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氩氦冷冻胶质瘤细胞致敏树突状细胞诱导肿瘤杀伤效应的实验研究
目的 探讨氩氦冷冻胶质瘤细胞冻融产物对C57BL/6小鼠骨髓源树突状细胞(DCs)成熟的影响,以及致敏DCs诱导肿瘤杀伤效应的作用机制. 方法 采用氩氦冷冻法冻融GL261胶质瘤细胞为实验组,只插入探针不冷冻为阴性对照组,冻融等量PBS为空白对照组,采用BCA法测定冻融产物蛋白浓度;体外诱导小鼠骨髓细胞为DCs,加入各组冻融产物后观察其形态学变化.流式细胞仪检测DCs表面CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达.ELISA检测其上清液中IL-12p70的含量;提取小鼠脾脏T细胞,与各组抗原致敏的DCs共培养后活化,流式细胞仪检测活化T细胞CD3、CD4、CD8的表达;以GL261细胞为靶细胞,以活化的T细胞即细胞毒性T细胞(CTLs)作为效应细胞,效靶比分别为10:1、50:1和100:1时CCK-8法检测CTLs对GL261的杀伤率. 结果 实验组冻融产物即肿瘤抗原浓度[(1071 ±240.94)μg/mL]高于阴性对照组[(91.42±55.75)μg/mL]及空白对照组(0μg/mL),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组DCs有典型成熟DCs形态,表型CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达率及IL-12p70分泌量高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组CD8+T细胞表达率高,CD4+T细胞表达率低,与阴性对照组及空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);不同效靶比时实验组CTLs对GL261细胞的杀伤率显著高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 氩氦冷冻胶质瘤细胞可获取大量肿瘤抗原并促进DCs成熟,冻融产物致敏DCs后可有效负载肿瘤抗原产生抗肿瘤效应,其机制与DCs表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达上调并诱导T细胞转化为CTLs有关.
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WT1多肽特异性T细胞受体基因转导正常T细胞的抗肺癌效应
目的 通过基因转导技术获得WT1多肽特异性TCR基因转导的正常外周CD8+T细胞,检测其对肺癌细胞的杀伤活性,探讨TCR基因转导用于过继性细胞治疗肺癌的可行性及安全性.方法 通过克隆HLA-A*2402限制性WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)之TCR基因,经构建逆转录病毒载体后转导WT1-TCR基因至正常外周CD8+T细胞;所获得的CD8+T细胞对靶细胞的杀伤效应经标准51Cr释放试验测定.结果 WT1-TCR基因转导后的正常外周CD8+T细胞显示出对WT1多肽负载的HLA-A*2402+LCL细胞的特异性杀伤作用,同时TCR基因改造后的CD8+T细胞可特异性杀伤HLA-A*2402及WT1表达阳性的肺癌细胞株而不对HLA-A*2402表达阳性的正常细胞产生杀伤作用.结论 这些数据论证了WT1-TCR基因转导正常外周T细胞具有与亲代CTL一致的特异性杀伤特性,提示该方法用于过继性细胞免疫疗法治疗肺癌具有可行性.
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两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用
目的 比较两种抗原负载方式对树突状细胞(DCs)疫苗的影响.方法 抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LoVo细胞,提取肿瘤细胞裂解物或者使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LoVo细胞的杀伤作用.结果 两种方式均可培养的成熟DCs,诱导的CTL细胞分泌IFN-γ有所增加;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LoVo细胞,腺相关病毒提呈抗原制备的DCs疫苗对LoVo细胞的杀伤作用明显高于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.结论 两种抗原提呈方式均可培养出成熟的DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,并可诱导自体CTL增殖.使用腺相关病毒转染DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.
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哮喘患儿的外周血淋巴细胞CD40/CD40L的表达及其与Tc1和Tc2的关系
[目的]研究发作期哮喘患儿的外周血CD40、CD40L的表达率及其与Tc1和Tc2的关系.[方法]应用流式细胞术检测30例哮喘患儿和20例正常对照儿童的外周血淋巴细胞CD40、CD40L的表达率和Tc1、Tc2的细胞数.[结果]哮喘患儿和正常对照组的外周血淋巴细胞CD40表达率分别为21.59±7.61和15.82±4.44(t=3.376,P＜0.001);CD40L表达率分别为0.20±0.11和0.33±0.12(t=-2.747,P＜0.05);Tc1细胞数分别为9.06±3.80和7.28±3.01(t=0.582,P＞0.05);Tc2细胞数分别为7.64±3.67和3.02±1.38(t=3.981,P＜0.001).CD40和CD40L表达率与Tc1、Tc2数量无显著的相关性(r分别为-0.004和0.231、-0.280和0.186,P＞0.05).[结论]发作期哮喘患儿存在明显的CD40/CD40L、Tc1/Tc2的异常,这可能与哮喘的发生有重要的关联.
