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白术内酯对小鼠结肠癌细胞增殖能力的影响
目的:观察白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对小鼠结肠癌细胞增殖能力的影响.方法:CT26细胞种植于96孔板,24 h后分别加入白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ200、100、50、25、12.5、6.25 μg/mL,放置培养箱48 h后,MTT法检测白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ不同剂量对CT26细胞增殖能力的影响;筛选对CT26抑制效果好的白术有效成分,检测其不同剂量给药后24、48、72 h后CT26细胞增殖能力的影响.结果:白术内酯Ⅱ抑制CT26细胞增殖能力为明显,其合适给药剂量为50 μg/mL,佳给药时间为48h.结论:白术内酯Ⅱ可能是抑制肿瘤细胞增殖的主要成分之一.
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消癌解毒方对CT26荷瘤小鼠抗结肠癌药效及机制研究
目的:观察消癌解毒方对小鼠CT26结肠癌细胞皮下移植瘤的抑制作用及其作用机制.方法:将以插块法接种结肠癌细胞皮下移植瘤成功的CT26荷瘤小鼠随机分为模型组(Veh)、阳性药物奥沙利铂组(OXA)、和消癌解毒方组(XJD),观察各组小鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、计算抑瘤率.采用Western-Blot、免疫组化法检测肿瘤组织样品中F4/80,TGF-β1,IL-6和IL-1β的表达,并与模型组和奥沙利铂组进行比较,研究消癌解毒方对结肠癌细胞皮下移植瘤的抑制作用及其作用机制.结果:消癌解毒方能够比较明显地抑制瘤体生长,改善结肠癌小鼠生存质量,该组小鼠肿瘤组织中F4/80,TGF-β1,IL-6和IL-1β表达量均高于模型组(P＜0.01,P＜0.05).结论:消癌解毒方能够通过增强肿瘤部位巨噬细胞的活性,增加细胞因子IL-1β,IL-6的表达;同时增加荷瘤小鼠肿瘤部位TGF-β1的表达来达到杀伤和诱导肿瘤细胞的凋亡,两种途径提高机体对肿瘤的免疫抑制,来延缓结肠癌的发生发展.
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ART1基因的表达对小鼠结肠癌CT26细胞转移潜能的影响及可能作用机制
目的：探讨ART1基因的表达对小鼠结肠癌CT26细胞转移潜能的影响及可能作用机制。方法将ART1－shRNA转入到小鼠结肠癌CT26细胞，置于荧光显微镜下观察该病毒的转染效率；采用RT－PCR和Western印迹法鉴定ART1基因沉默的效果；采用侵袭实验及黏附实验观察CT26细胞受ART1基因沉默的影响，并采用明胶酶谱法测定对该细胞中基质金属蛋白酶（ MMP）－2、MMP－9蛋白活性的影响。结果病毒感染4 d后ART1 mRNA 的表达量在ART1－shRNA 组中明显低于阴性对照组和空白对照组（P＜0．01）。 ART1－shRNA组CT26细胞的ART1蛋白的表达量明显低于阴性对照组和空白对照组（P＜0．01）。 ART1－shRNA组CT26细胞数明显少于阴性对照组和空白对照组（P＜0．05）；ART1－shRNA组的侵袭抑制率与阴性对照组和空白对照组相比，差异有统计学意义（P＜0．05）。与阴性对照组和空白对照组相比，RT1－shRNA 组CT26细胞与纤维连接蛋白的黏附能力均明显降低（P＜0．01）。 RT1－shRNA 组CT26细胞中RhoA／Rho相关螺旋卷曲形成蛋白激酶（ROCK1）、RhoA、MMP－2、MMP－9蛋白表达明显低于阴性对照组和空白对照组（ P＜0．01）。结论 ART1基因沉默能够导致小鼠结肠癌 CT26细胞的侵袭和黏附力降低，可能与 ART1基因沉默后ROCK1、RhoA、MMP－2、MMP－9的表达水平下调有关。说明ART1基因在结肠癌的侵袭和转移中具有重要作用。
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hMIP-1β基因转染小鼠结肠腺癌CT26细胞对免疫细胞的体内外趋化作用
探讨转染人巨噬细胞炎性蛋白1β(human macrophage inflammatory protein-1 beta,hMIP-1β)基因的小鼠结肠腺癌CT26细胞的生物学特性、致瘤性及对免疫细胞的体内外趋化作用.利用重组腺病毒载体携带hMIP-1β基因(AdhMIP-1β)转染CT26细胞.X-gal染色法检测基因转染效率;ELISA法检测基因转染CT26细胞培养上清中hMIP-1β的含量;Boyden趋化小室法检测培养上清对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)的趋化作用.小鼠皮下接种转染hMIP-1β基因的CT26细胞,观察其体内致瘤性和对免疫细胞的趋化作用.结果显示,腺病毒载体可携带hMIP-1β基因转染CT26细胞并高效表达hMIP-1β(P＜0.01),培养上清含hMIP-1β且对免疫细胞有明显趋化作用.转染hMIP-1β基因的CT26细胞皮下接种后成瘤率降低,肿瘤生长速度减慢,肿瘤内可见明显坏死灶,坏死灶内和周围可见较多淋巴细胞浸润.提示hMIP-1β基因转染CT26细胞后,通过分泌hMIP-1β趋化淋巴细胞等免疫细胞到肿瘤局部发挥有效的抗肿瘤作用,从而为肿瘤的免疫治疗提供新的思路和策略.
