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三氯乙烯致敏小鼠Tc1/Tc2细胞失衡研究
目的检测小鼠经三氯乙烯( TCE )致敏后Tc1、Tc2细胞的变化,探讨Tc1/Tc2细胞失衡在三氯乙烯药疹样皮炎( DMLT)中的可能作用。方法 BALB/c雌性小鼠随机分为空白对照、溶剂对照和TCE处理组,在末次激发后24、48、72 h和7d根据皮肤肿胀程度和病理表现分为致敏组和未致敏组。无菌取出脾脏,用流式细胞术检测Tc1、Tc2细胞数量,实时荧光定量PCR检测T-bet、GATA-3 mRNA转录水平。结果与未致敏组相比,致敏组Tc1细胞数量在24、48、72 h和7 d显著上升(P<0.01),72 h水平高；致敏组Tc2细胞数量在24、48、72 h显著上升(P<0.01),72 h水平达到峰值,7 d较未致敏组差异无统计学意义( P >0.05)；致敏组Tc1/ Tc2比例于48、72 h 和7 d 较未致敏组显著上升(P <0.01)。致敏组T-bet、GATA-3 mRNA 转录水平在48、72 h 和7 d 较相应时点未致敏组显著上升(P <0.05,P <0.01),72 h 达到峰值。结论Tc1/ Tc2细胞失衡可能参与了TCE 致敏小鼠的免疫损伤过程并发挥重要的作用。
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大鼠脊髓损伤前后外周血CD3+ CD8+ CD28-和CD3+ CD8+ CD28+细胞亚群的变化
目的：：探讨SD大鼠脊髓损伤( spinal cord injury,SCI)前后外周血抑制性T细胞( suppress T lymphocytes,Ts)和细胞毒性T细胞( cytotoxic T lymphocytes,Tc)亚群的变化规律。方法：取10只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学脊髓损伤撞击仪制作重物坠落SCI模型。于SCI前及后1、3、5、7、14、21、28和56 d收集外周血,流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD3+CD8+CD28-Ts 和CD3+CD8+CD28+Tc亚群的变化规律。结果：SCI前,正常大鼠外周血中Ts和Tc亚群占CD3+总T细胞的百分比分别为(30.27±12.09)%和(14.75±4.29)%。损伤后1 d,Ts的比例为(22.58±12.12)%。术后5 d时其百分比下降至低,为(20.86±10.41)%。术后7~21 d,其比例恢复至术前水平,28 d时显著升高,其比例为(37.90±12.98)%。56 d时其比例为(33.79±11.44)%,恢复至损伤前水平(P>0.05)。 Tc和Ts亚群的变化趋势相反,在损伤后1、5、21和28 d时其比例分别为(17.29±7.10)%、(20.02±6.24)%、(23.89±6.78)%和(13.81±11.21)%。但56 d时其比例没有恢复至术前水平,而是进一步下降至(8.71±6.44)%(P<0.01)。结论：在SCI后的早期阶段,SD大鼠外周血Tc占明显优势,提示Ts功能抑制、Tc功能增强是SCI免疫损伤机制之一。 SCI后5~21 d是进行免疫调节治疗的关键时间窗。
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脐血及外周血中细胞毒性T细胞的体外诱导及杀瘤活性研究
目的在体外研究卵巢癌细胞诱导脐血来源的CTL的扩增及其杀瘤活性.探索其用于卵巢癌过继免疫治疗的可行性.方法从脐血中分离出单个核细胞,用不同剂量的SKOV3细胞及IL-2刺激扩增;用FCM检测表型变化,MTT比色法检测其对SKOV3及K562的杀伤活性,并与用同样方法所得外周血来源CTL细胞相对照.结果用2×106个/ml的卵巢癌细胞可诱导脐血CTL细胞较高的杀伤活性为53.46%±8.45%;诱导10天后杀伤SKOV3活性为44.09%±6.95%,杀伤K562的活性为41.03%±5.79%,CD3、CD4、CD8及CD4/CD8值分别为52.00±9.50、36.00±4.80、38.00±10.20、1.10±0.40.结论应用适当剂量的抗原可诱导较高活性的脐血源CTL,对卵巢癌细胞株有较高的杀伤活性.
