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人乳头瘤病毒11型L1主要衣壳蛋白的B细胞表位多肽作为疫苗的研究
分析了人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,并以此为基础研制表位多肽疫苗.研究中采用Goldkey和PC/Gene软件系统,分析HPV11的L1主要衣壳蛋白的二级结构、抗原性、B细胞表位,并引入氨基酸抗原性指数,综合评估其B细胞优势表位.Fmoc固相合成表位多肽,高效液相层析方法纯化,毛细管电泳分析其纯度.与0.2ml佐剂完全乳化后,按50趣/只的剂量免疫小鼠,进行动物水平的免疫效果评价.取免疫小鼠血清,与HPV11 DNA阳性的尖锐湿疣患者的疣体上清液结合,鉴定免疫后小鼠所产生抗体的特异性.发现HPV11的L1主要衣壳蛋白的第426～439位和第487～501位具有较高的免疫原性,可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,且该抗体与人尖锐湿疣的疣体组织上清液呈阳性反应.说明所选这两个肽段为HPV11的L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,但是否具有功能特异性,尚需进一步研究.
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HPV单一感染与多重感染对宫颈病变影响的比较
目的:探讨单一高危HPV亚型与多重高危HPV亚型感染对官颈病变的影响.方法:选取2010年1月-12月在天津医科大学总医院妇科门诊就诊的有性生活史并出现临床症状的患者137例,比较患者细胞学、病理学结果出现的概率；比较单一高危HPV亚型与多重高危HPV亚型感染对宫颈病变影响的差别.结果:①在全部感染病例中,以20～49岁者居多,并且随着年龄的增长,感染率呈现下降趋势.②感染病例中,高危型别以HPV16感染率高.③在宫颈高级别病变中,以HPV16感染率高.(④单一高危与多重高危HPV感染相比较,宫颈细胞学和病理学结果差异无统计学意义.⑤高低危混合HPV感染中低级别病变概率高于单纯高危HPV感染,而高级别病变则相反.结论:①与单一高危HPV亚型相比,多重高危HPV亚型感染对宫颈病变严重程度的影响不明显.②与单纯高危HPV亚型感染相比,高低危HPV亚型混合感染更多表现为低级别宫颈病变.
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基因芯片检测人乳头瘤病毒在子宫内膜癌组织中的感染状况
目的:了解人乳头瘤病毒(HPV)在子宫内膜癌患者子宫内膜组织中的感染状况.方法:采用套式PCR扩增HPV DNA和HPV基因分型芯片技术,对40例子宫内膜癌患者、20例异常子宫出血患者和20例正常子宫内膜组织进行HPV基因亚型分析.结果:40例子宫内膜癌患者的子宫内膜石蜡包埋组织2例HPV DNA阳性,检出率为5.0%(2/40),均为HPV 6型感染;20例异常子宫出血患者的子宫内膜组织3例HPV DNA呈阳性,检出率为15.0%(3/20),分别为HPV 6型、HPV 11型及HPV 11型和HPV 6型混合感染;20例正常子宫内膜组织无HPV DNA阳性表达,检出率为0(0/20).结论:子宫内膜组织中HPV感染较少,可能不是HPV复制、成熟的适宜宿主上皮,子宫内膜的癌前病变和子宫内膜癌的发生发展可能与HPV感染无关.
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重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白在昆虫细胞sf 9中的表达条件优化研究
目的 确定利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白(HPV11 L1)的适表达条件.方法 通过间接免疫荧光法鉴定目的蛋白表达情况;用蛋白印迹法(Western blot)确定在不同感染复数(MOI)、不同表达时间条件下目的蛋白的适表达条件.结果 当sf9细胞密度为2.0×106/ml时,以MOI值为2.0的重组杆状病毒接种,悬浮表达96 h收获为适表达条件.结论 确定了目的蛋白的适表达条件,为进一步大量表达及纯化提供参考.