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癌胚抗原阳性CT26结肠癌细胞株的构建及鉴定
目的 构建适于普通小鼠的癌胚抗原(CEA)阳性结肠癌细胞株.方法 以重组CEACAM5cDNA-Lentivirus慢病毒转染小鼠结肠癌CT26细胞,抗生素筛选2周,以有限稀释法获得癌胚抗原阳性细胞CT26CEA,体外培养至第7代和第14代进行鉴定.用RT-PCR法和Western blot法分别检测CEACAM5 mRNA及蛋白表达,用荧光显微镜和免疫细胞化学法观察CEACAM5表达位置;并以第14代CT26CEA细胞建立BALB/c鼠皮下种植瘤模型,用活体荧光成像法和免疫组织化学染色观察瘤体CEACAM5表达情况.结果 在第7代和第14代CT26CEA细胞内可以检测到CEACAM5 mRNA及CEACAM5蛋白表达,荧光显微镜和免疫细胞化学法观察到其表达主要在细胞质,活体荧光成像法和免疫组织化学染色观察到小鼠瘤体有丰富CEACAM5表达.结论 成功构建小鼠结肠癌CT26CEA细胞株,能够在体外培养及小鼠体内稳定表达癌胚抗原,为研究正常免疫环境下癌胚抗原对结肠癌进展的影响及作用机制提供了适用工具.
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RPS20 miRNA质粒载体的CT26细胞转染条件优化研究
目的 探讨阳离子脂质体法转染CT26细胞适宜的转染条件,为小鼠体内以RNA干扰法进行脾虚证相关基因RPS20的功能鉴定提供参考.方法 以6孔培养板培养CT26细胞,利用阳离子脂质体转染DcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-neg Control plasmid进入CT26细胞,荧光显微镜、流式细胞仪两种方式观察不同剂量的质粒和转染试剂对转染效率的影响.结果 荧光显微镜下细胞计数法检测转染效率,4.0μg和6.0μg质粒的转染效率无明显差异;流式细胞仪检测转染效率,以Lipofectamine2000 15.0μL+质粒4 μg转染效率高,平均为25.3%.结论 6孔培养板,4.0μg质粒+15.0μL Lipofectamine2000为CT26细胞优化的转染条件.
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RPS20RNA干扰慢病毒的构建及其对CT26细胞生长的影响
目的 研究脾虚证差异表达基因——核糖体蛋白S20 (RPS20)RNA干扰慢病毒转染对小鼠结肠癌细胞(CT26)细胞指数的影响,验证前期筛选的RNA干扰序列的有效性,为后续在小鼠体内以RNA干扰进行RPS20的功能鉴定提供参考.方法 根据前期筛选的RPS20 RNA干扰有效序列,进行质粒载体的重组,包装RPS20干扰慢病毒并转染CT26细胞,采用xCELLigence细胞动态分析仪实时监测转染后细胞的细胞指数以反映细胞的生长情况.结果 测序图谱和Blast比对结果表明重组慢病毒包装载体构建成功,慢病毒滴度为1.2×105 TU/mL,RNA干扰慢病毒转染后CT26细胞指数的增长受到明显抑制,转染后30 h细胞指数抑制率达到82.24％.结论 前期筛选的RPS20 RNA干扰序列可成功构建包装干扰慢病毒,转染后能有效抑制CT26细胞的生长,可为后续研究提供参考.
