsAb(+)、HbcAb(+)健康人对比.结果:慢性乙型肝炎外周血Tc细胞水平低于对照组,Ts水平高于对照组,差异均有显著性.结论:慢性乙型肝炎患者外周血Tc和Ts细胞水平与HbsAb(+)、HbcAb(+)健康人不同,这两种细胞水平可能与乙型肝炎病毒感染后慢性化机制有关.
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共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究
目的研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞(CTL).方法脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达.取pGPIL-2 免疫鼠脾细胞,检测 pGPIL-2 诱导的细胞毒性 T 细胞杀伤活性.结果杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL 效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞.结论 pGPIL-2可有效地诱导CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据.
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HIV和结核分枝杆菌共同感染的免疫学机制
人类免疫缺陷病毒(HIV)和结核分枝杆菌共感染是全球性公共卫生重大问题,结核分枝杆菌和HIV均是在细胞内复制的病原体,通过损伤细胞免疫而造成持续感染.随着免疫学的进展,人们逐渐了解HIV和结核分枝杆菌共感染的一些临床特点及免疫学机制.树突状细胞(DCs)通过高水平表达主要组织相容性复合物Ⅲ(MHCⅡ)类分子、协同分子及黏附分子,诱导免疫激活,促使T细胞增殖.HIV和结核分枝杆菌感染后树突状细胞功能受损,导致Th1/Th2及Treg/Th17(help T cell,辅助性T细胞;Regulatery T cell,调节性T细胞)平衡打破,进一步降低了细胞毒性T细胞(CTL)清除结核分枝杆菌和HIV的能力.随着HIV和结核分枝杆菌共感染免疫机制研究的不断深入,人们对HIV合并结核分枝杆菌感染的诊治水平将不断提高.
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小剂量链脲佐菌素致大鼠Beta细胞损伤模型探讨
目的 建立小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)致大鼠Beta细胞损伤模型,探讨Beta细胞损伤后胰岛的自身免疫性情况和Beta细胞自我修复能力.方法 SD大鼠腹腔注射40 mg/kg STZ,3d后测量随机血糖、空腹血糖和空腹C-肽,并进行胰腺组织HE染色、胰岛素和CD8α免疫组化染色.于第54天进行口服葡萄糖耐量实验,第56天检测随机血糖、空腹血糖、空腹C-肽和CD8α免疫组化染色.结果 给予40mg/kg剂量STZ处理后,第3天大鼠随机血糖[实验组(33.00± 2.31) mmol/L,空白对照组(5.72±0.63)mmol/L]明显增高,而空腹血糖[实验组(4.03±0.48) mmol/L,空白对照组(3.50±0.41) mmol/L]未见异常,C-肽水平[实验组(0.23±0.03) ng/ml,空白对照组(0.29±0.03) ng/ml]降低,胰岛素免疫组化显示Beta细胞受损,CD8 α免疫组化显示在胰岛的周边部存在阳性细胞表达.56 d时血糖趋势及CD8 α表达与3d时相同,但C-肽水平STZ组高于空白对照组,葡萄糖耐量受损.结论 小剂量STZ损伤大鼠Beta细胞后,Beta细胞分泌功能降低,CD8α阳性细胞持续聚集继续损伤Beta细胞,终可建立一种轻度损伤的1型糖尿病大鼠模型.
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利胆扶正颗粒对梗阻性黄疸患者术后细胞免疫功能的调节
[目的]观察梗阻性黄疸患者术后利胆扶正颗粒治疗对细胞免疫功能的调节作用.[方法]48例梗阻性黄疸患者随机分为一般治疗组、美能组和中药组.分别于手术前、术后第1、7 d测定外周血辅助T细胞(CD4)、细胞毒性T细胞(CD8)含量.[结果]术后第1 d CD4、CD8均无明显差异P＞0.05,术后第7 d中药组明显高于一般治疗组P＜0.05.[结论]中药治疗组对梗阻性黄疸围手术期有重要的辅助作用,具有一定的免疫调节作用.