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自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测尖锐湿疣皮损的研究
目的 采用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测外生殖器尖锐湿疣皮损组织中HPV6b和11型E7蛋白的表达,探讨该抗体在临床检验中的应用价值.方法 55例经临床和病理确诊的尖锐湿疣皮损石蜡标本,用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体进行免疫组化检测,其中18例皮损冰冻标本用RT-PCR法测定HPV6b和11型E7蛋白mRNA表达,分析与免疫组化结果的符合率.结果 55例尖锐湿疣皮损的免疫组化染色显示,HPV6b和11型E7蛋白为胞核染色,且皮损全层表皮细胞均有阳性表达,但基底层阳性细胞较多.HPV6b和11型E7蛋白阳性表达率分别为76.36％(42/55)和58.18％(32/55),总阳性表达率为94.55％(52/55),两蛋白双阳性率为40.00％(22/55),两蛋白均阴性表达为3例(5.45％).18例尖锐湿疣冰冻标本经RT-PCR法检测,HPV6b和11型E7 mRNA阳性表达分别为15例和10例,双阳性表达7例,其阳性表达型别与免疫组化结果完全一致,符合率均为100％.结论 该自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体免疫组化法检测尖锐湿疣皮损,检测结果直观,可以观察到HPV6b和11型感染细胞在病损中的分布位置.
关键词： 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒6 人乳头瘤病毒11 乳头瘤病毒E7蛋白质类 -
温热对HPV-6/11型早期基因E6和E7表达的影响
目的 探讨不同温热条件对HPV感染皮损中E6/E7基因表达的影响.方法 采用PCR法确定6例尖锐湿疣标本HPV型别.利用37℃,42℃,45℃不同的温热条件处理置于培养液中的离体尖锐湿疣皮损,采用实时定量PCR法检测HPV-6/11型早期基因E6/E7 mRNA的表达水平.结果 6例标本中.各有1例分别感染HPV-6、HPV-11,4例同时感染HPV-6和HPV-11.E6、E7 mRNA的表达水平均随温度升高而逐渐减少.HPV-6 E6 mRNA的相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.61±0.17).45℃(0.27±0.15);HPV-6 E7 mRNA的相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.56±0.21),45℃(0.16±0.11);HPV-11 E6 mRNA的相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.60±0.22).45℃(0.16±0.08);HPV-11 E7 mRNA相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.55±0.15).45℃(0.24±0.06).组间比较差异有统计学意义(P<0.01.结论 温热对HPV-6/11型E6和E7基因表达的抑制作用可能是感染消退的机制之一.
关键词： 人乳头瘤病毒6 人乳头瘤病毒11 发热 乳头瘤病毒E7蛋白质类 -
人乳头瘤病毒11型基因组DNA在HaCaT株中的转染
目的 探讨转染与筛选技术获取稳定携带有HPV11基因组DNA的细胞的可能性.方法 对含有pBR322.HPV11质粒的大肠杆菌培养扩增,然后进行质粒的提取与纯化,并用限制性内切酶BamH Ⅰ切割下HPV11全长基因.低熔点琼脂糖回收后,用T4 DNA连接酶进行线状DNA的自身环化,再与pIK-neo质粒、用Lipofectamine试剂共转染HaCaT细胞.通过G418筛选阳性细胞克隆,将阳性克隆细胞合并与培养扩增后,用FQ-PCR技术检测细胞内HPV11DNA的存在,用巢式RT-PCR技术检测HPV11E1^E4 mRNA的表达.结果 HPV11型基因组DNA转染至HaCaT细胞后,经G418筛选约2周,培养皿内即可见对G418抵抗的阳性细胞克隆出现,其形态与普通HaCaT细胞相似.用FQ-PCR在筛选后的HaCaT细胞中检测到HPV11DNA的存在,平均病毒DNA载量为(15.9±16.8)拷贝/细胞.传代3次后细胞内病毒DNA无丢失,载量为(23.9±1.1)拷贝/细胞.与未传代细胞相比,二者间差异无统计学意义(t=-0.822,P>0.05).巢式RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后检测到HPV11 E1^E4 mRNA表达的特异性628 bp条带.结论 HPV11基因组DNA可通过脂质体转染法成功导入HaCaT细胞内,通过筛选可获得阳性细胞,且经3次传代后HPV11DNA仍然存在.
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无锡地区妇女宫颈HPV感染及基因型别分析
目的 对疑似人乳头瘤病毒(HPV)感染的970例妇女进行HPV基因分型检测,以探讨其临床意义.方法 用专用官颈刷采取妇女宫颈的脱落细胞,采用基因芯片法检测970例HPV临床样本,并进行基因分型.结果 970例样本中,HPV感染390例,阳性率40.2%.共检出12种HPV亚型,检出感染单一HPV亚型260例(26.8%),感染两种亚型以上130例(13.4%).低危型主要为HPV6、11,高危型主要为HPVl6、33、52、58、18等.结论 无锡地区妇女宫颈HPV感染率较高,感染亚型主要是6、11型.HPV基因分型检测对于生殖道感染以及子宫颈癌的早期发现以及预防和治疗具有重要意义.