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凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠T淋巴细胞增殖及活性的影响
目的 探讨凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠T淋巴细胞增殖及活性的影响.方法 (1)取对数生长期大肠癌CT26细胞制备凋亡肿瘤细胞及坏死肿瘤细胞,取Balb/c小鼠脾脏分离T淋巴细胞,并制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL).(2)将凋亡肿瘤细胞、坏死肿瘤细胞、正常肿瘤细胞分别与小鼠CTL共同培养(分别为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组),测定CTL的活性及增殖情况.(3)将小鼠T淋巴细胞分为对照组、刀豆蛋白A(ConA)组、凋亡肿瘤细胞+ ConA组、坏死肿瘤细胞+ConA组、活肿瘤细胞+ConA组,经相应处理后测定各组T淋巴细胞的活性及增殖情况.(4)选取30只Balb/c小鼠分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组各10只,分别将凋亡、坏死、对数生长期CT26细胞通过皮下及静脉输注小鼠,检测各组小鼠血清调节性T细胞(Treg)的表达情况.(5)另取30只小鼠,按方法(4)分组及处理后,测定各组小鼠血清可溶性Fas(sFas)、白细胞介素(IL)-12、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平.结果 凋亡肿瘤细胞组中CTL的活性、A450值均低于其他两组(P＜0.05).凋亡肿瘤细胞+ ConA组的T淋巴细胞CD69、CD25、CD71的表达率以及G2、G3及G4期的T淋巴细胞数量均低于ConA组、活肿瘤细胞+ ConA及坏死肿瘤细胞+ConA(P ＜0.05).凋亡肿瘤细胞组Treg的表达水平、sFas相对表达量低于肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组(P＜0.05).凋亡肿瘤细胞组IL-10、TGF-β表达水平高于其他两组(P＜0.05),而IL-12表达水平均低于其他两组(P＜0.05),IL4表达水平则高于肿瘤细胞对照组(P＜0.05).结论 凋亡小鼠大肠癌CT26细胞能够抑制小鼠T淋巴细胞增殖及活性,影响大肠癌小鼠正常免疫功能.
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凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响
目的 探讨凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响.方法 取对数生长期大肠癌CT26细胞制备凋亡、坏死肿瘤细胞.取Balb/c小鼠20只,分离T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞、获取巨噬细胞,并制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL).将小鼠CTL、NK细胞、巨噬细胞分别经相应肿瘤细胞处理后,均分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组,应用51 Cr释放实验测定各组CTL、NK细胞、巨噬细胞的活性,细胞计数(CCK-8)法检测各组CTL、NK细胞和巨噬细胞的增殖情况.另选取Balb/c小鼠分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组各10只,分别将凋亡、坏死、对数生长期CT26细胞按通过皮下及静脉输注小鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清可溶性Fas(sFas)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)4、IL-10、IL-12、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平.结果 与坏死肿瘤细胞组及肿瘤细胞对照组比较,凋亡肿瘤细胞组中不同效靶比的CTL、NK细胞及巨噬细胞活性均降低(P＜0.05).CCK-8法检测结果显示,凋亡肿瘤细胞组的CTL、NK细胞及巨噬细胞的A450值均低于坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组(P＜0.05).ELISA检测显示凋亡肿瘤细胞组sFas相对表达量低于坏死肿瘤细胞组和肿瘤细胞对照组(P＜0.05).凋亡肿瘤细胞组IL-4表达水平高于肿瘤细胞对照组(P＜0.05),IL-10、TGF-β表达水平则高于其他两组(P＜0.05),IL-12表达水平低于其他两组(P＜0.05).结论 凋亡大肠癌CT26细胞能够抑制小鼠特异性CTL、NK细胞、巨噬细胞增殖及其活性,影响大肠癌小鼠正常免疫功能.
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2008年全国主要医学期刊肛肠文献题录
diaocha shiyan yanjiu调查实验研究秦艳等.PARP抑制剂对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响.第三军医大学学报.2008,30(14):1330.彭艳华等.双歧杆菌脂磷壁酸对不同大肠癌细胞株转移能力及VEGF表达的影响.第三军医大学学报,2008,30(13):1256.