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间变性大细胞淋巴瘤的免疫逃逸机制
间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、系统型是一种CD30+的T细胞淋巴瘤,它有一系列的形态学特点、免疫表型和临床特征.临床病理有两种类型:一种是间变性淋巴瘤激酶(ALK、一种新的酪氨酸激酶)阳性的系统型ALCL,另一种是ALK阴性的系统型ALCL.ALK的表达往往是病人染色体易位,即t(2;5)的结果,而且与患者年轻、预后好有关[1,2].
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结核杆菌抗原Ag85A HLA-A*0201限制性CD8+ CTL表位的预测和鉴定
目的 预测结核杆菌(Mtb)抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)表位,并对其进行鉴定.方法 应用数据库SYFPEITHI预测可能存在的HLA-A*0201的限制性CD8+CTL表位,并经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间荧光分辨法检测结核(TB)患者外周血单个核细胞(PB-MC)对抗原肽的增殖反应,再通过细胞毒实验研究抗原肽诱导的T细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位.结果 位于Ag85A氨基酸序列7(48-56aa)和5(242-250aa)的表位与HLA-A*0201分子具有较高的亲和力,并能刺激HLA-A*0201阳性结核患者PBMC增殖,诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL.结论 肽7 GLPVEYLQV(48-56aa)和肽5 KLIANNTRV(242-250aa)是Mtb抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位.
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DC活化的特异性CTL对裸鼠胃癌移植瘤的杀伤效应
用人胃癌细胞抗原致敏成熟树突状细胞(DC).将DC活化的特异性细胞毒性T细胞(CTL)注射到胃癌裸鼠体内.用流式细胞术(FCM)检测移植瘤细胞G0/G1、S、G2/M期细胞凋亡情况.结果DC活化的特异性CTL作用于裸鼠皮下移植瘤,可显著抑制其生长,瘤细胞出现不同程度的坏死、变性.特异性CTL作用后,裸鼠皮下移植瘤细胞的增殖指数(PI)为(24.39±2.46)%,显著低于非抗原特异CTL作用后组的(31.24±3.85)%和对照组的(32.78±4.17)%;凋亡细胞比率为(15.83±2.77)%,显著高于非抗原特异CTL组的(7.28±2.26)%和对照组的(9.15±1.33)%,P均＜0.05.认为胃癌细胞抗原致敏DCs活化的CTL在体内可特异性的抑制裸鼠移植瘤细胞生长、增殖,促进瘤细胞凋亡,有效预防裸鼠移植瘤的发生.
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肾癌组织中卷曲螺旋结构域蛋白62的HLA-A2表位肽的筛选和鉴定
目的 筛选和鉴定肾癌组织中癌睾抗原卷曲螺旋结构域蛋白62(CCDC62)的人类白细胞抗原(HLA)-A2的特异性细胞毒性T细胞(CTL)的表位肽,为肾癌的免疫治疗提供实验基础.方法 通过NetCTL1.2软件预测CCDC62的HLA-A2限制性表位,对得分>1.0的表位肽进行合成.结合力实验检测候选表位肽与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合强弱,细胞内因子染色检测候选表位肽诱导CTL分泌干扰素-γ(IFN-γ)的能力.比较实验组的表位肽与对照组的差异来判断表位肽的活性.结果 表位肽CCDC62-P137和CCDC62-P141有较好的HLA-A2结合力.细胞内因子染色表明表位肽CCDC62-P137相比于对照组能诱导肾癌的CTL分泌更多的IFN-γ.结论 表位肽CCDC62-P137有较高的HLA-A2分子亲和力和诱导产生更多IFN-γ的能力,是CCDC62在肾癌组织中的HLA-A2限制性CTL候选表位肽,为肾癌的抗肿瘤多肽治疗提供实验基础.
关键词： 肾癌 细胞毒性T细胞 表位肽 人类白细胞抗原 卷曲螺旋结构域蛋白62 -
致敏树突状细胞抗乳腺癌作用的实验研究
目的 探讨负载肿瘤抗原DC诱导的CTLs对乳腺癌细胞的杀伤作用.方法 以负载肿瘤细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平,用LDH法检测CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用.结果 负载肿瘤抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P＜0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单个核细胞组(P＜0.01)及对照的HT-29组(P＜0.01).结论 采用乳腺癌细胞冻融抗原体外致敏DC,诱导产生肿瘤抗原特异性CTLs具有显著的抑瘤效应,实验证明致敏DC治疗乳腺癌是一种有效的方法 ,有望成为乳腺癌免疫治疗的新疗法.