关键词： 哮喘 白细胞分化抗原40/40配体 细胞毒性T细胞 淋巴细胞 儿童 -
树突状细胞介导的肝癌免疫治疗实验研究
目的探讨以树突状细胞(DC)为介导的原发性肝癌免疫治疗新方法.方法采用肝癌细胞制备肿瘤细胞性抗原冲击致敏体外培养的DC,体外混合淋巴细胞反应检测抗原致敏DC刺激同基因T淋巴细胞增殖的能力,观察负载肿瘤抗原的DC体内外诱导产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其抗肿瘤能力.结果经肝癌细胞抗原致敏的DC能诱导较强的自体T细胞增殖,且能诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC和未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对非同种肿瘤细胞无明显的杀伤作用,经BEL7402肿瘤细胞抗原致敏的DC经皮下免疫小鼠可诱导有效的免疫保护作用,可抵抗野生型BEL7402细胞的再攻击,肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,生长减慢.结论 DC具有强大的刺激T淋巴细胞增殖和诱导产生特异性CTL的能力,在体内外均能激发特异性抗肿瘤免疫应答.
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凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响
目的 探讨凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响.方法 取对数生长期大肠癌CT26细胞制备凋亡、坏死肿瘤细胞.取Balb/c小鼠20只,分离T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞、获取巨噬细胞,并制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL).将小鼠CTL、NK细胞、巨噬细胞分别经相应肿瘤细胞处理后,均分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组,应用51 Cr释放实验测定各组CTL、NK细胞、巨噬细胞的活性,细胞计数(CCK-8)法检测各组CTL、NK细胞和巨噬细胞的增殖情况.另选取Balb/c小鼠分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组各10只,分别将凋亡、坏死、对数生长期CT26细胞按通过皮下及静脉输注小鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清可溶性Fas(sFas)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)4、IL-10、IL-12、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平.结果 与坏死肿瘤细胞组及肿瘤细胞对照组比较,凋亡肿瘤细胞组中不同效靶比的CTL、NK细胞及巨噬细胞活性均降低(P＜0.05).CCK-8法检测结果显示,凋亡肿瘤细胞组的CTL、NK细胞及巨噬细胞的A450值均低于坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组(P＜0.05).ELISA检测显示凋亡肿瘤细胞组sFas相对表达量低于坏死肿瘤细胞组和肿瘤细胞对照组(P＜0.05).凋亡肿瘤细胞组IL-4表达水平高于肿瘤细胞对照组(P＜0.05),IL-10、TGF-β表达水平则高于其他两组(P＜0.05),IL-12表达水平低于其他两组(P＜0.05).结论 凋亡大肠癌CT26细胞能够抑制小鼠特异性CTL、NK细胞、巨噬细胞增殖及其活性,影响大肠癌小鼠正常免疫功能.
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HLA-B27阳性强直性脊柱炎患者外周血Th与Tc细胞亚群分析
目的 探讨强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)患者外周血辅助性T细胞(T helper lymphocyte,Th)与细胞毒性T细胞(T cytotoxic lymphocyte,Tc)亚群水平及临床意义.方法 采用流式细胞术分析39例AS患者和26例健康者外周血Th17、Th1、Th2以及Tc1和Tc2比率,同时检测人类白细胞抗原B27 (Human leucocyte antigen B27,HLA-B27).结果 HLA-B27阳性AS组患者外周血Th17细胞比率[(1.93±0.70)％]显著高于健康对照组[(1.21±0.39)％](P＜0.01).Th细胞比率[(32.97±4.70)％]明显低于健康对照组[(36.64±4.08)％](P＜0.01),Tc细胞比率[(34.05±5.21)％]显著高于对照组[(30.64±6.54)％](P＜0.05),Tc2和Tc1细胞比率[(0.31±0.25)％、(33.74±5.16)％]均显著高于对照组[(0.20±0.11)％、(30.44±6.53)％] (P＜0.05),Th1细胞比率[(32.48±4.69)％]显著低于对照组[(36.30±4.13)％](P＜0.01).结论 HLA-B27阳性AS患者Th17细胞比率增高,T细胞亚群极化失衡,呈明显的Th2/Tc2优势,可能与AS的疾病进程相关.