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基因芯片检测技术在女性生殖道HPV分型感染中的应用
目的 探讨女性生殖道人乳头瘤病毒(HPV)各种基因分型感染的情况.方法 采用HPV分型基因芯片检测系统,同时检测5种低危型HPV亚型和18种高危型HPV亚型.结果 测定250例标本中HPV阳性92例(36.8 %),20～35岁的年龄阶段检出率高(占总阳性数73.9%),其中感染单一亚型57例(61.9%),感染2种亚型28例(30.4%),感染3种亚型及以上7例.低危型主要为HPV6、11,其次为43;高危型主要为16、18、33、35、45、31、58等亚型.结论 基因芯片对于检测HPV的多种型别和HPV多型别混合感染具有重要意义,可为HPV感染和宫颈癌的防治提供重要依据.
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粤东地区尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒检测及型别分析
目的 探讨粤东地区尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)的检测与分型.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测粤东地区101例尖锐湿疣患者病损组织中的HPV.结果 HPV的检出率为70.3%(71/101),其中HPV6、11型的检出率为51.5%(52/101),HPV42型的检出率为3.0%(3/101),HPV43型的检出率为2.0%(2/101),其他型的检出率为13.8%(15/101).结论 粤东地区尖锐湿疣患者HPV感染以HPV11型和HPV6型为主,感染高峰年龄为20~40岁.
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性病门诊就诊者宫颈HPV的检测和基因分型
目的 探讨汕头地区性病门诊就诊者宫颈人乳头瘤病毒(HPV)基因型别的感染情况及临床意义.方法 利用HPV基因芯片对811例性病门诊就诊者宫颈拭子进行23种HPV亚型检测.结果 811例宫颈拭子HPV阳性率34.2%(277/811),共检出19种HPV亚型,其中单一型别阳性207例,多重感染阳性70例.在207例单一型别阳性中,低危型检出率为45.4%(94/207),各型HPV6、11、42、43检出率分别为18.8%、22.7%、1.5%、2.4%;高危型检出率为54.6%(113/207),各型HPV16、18、31、33、35、56、58、59、68和73的检出率为 14.5%、10.1%、2.4%、3.9%、2.9%、3.9%、7.7%、2.9%、1.5%和1.9%.在70例多重感染中,单纯低危型检出率为4.3%(3/70),混合高危型检出率为95.7%(67/70).结论 HPV6、11、16、18、58及多重型是性病门诊女性就诊者宫颈HPV感染的主要型别,多重型感染以混合高危型为主,应重视性病门诊女性就诊者中宫颈HPV DNA的检测.
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人乳头瘤病毒不同基因型检测的临床应用
目的 分析本地区人乳头瘤病毒(HPV)各基因型的感染情况.方法 应用反向斑点杂交法(RDB)对在本院妇科门诊和住院的宫颈疾病患者进行23种HPV基因型筛查.结果 781例患者标本中,HPV检出率为46.09%(360/781),共检出18种HPV型别,其中单一型感染者为76.39%(275/360);二型感染14.44%(52/360);三型和三型以上感染9.17%(33/360),感染的HPV型别排前5位的是HPV11、6、16、18、58型.结论 本地区官颈疾病患者中,HPV的感染率较高.RDB法能在同一样本中同时检测23种HPV型别,为HPV感染的诊断和宫颈癌防治提供重要依据.
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120例宫颈上皮内瘤变患者不同型别HPV感染状况分析
目的 探讨不同亚型人乳头瘤病毒(HPV)在不同程度宫颈上皮内瘤变(CIN)患者中的感染状况.方法 对40例正常宫颈及120例CIN的患者(包括CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ患者各40例),进行常见的4种亚型HPV(HPV低危型6、11型及高危型16、18型)的检测.结果 HPV总阳性率为57.50％.HPV6、11、16、18 4种亚型在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组的感染率分别为5.00％、0、30.00％、12.50％,7.50％、12.50％、47.50％、10.00％,17.50％、10.00％、47.50％、7.50％. CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组均以高危型HPV16型感染率高.HPV感染检出率在正常宫颈组及CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ组分别为22.50％、47.50％、77.50％、83.50％,各组HPV感染率比较差异有统计学意义(P＜0.05),HPV感染率随着宫颈CIN严重程度的增加呈上升趋势.结论 正常宫颈及不同级别的CIN患者HPV感染情况不同,不同亚型HPV在不同程度的CIN患者中的感染率不同.