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中药灵芝多糖调控细胞毒性T细胞抗肿瘤机制研究
目的 通过研究中药灵芝多糖对S180荷瘤小鼠细胞毒性T细胞活性的影响,探讨中药灵芝多糖抗肿瘤机制.方法 小鼠胃饲灵芝多糖,流式细胞术检测荷瘤小鼠T细胞亚群变化,3H-TdR掺入法检测荷瘤小鼠CTL细胞毒活性.结果 胃饲灵芝多糖使荷瘤小鼠的CD8+T淋巴细胞数量、CTL细胞毒活性均明显提高(P＜0.01).结论 中药灵芝多糖可增强荷瘤小鼠细胞毒性T细胞免疫活性,从而达到抗肿瘤效果.
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HIV-1附属蛋白特异性细胞毒性T细胞应答研究
人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV)附属蛋白Nef、Vpu、Vpr和Vif 在病毒复制中起着关键作用,并能被细胞毒性T细胞(Cytotoxic T Lymphocyte, CTL)识别.然而,对我国HIV感染者体内附属蛋白特异性的CTL应答研究比较少.本研究应用覆盖HIV-1B、C亚型附属蛋白(Nef、Vpu、Vpr和Vif)的142个肽段作为抗原,通过酶联免疫斑点实验(Enzyme-Linked Immunospot,ELISPOT)检测61例中国HIV/AIDS患者和10例HIV-1血清阴性对照的HIV-1附属蛋白特异性CTL应答.无论对HIV-1B 亚型还是HIV-1C亚型附属蛋白都能产生特异性CTL 应答,特别是Nef区蛋白的反应频率和累积应答强度都较高(P＜0.001),B、C亚型间的应答频率和累积应答强度都无显著差别(P＞0.05),其免疫优势区也大致相同.附属蛋白特异性的累积CTL应答强度将近达到总应答的21%.这些结果表明尽管HIV-1附属蛋白的体积小,但它们在诱导特异性的CTL应答中发挥了重要作用,对评价HIV-1免疫应答的幅度和特异性以及研发针对中国人群的HIV疫苗有重要的意义.
关键词： 人类免疫缺陷病毒1型 细胞毒性T细胞 酶联免疫斑点实验 -
HBV转基因小鼠CD8+记忆性T细胞免疫变化特点
目的:观察HBV转基因小鼠脾脏CD8+记忆性T细胞分化情况及树突状细胞疫苗免疫对其形成的影响.方法:HBV转基因小鼠,使用负载HBsAg的树突状细胞(DC)免疫1周,分离CD8+T细胞,检测HBV特异性CD8+T细胞杀伤活性,流式细胞仪技术检测免疫前后脾脏CD8+记忆性T细胞亚群(TN,TEM,TCM)比例变化.结果:脾脏HBV特异性细胞毒性T细胞杀伤活性及IFN-γ分泌水平,HBV转基因模型小鼠低,免疫组小鼠低于健康组小鼠(P＜0.01);脾脏CD8+TCM比例,免疫组小鼠明显高于模型组小鼠(P＜0.01),但低于健康小鼠(P＜0.05);脾脏CD8+TEM比例,模型组小鼠高,免疫后小鼠与健康小鼠组间差异无显著性意义;脾脏CD8+ TN比例,模型组小鼠低,但3组小鼠间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:HBV转基因小鼠CD8+记忆T细胞存在分化障碍,与人类HBV慢性感染时相比,有其自身特点;疫苗接种后,可以改善CD8+记忆T细胞分化情况,并增强抗HBV免疫应答.