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抗原特异性细胞毒性T细胞在病毒感染性疾病中的作用
抗原特异性细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)是特异性细胞免疫应答的主要效应细胞,在机体控制病毒感染及清除病毒过程中起主导作用,其水平和功能与病毒的转归及抗病毒疗效密切相关.近年来抗原特异性CTL在病毒感染性疾病中的作用已成为研究的热点.
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慢性乙型肝炎患者淋巴细胞及临床特征与病毒基因型的关系
对98例慢性乙型肝炎(CHB)患者作了HBV基因型的检测,对C基因型和B基因型感染者之间进行HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),非特异性CTL等细胞免疫功能、HBV DNA水平、HBeAg阳性率和肝功能损害情况对比研究,探讨CHB患者不同HBV基因型与HBV特异性CTL、HBV复制和肝功能损害的关系,现报道如下.
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丙型肝炎病毒核心区多肽对细胞毒T细胞的作用
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染者体内细胞毒T细胞(CTL)功能缺陷的原因.方法将HCV核心区多肽皮下注射免疫BALB/c小鼠,用乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾细胞CTL活性.选择上述多肽中对CTL有抑制作用和增强作用的多肽各2条,交叉组合后共同免疫BALB/c小鼠检测其CTL活性.结果经单因素方差分析显示,HCV核心区多肽CPA9(39～74位氨基酸)、CPB7(67～76位氨基酸)、CPB8(71～80位氨基酸)对小鼠CTL有抑制作用,CPA10(5～23位氨基酸)、CPB6(63～72位氨基酸)、CPB2(131～140位氨基酸)对小鼠CTL有增强作用.CPB2+CPB8、CPB6+CPB8组中效靶比10:1,20:1的CTL活性显著高于对照组,CPB2+CPB7、CPB6+CPB7组与对照组无明显差异,双因素方差分析显示HCV核心区抑制性多肽和增强性多肽有交互作用.结论HCV核心区多肽CPA9、CPB7、CPB8对小鼠CTL有抑制作用,CPA10、CPB6、CPB2对小鼠CTL有增强作用;HCV核心区抑制性和增强性多肽有交互作用.
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噬菌体呈现颗粒疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T细胞反应
目的构建呈现肿瘤相关抗原P815A的噬菌体颗粒,在体诱导针对肥大细胞瘤P815的特异性细胞毒性T细胞(CTL)反应.方法构建呈现CTL表位P1A35～43的噬菌粒载体,大量制备呈现此表位的重组噬菌体颗粒,小剂量、无佐剂皮下免疫DBA/2小鼠(H-2d),采用51Cr释放法、ELISPOT观察针对肥大细胞瘤P815的CTL反应.结果重组噬菌体呈现颗粒疫苗在体诱导了针对弱抗原P815A的CTL反应.结论丝状噬菌体呈现疫苗增强肿瘤相关抗原的免疫原性,是一种颇有潜力的抗肿瘤疫苗形式.
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噬菌体呈现疫苗诱导乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T细胞反应
目的研究噬菌体呈现颗粒作为亚单位疫苗是否能在体诱导乙型肝炎特异性细胞毒性T细胞反应.方法构建呈现MHC I类分子(H-2d)限制性表位HBs28～39的噬菌体颗粒,小剂量、无佐剂接种BALB/c(H-2d)小鼠.结果重组噬菌体呈现颗粒在体诱导H-2d限制的HBs28～39特异性细胞毒性T细胞反应.结论丝状噬菌体呈现疫苗有效诱导细胞毒性T细胞反应,能用于发展抗病毒疫苗.
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HCV核心区增强和抑制性多肽对小鼠CTL相互作用研究
目的建立细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell,CTL)检测体系,探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者体内CTL功能缺陷的原因.方法选择HCV核心区多肽中对CTL有抑制作用和增强作用的多肽各2条,交叉组合后共同皮下注射免疫BALB/c小鼠,用乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾细胞CTL活性.结果用DH检测HCV核心区多肽免疫BALB/c小鼠的CTL活性,CTL活性可被CPA10(5～23位氨基酸)增强及被CPA9(39～74位氨基酸)抑制.CPB2+CPB8、CPB6+CPB8组中效靶比10:1,20:1的CTL活性显著高于对照组,CPB2+CPB7、CPB6+CPB7组与对照组无明显差异,双因素方差分析显示HCV核心区抑制性多肽和增强性多肽有交互作用.结论 DH可稳定检测BALB/c小鼠的CTL活性,HCV核心区抑制性和增强性多肽有相互作用.