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重组人热休克蛋白70-抗原肽复合物对肿瘤的免疫治疗作用研究
目的:使用以毕赤酵母X-33为宿主菌,重组表达制备的rhHSP70与合成的HER2/neu抗原肤体外结合形成复合物,探讨其在肿瘤免疫治疗中的有效性.方法:在ADP存在的条件下,将rhHSP70与纯化的HER2/neu抗原肽体外非共价结合形成复合物,并分次免疫BALB/c小鼠,通过ELISPOT和颗粒酶释放法.检测该复合物诱导特异性CTL的能力.通过检测小鼠体内肿瘤的生长情况和肿瘤的组织切片,来观测该复合物对小鼠乳腺癌的免疫治疗作用.结果:rhHSfy70-HER2/neu抗原肽复合物免疫小鼠后,可以增加T细胞分泌IFN-γ的能力,诱导出肿瘤特异性CTL,并对小鼠的乳腺癌有明显的治疗作用.结论:在毕赤酵母中重组表达的rhHSP70可以在体外与一定的抗原肽非共价结合形成复合物,该复合物具有较强的诱导特异性CTL的能力,可对实验鼠的乳腺癌起到明显的治疗作用.
关键词： 重组人热休克蛋白70 细胞毒性T细胞 肿瘤 免疫治疗 -
CD4+与CD25+调节性T细胞对直肠癌过继免疫治疗效应细胞的影响
①目的 探讨CD4+与CD25+调节性T细胞(Treg)在直肠癌过继免疫治疗中对免疫杀伤细胞的负性调节作用.②方法 利用流式细胞仪分别检测15例直肠癌患者和健康志愿者外周血中CD4+与CD25+调节性T细胞的含量;同时观察各实验组CTL对肿瘤细胞的杀伤效应.③结果 直肠癌患者外周血中CD4+与CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞总数的(11.12±0.57)%,显著高于健康对照组的(8.77±0.66)%(t=2.687,P=0.012);去除Tmg细胞后诱导产生的抗原特异性CTL对靶细胞的杀伤效率为(33.74±4.42)%,显著高于未去除Treg细胞的对照组CTL的杀伤效率(17.39±2.54)%(t=3.206,P=0.0034).④结论 直肠癌患者外周血中调节性T细胞含量明显增高,并且时肿瘤抗原诱导的CTL的免疫杀伤功能具有明显抑制作用.
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宫颈癌患者前哨淋巴结免疫杀伤细胞的检测及意义
目的 探讨检测宫颈癌前哨淋巴结(SLN)和盆腔淋巴结中抗肿瘤免疫细胞功能的临床价值.方法 采用流式细胞技术测定宫颈癌引流区淋巴结中γδT细胞和细胞毒性T细胞(CTL)水平.结果 20例手术切除的SLN和盆腔淋巴结中,γδT细胞分别为14±11和9±10(P=0.103);CTL细胞分别为18±5和14±4(P=0.014).前哨淋巴结中CTL细胞数量显著高于盆腔淋巴结,γδT细胞在前哨淋巴结和盆腔淋巴结中数量差异无统计学意义.结论 宫颈癌引流淋巴结中CTL细胞为主要免疫杀伤细胞.
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树突状细胞激活的CTLs在裸鼠体内外诱导抗喉癌作用
目的 探讨树突状细胞(Dendritic cells,DCs)激活的细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)在裸鼠体内外能否诱导抗喉癌免疫.方法 用细胞因子从健康人外周血诱导DCs,MTY法检测DCs激活的CTLs在体外对喉癌细胞的作用.将裸鼠接种CTLs,lw后用喉癌细胞攻击,观察成瘤潜伏期、成瘤率、瘤重量及瘤体积.结果 用细胞因子能从健康人外周血诱导大量DCs,该DCs激活的CTLs在体外对喉癌细胞产生了高效而特异的抑制及杀伤作用(P＜0.01).在裸鼠体内,负载抗原的DCs激活的CTLs有免疫保护作用,其成瘤率减低(84%,P＜0.01),潜伏期延长(14±2d,P＜0.01),瘤重及瘤体积均显著降低(0.47±0.10g,12.64±3.98mm3,P＜0.01).结论 DCs激活的CTLs能在裸鼠体内外诱导高效的抗喉癌作用.