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补肾解毒方联合程序性死亡受体配体-1抗体对HBV转基因小鼠T细胞免疫应答影响的研究
目的:观察补肾解毒方联合程序性死亡受体配体-1 (PD-L1)抗体免疫,对HBV转基因小鼠特异性细胞毒性T细胞(CTL)细胞免疫应答的影响.方法:HBV转基因小鼠,使用补肾解毒方灌胃,PD-L1腹腔注射,共两周.检测小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ分泌水平、脾脏CD8+T细胞程序性死亡受体-1(PD-1)表达情况及脾脏HBsAg特异性T淋巴细胞体外杀伤活性.结果:免疫两周后,小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ分泌水平与脾脏HBsAg特异性T淋巴细胞体外杀伤活性,联合组明显高于PD-L1抗体组、补肾解毒方组及磷酸盐缓冲液(PBS)组,统计学分析差异均有显著性意义(P＜0.01或0.05).脾脏CD8+T细胞PD-1表达水平,联合组较PD-L1抗体组、补肾解毒方组及PBS组明显降低,差异均有显著性意义(P＜0.01或0.05).结论:补肾解毒方联合PD-L1抗体免疫,可显著提高HBV转基因小鼠体内HBV抗原特异性CTL活性,提高脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ水平,能降低脾脏CD8+T细胞表面PD-1分子的表达.这种联合方法有利于恢复慢性HBV感染时T细胞的免疫功能,增强其免疫应答水平.
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树突状细胞诱导的细胞毒性T细胞对黑色素瘤的抑制作用
目的 探讨CD4+ CD25+ Treg细胞对树突状细胞(DC)诱导的细胞毒性T细胞(CTL)对B16黑色素瘤抑瘤作用的影响及其机制.方法 制备C57BL/6小鼠B16黑色素瘤动物模型,行全身放疗达非髓性淋巴细胞删除(NMLD)状态.随机将80只小鼠分为4组.A组:在DC与T细胞共同培养前应用免疫磁珠法(MACS)删除CD4+ CD25+ Treg细胞;B组:DC与T细胞共同培养后删除CD4+ CD25+ Treg细胞;C组:DC与T细胞共同培养时不删除CD4+ CD25+ Treg细胞.D组:对照组.体外应用DC诱导T细胞产生效应细胞CTL,将CTL经鼠尾静脉回输小鼠体内,观察对黑色素瘤的抑瘤效果.结果 A、B、C3组对B16黑色素瘤抑瘤率分别为90.89％、92.52％、60.02％,均明显高于对照组(P＜0.05).删除CD4+ CD25+ Treg细胞的A、B两组抑瘤率优于C组(P＜0.05).但A、B两组间抑瘤率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 删除CD4+ CD25+ Treg细胞可明显提高CTL对B16黑色素瘤的抑瘤效果.
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负载k-ras抗原的树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肺癌细胞的体内杀伤作用
目的 观察k-ras突变多肽致敏的树突状细胞(DC)诱导活化的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肺癌细胞的体内杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)1000 mg/L和白细胞介素4(IL-4) 500 mg/L诱导外周血DC,分别使用表达k-ras突变体的肺癌细胞抗原、单纯k-ras突变体抗原表位肽和k-ras突变体抗原表位肽阳离子纳米颗粒致敏DC,进而通过诱导刺激T淋巴细胞得到特异性的CTL.分别使用肺癌A549、NCH-446细胞株建立荷瘤裸鼠模型,以评价CTL体内抗肿瘤活性.结果 负载全瘤抗原的DC诱导产生的CTL对表达k-ras阳性(A549)的肺癌细胞具有较好的抑制作用,而对k-ras表达阴性(NCH-446)的肺癌细胞抑制作用与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 负载肿瘤抗原的DC诱导CTL能够显著抑制肿瘤的生长速度,进而提高荷瘤裸鼠的生存时间,表明其可增加特异性抗肿瘤作用.