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LDH检测BALB/c小鼠CTL活性的初步研究
目的建立一个简便易行的动物模型及细胞毒性T细胞(CTL)检测体系,为HCV感染中CTL作用研究奠定理论基础.方法用SP2/O作为靶细胞,LDH检测HCV核心区多肽免疫BALB/c小鼠的CTL活性.结果 HCV核心区多肽免疫BALB/c小鼠后,可用LDH检测其CTL活性,CTL活性可被CPA10(5～23位氨基酸)增强及被CPA9(39～74位氨基酸)抑制.结论 LDH可稳定检测BALB/c小鼠的CTL活性.
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特异性细胞毒性T细胞活化的研究进展
特异性细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)的活化是现代细胞免疫的重要研究领域,是具有高度时空复杂性的生物学行为,是众多免疫细胞、免疫分子协同作用的结果.
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CTL的免疫识别
免疫识别是机体免疫系统产生特异性免疫的基础,通过对抗原的特异性识别,激发机体产生免疫应答,终由效应细胞和/或效应分子(Ab)清除病原体或"异己"物质.对特异性抗原的大量研究,并由此研制的疫苗在预防、控制多种传染性疾病方面起到重要作用.近年来,细胞毒性T细胞(CTL)引起人们的重视,发现人类面临的多种难以攻克的疾病,如肿瘤、AIDs、乙型肝炎等,CTL扮演着关键角色.现就CTL免疫识别方面的问题作一综述.
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治疗用HBV模拟抗原的设计及其诱导慢性乙型肝炎患者外周血CTL活性研究
目的引入四聚体技术比较基于不同表位组合的模拟抗原分子的免疫原性,研究其结构与诱导免疫应答之间的关系.方法以乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18～27表位为基础,分别引入了TH、TH+B细胞表位,合成了3种模拟抗原,并以这3种模拟抗原在体外刺激慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞为模型,通过HLA-A2*0201 tetramer定量检测抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL).结果 3种模拟抗原分子能有效地诱导慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生抗原特异性CTL反应;TH和B细胞表位的引入可增强该效应.结论我们所建立的四聚体技术可定量检测表位特异性CTL;模拟抗原的设计中引入TH、B细胞表位可增强其免疫原性.
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慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL、非特异性CTL的变化和意义
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者的外周血HBV特异性CTL、非特异性CTL的变化和意义.方法 对80例人白细胞抗原(HLA)-A2阳性的CHB患者用流式细胞仪检测外周血HBV特异性CTL、非特异性CTL和T细胞亚群,对20例HLA-A2阳性的急性乙型肝炎(AHB)患者作HBV特异性CTL、非特异性CTL的检测,30例健康献血员作非特异性CTL和T细胞亚群的检测作为对照.结果 80例CHB患者的HBV特异性CTL低于急性乙型肝炎患者,分别为(0.32±0.11)%和(1.1±0.31)%,t=7.704,P=0.000,非特异性CTL高于正常对照组.分别为(18.23±5.13)%和(15.83±4.99%),t=2.220,P=O.028.结论 CHB患者的HBV特异性CTL较低,一方面是导致HBV慢性持续感染的主要原因,另一方面启动了非特异性CTL引起肝功能损害.
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DNA疫苗激活CTL反应机制及增强DNA疫苗效力的研究进展
DNA疫苗相对于以前的疫苗免疫策略有着强大的优势,但仍有许多问题待解决,尤其是采用哪些有效的方法来增强DNA免疫的效果,是目前研究关注的热点.本文就近年来DNA疫苗研究中所采用的增强免疫效力的策略作了综述,并就DNA免疫激活CTL反应的有关机制进行讨论.
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基因修饰树突状细胞诱导抗血液肿瘤效应的研究进展
白血病/淋巴瘤等血液肿瘤经联合化疗,可以获得完全缓解,但难彻底消灭肿瘤微小残留病(MRD).基因修饰的树突状细胞瘤苗以其增强肿瘤细胞的免疫原性,启动机体的特异性抗肿瘤免疫应答,成为清除MRD的一种有希望的途径.本文就树突状细胞的生物学特性及其诱导培养,基因转移载体的选择,以及不同来源基因修饰DC诱导抗血液肿瘤的特点等方面的研究进展进行综述.