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人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应
目的:观察人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含前列腺特异性抗原片段的重组腺相关病毒后,其所诱导的特异性T细胞对前列腺癌细胞株LNCaP和DU145的体外杀伤抑制作用.方法:实验于2006-05/10在南方医院肿瘤科生物室完成.①对象:HLA-A2基因亚型的健康自愿供血者1名,对本实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.作为靶细胞的前列腺癌细胞株LNCaP、DU145以及携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒由美国阿肯色大学生物治疗中心刘勇教授惠赠.②实验方法:抽取HLA表型为A2的健康自愿供血者外周血50 mL,Ficoll法分离单核细胞体外培养,磷酸盐缓冲液洗涤6孔板,收集悬浮细胞作为效应T细胞,贴壁细胞即为树突状细胞.向6孔板内加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒,第4天加入白细胞介素4,第6天加入肿瘤坏死因子α,至培养第7天收获悬浮细胞即为成熟的树突状细胞.③实验评估:应用流式细胞仪检测树突状细胞表面分子标记的表达.以ELISA法检测树突状细胞分泌白细胞介素12的含量.将成熟树突状细胞与效应T细胞分别按1:10、1:20、1:40进行共培养,将未经过树突状细胞共育的T细胞设置为空白对照组,ELISA法检测效应T细胞分泌干扰素γ的含量.LNCaP、DU145靶细胞分别与效应T细胞按效靶比5:1、10:1、20:1、40:1进行共培养,MTT法检测效应T细胞对两种靶细胞的杀伤作用.结果:①树突状细胞表面分子标记的表达:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒致敏后的树突状细胞,培养8 d后高表达CD83,CD40,HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,分别为65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%,79.0%.②树突状细胞释放白细胞介素12含量检测:与培养第1天比较,第7天成熟树突状细胞释放白细胞介素12的含量显著升高(P＜0.05).③效应T细胞释放干扰素γ含量检测:与空白对照组比较,树突状细胞:T细胞按1:10、1:20、1:40共培养后所释放的干扰素γ含量均明显升高(P＜0.01,0.01,0.05),且随树突状细胞加入比例的提高有所增加.④效应T细胞的细胞毒性作用检测:效应T细胞可有效识别并杀伤HLA-A2阳性的LNCaP细胞,其抑制作用在效靶比为10:1、20:1、40:1时均显著强于DU145细胞株(P＜0.01).结论:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒转染后的树突状细胞,其细胞表型和刺激淋巴细胞增殖、分化的功能无明显改变,可诱导自体效应T细胞增殖,该效应T细胞对LNCaP细胞具有明显杀伤作用.
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结核分枝杆菌抗原Ag85A(Rv3840c)限制性CD8+CTL表位的预测及鉴定
目的 预测及鉴定新的HLA-A*0201结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85A中的CD8+CTL优势表位.方法 应用数据库SYFPEITHI预测可能存在的HLA-A*0201的限制性CD8+CTL表位,并经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力、经时间荧光分辨法检测结核(TB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应,再通过细胞毒实验研究抗原肽诱导的T细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位.结果 位于Ag85A氨基酸序列(48-56)的肽表位与HLA-A*0201分子具有较高的亲和力,并能刺激HLA-A*0201阳性结核患者PBMC增殖,诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL.结论 肽6(GLPVEYLQV,48-56 aa)是Mtb抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,这为今后进一步研究结核杆菌,作为设计结核疫苗的候选表位奠定了一些基础.
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QLFATINSTL(93-102aa)是隐球菌抗原MP98 CTL优势表位
目的 鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位.方法 应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位.结果 位于MP98氨基酸序列肽3(93-102aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL.结论 肽3 QLFATINSTL(93-102aa)是抗原MP98上HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位.
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树突状细胞分泌的exosomes体外诱导特异性CTL抗肾癌的初步研究
目的 提取树突状细胞外来体(DE)分泌的外来体(exosomes),检测其体外刺激同源T细胞活化和诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)抗肾癌769-P的免疫效应.方法 从健康志愿者外周血单个核细胞中诱导培养DE,流式细胞术检测DC的表型;通过超速离心法结合超滤法制备DC分泌的exosomes,透射电镜观察exosomes的形态,MTT法检测DC分泌的exosomes诱导T细胞的增殖和特异性CTL对769-P的体外杀伤活性.结果 超速离心法结合超滤法能从DC上清中分离exosomes,并且肿瘤抗原致敏DC分泌的exosomes能有效促进T细胞的增殖及特异性CTL抗769-P效应,T细胞增殖倍数达(1.68±0.22)%,CTL杀瘤活性为(38.23±2.16)%.结论 抗原致敏DC分泌的exosomes能有效诱导激活具有较强杀瘤活性的肿瘤特异性CTL.