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大鼠肝癌组织中巨噬细胞与细胞毒性T细胞关系
目的 观察大鼠肝癌组织中巨噬细胞对细胞毒性T细胞浸润和凋亡的影响.方法 构建Wistar大鼠Walker-256肝癌模型,将大鼠分为3组:A组(腹腔注射氯磷酸盐脂质体)、B组(腹腔注射PBS脂质体)、C组(腹腔注射生理盐水).12 d后摘取肿瘤组织,测量肿瘤大小、免疫组织化学检测肿瘤组织中浸润的CD68、CD163、CD8及GranzymeB阳性细胞个数；CD8与TUNEL双标方法检测肿瘤组织中T细胞的凋亡.结果 (1)A、B、C3组肿瘤体积比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)A、B、C3组中,CD68阳性细胞个数在A、B组之间比较；CD163阳性细胞个数在A、B组之间比较；CD8阳性细胞个数在A、B组,A、C组之间比较；Granzyme阳性细胞个数在A、C组之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).其余各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).其中,CD68、CD163阳性细胞个数在A组明显少于B、C组；而CD8、GranzymeB阳性细胞个数在A组明显多于B、C组.(3)相关分析显示,针对全部肿瘤组织,CD68与CD8阳性细胞之间,CD163与GranzymeB阳性细胞之间呈负相关,差异有统计学意义(P＜0.05).CD68与GranzymeB阳性细胞之间,CD8与CD163阳性细胞之间无明显相关.(4)A、B、C3组中T细胞(CD8)凋亡率在A、C组之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；其余各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).A组T细胞凋亡率明显低于B、C组.结论 氯磷酸盐脂质体可有效清除大鼠肝癌组织中巨噬细胞.巨噬细胞清除后,细胞毒性T细胞的浸润增多、凋亡减少.肿瘤巨噬细胞通过促进细胞毒性T细胞凋亡而抑制其对肿瘤细胞的杀伤活性,在肿瘤发展中起重要作用.
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DC活化淋巴细胞对自体乳腺癌细胞的杀伤作用
目的 探讨负载自体抗原DC诱导的CTLs对自体乳腺癌细胞的杀伤作用.方法 以负载自体癌细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平.用LDH法检测CTL对自体癌细胞的杀伤作用.结果 负载自体抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P<0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单核细胞组(P<0.01)及对照的MCF-7组和HT-29组(P<0.01).结论 肿瘤裂解物致敏DC可持续刺激特异性CTLs从而可在体外杀伤乳腺癌患者的自体肿瘤细胞,说明肿瘤抗原致敏的DC疫苗对于治疗残留的和(或)对化疗耐药乳腺癌可能是适合的,因而有可能成为标准的补救措施.
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淋巴细胞在慢性鼻-鼻窦炎组织中的表达及意义
目的:探讨B淋巴细胞(CD20)和T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)在慢性鼻-鼻窦炎(CRS)中的表达及在炎症反应中的作用.方法:采用免疫组织化学技术检测B淋巴细胞(CD20)和辅助性T细胞(CD4)、细胞毒性T细胞(CD8)在实验组[分为15例CRS不伴鼻息肉(CRSsNP)组、12例CRS伴鼻息肉(CRSwNP)组、7例复发性CRSwNP组]和对照组(13例下鼻甲黏膜对照)中的表达.采用Mann-Whitney U检验分析实验组和对照组中B淋巴细胞、T淋巴细胞亚群的表达情况,实验组组间淋巴细胞浸润比较用单因素方差分析One-Way ANOVA.结果:与对照组相比,实验组有明显的B淋巴细胞(CD20)和T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)浸润(P＜0.05);T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)在CRSwNP组和复发性CRSwNP组病变中的表达明显高于CRSsNP组(P＜0.05);CD4在复发性CRSwNP组中的表达明显高于CRSwNP和CRSsNP组(P＜0.01).结论:实验组鼻腔黏膜中B淋巴细胞、辅助性T细胞和细胞毒性T细胞高表达,均参与炎症的形成,其炎症反应与T淋巴细胞浸润密切相关.
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多囊卵巢综合征和正常排卵不孕女性卵泡液中T细胞亚群比例的变化
目的 研究多囊卵巢综合征(PCOS)和正常排卵的不孕女性卵泡液中T细胞及其亚群的比例变化.方法选取20名经Rotterdam标准诊断为PCOS的不孕女性患者(PCOS组);36名正常排卵不孕女性(NOW)作为对照(NOW组).采用流式细胞术检测两组患者卵泡液中CD3+T细胞、CD4+Th细胞、CD8+Tc细胞和CD4+CD25+Treg细胞的比例.结果PCOS组患者卵泡液中CD3+T细胞的比例由(66.2±4.5)%下降到(54.8±5.3)%,差异有统计学意义(P<0.05).在检测的3个T细胞亚群中,CD8+Tc细胞的比例低于NOW组[(28.4±3.5)%vs.(16.8±6.2)%],差异有统计学意义(P<0.01),但CD4+Th细胞和CD4+CD25+Treg细胞的比例在两组间无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05).结论PCOS患者卵泡液中CD3+T细胞和CD8+Tc细胞的比例显著下降,提示PCOS患者体内免疫系统处于紊乱状态.
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足三里穴位注射联合干扰素治疗慢性乙型肝炎临床观察
目的:观察足三里穴位注射联合干扰素治疗慢性乙型肝炎临床疗效.方法:采用随机数字表法,将60例慢性乙型肝炎患者随机分为治疗组30例和对照组30例(中途脱落1例),对照组采用干扰素治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用黄芪注射液双侧足三里穴位注射,通过观察肝功能、HBV-DNA、乙肝两对半定量后进行临床疗效评价,同时观察外周血细胞毒性T细胞(Tc)、抑制性T细胞(Ts)水平改变情况.结果:2组临床疗效总应答率治疗组为83.3％,对照组为69.0％,2组比较,差异有显著性意义(P＜0.05).2组治疗结束后12月外周血Tc水平均有所提高,分别与治疗前比较,差异均无显著性意义(P＞0.05)；且2组间比较,差异无显著性意义(P＞0.05).治疗结束后12月2组均能明显降低慢性乙型肝炎患者Ts水平,与治疗前比较,差异均有显著性意义(P＜0.05)；且2组间比较,差异无显著性意义(P＜0.05).结论:黄芪注射液足三里穴位注射联合干扰素提高慢性乙型肝炎疗效,其机制可能因足三里黄芪注射液穴位对慢乙肝Tc、Ts水平的影响.
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树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗对食管癌移植瘤生长的抑制作用
背景与目的:我们前期的研究表明树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗能有效诱导体外抗食管癌细胞的特异性免疫应答,在此基础上,本研究进一步探讨树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)对食管癌细胞株EC-109裸鼠皮下移植瘤的体内抑瘤作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:①采用聚乙二醇法制备树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗并诱导抗原特异性CTL8产生.②建立食管癌EC-109细胞裸鼠皮下移植瘤模型,将成功荷瘤的裸鼠随机分为3组.分别以融合细胞激活的CTLs(A组,n=11)、未激活的T淋巴细胞(B组,n=11)以及RMPI=1640培养液(C组,n=11)作为效应细胞进行瘤内注射,每周一次.③4周后处死动物剥离肿瘤组织,测量并比较各组肿瘤组织的平均体积及平均湿重,计算抑瘤率.④免疫组化SP法检测3组裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.⑤流式细胞仪检测3组肿瘤细胞周期及细胞凋亡率,比较各组肿瘤细胞的S期细胞平均百分比(S-phase fraction,SPF)以及细胞平均凋亡率.结果:①A组肿瘤组织的平均体积显著小于B组和C组,差异有统计学意义[(881.45±31.14)mm3 vs.(1493.37±51.67)mm3,(2065.77±87.55)mm3,F=950.67,P=0.00],其平均湿重亦显著小于B组和C组,差异有统计学意义[(0.88±0.04)g vs.(1.38±0.07)g,(2.04±0.11)g,F=1335.90,P=0.00];A组抑瘤率明显高于B组,差异有统计学意义(56.86% vs.32.35%,F=1218.08,P=0.001).②A组肿瘤的平均PCNA-LI明显低于B组和C组,差异有统计学意义[(26.83±0.95)% vs.(51.82±1.51)%,(68.93±2.40)%,F=1528.39,P=0.000].③A组肿瘤细胞平均SPF值明显低于B、C两组,差异有统计学意义[(12.46±0.36)% vs.(29.39±0.96)%,(42.25±1.43)%,F=2188.05,P=0.001].④A组肿瘤细胞平均凋亡率明显高于B、C两组,差异有统计学意义[(38.03±1.21)% vs.(17.75±0.56)%,(6.59±0.22)%,F=4565.51,P=0.001].结论:本研究成功建立人食管癌EC-109细胞裸鼠皮下移植瘤模型,证实DC/EC-109细胞融合疫苗体外诱导的抗原特异性CTLs瘤内直接注射具有抑制食管癌裸鼠移植瘤生长的作用,其机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用.
