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南京地区2010～2011年度呼吸道感染患儿腺病毒的流行病学研究
本研究为了解南京地区儿童腺病毒(ADV)感染的流行特点及型别,收集2010年8月至2011年7月南京医科大学附属南京儿童医院住院及门诊呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物(NPA)及咽拭子(NPS)共644例,采用巢氏聚合酶链反应法(Nested-PCR)检测ADV hexon基因,将阳性PCR扩增产物进行测序、同源性和进化分析.同时对12种其他呼吸道相关病毒进行PCR检测,包括人博卡病毒(HBoV),呼吸道合胞病毒(RSV),人鼻病毒(HRV),副流感病毒1～4型(PIV1-4),流感病毒A和B(IFVA/B),人偏肺病毒(HMPV),冠状病毒NL63和HKU1( HCoV-NL63和HCoV-HKU1).结果显示:644例标本中共检出ADV阳性扩增产物171份,检出率为26.55％,3型120例(70.18％,120/171),7型16例(9.36％,16/171),1型12例(7.02％,12/171),2型10例(5.85％,10/171),5型6例(3.51％,6/171),6型3例(1.75％,3/171),57型3例(1.75％,3/171),41型1例(0.58％,1/171).ADV感染呈全年散发,其发病高峰主要在4～7月.以7岁以下儿童多见(96.49％).171例ADV感染患儿中有99例(57.89％)存在混合感染,其中以呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒(HRV)多见.ADV阳性患儿诊断以下呼吸道感染为主(63.16％),肺炎占30.41％.结论:ADV是2010年8月到2011年7月南京地区儿童呼吸道感染的重要病原之一,其优势流行株为3型,长期监测其流行型别具有重要意义.
关键词： 腺病毒 呼吸道感染 Nested-PCR 儿童 -
无症状携带献血者HTLV-Ⅰ病毒的前病毒长末端核酸序列分析
目的 了解本地区检出的无症状献血人群携带人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)株亚型.方法 对3份HTLV-Ⅰ/Ⅱ血清阳性标本,采用Nested-PCR方法检测前病毒长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)并测序分析.结果 从1名有多次合格献血经历,但抗体筛查强阳性(OD =3.000)血样中提取到HTLV-Ⅰ前病毒DNA.核苷酸序列分析提示,与日本原型ATK株比较其序列一致性为98.4％ (738/750).结论 试验认定该HTLV病毒为世界群b型日本型毒株,并提示无症状携带HTLV-Ⅰ病毒的献血者具有潜在经血传播的风险.
关键词： HTLV Nested-PCR 核酸序列分析 无症状献血者 -
张家口地区献血者隐匿性乙肝病毒感染研究
目的:对张家口地区无偿献血者中隐匿性乙肝病毒感染情况进行流行病学调查,为当地血液安全筛查提供指导意义.方法:应用HBsAg ELISA检测试剂盒对回库无偿献血者标本进行检测；对血浆标本采用nested-PCR技术进行HBV核酸检测；对阳性标本进行HBVDNA序列分析.结果:在总计5498例次标本的检测中,共有5417例为HBsAg阴性；HBsAg阴性标本中nested-PCR方法检出13例HBV DNA阳性(0.24％,13/5417)；测序结果显示隐匿性HBV感染者中C基因型所占的比例为61.5％(10/16),明显高于HBsAg阳性的HBV感染者(28.2％,11/39,P＜0.01).结论:张家口地区无偿献血者中存在较高比例的隐匿性乙肝病毒感染.
关键词： 献血者 Nested-PCR 血液筛查 隐匿性乙肝病毒感染 -
应用NESTED-PCR法检测细胞培养物中的支原体污染
[目的]研究细胞培养物中支原体污染的快速检测方法. [方法]引物选择各型支原体16S和23SrRNA处的共同保守区域,应用NESTED-PCR,检测细胞培养物中的支原体污染. [结果]NESTED-PCR能检测6种常见的污染细胞培养物的支原体,扩增的片段分别在360～500bp和150～300bp;NESTED-PCR检测敏感性比一步法高.[结论]应用NESTED-PCR检测细胞培养物中的支原体污染,具有快速、特异和敏感的特点.
关键词： 支原体 细胞培养物 Nested-PCR -
nested-PCR试剂盒检测牛精液中的布鲁氏菌DNA
目的 布鲁氏菌是兼性细胞内寄生菌,能够在吞噬细胞内长期存活并繁殖,引起家畜流产和人的波浪热.根据病原性和感染宿主的不同将布鲁氏菌分为六个种,能否快速、有效地从各种病料中检出布鲁氏菌,对及时控制布鲁氏菌在家畜中的传播和预防对人的感染十分重要.方法 2006年6月,宁夏某公司奶牛场工作人员送检3份奶牛冻干精液, 用巢式PCR检测出其中的2份为布鲁氏菌感染阳性,这年8月,重复取这2头种公牛的冻精、鲜精复查.结果 用本方法 检测全部为布鲁氏菌感染阳性.结论 这是国内首次用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)试剂盒从送检的牛精液中检出了布鲁氏菌DNA片段.
关键词： 布鲁氏菌 Nested-PCR 牛精液 检测 -
2015-2016年云南省疟疾实验室诊断质量及影响因素分析
目的 对云南省2015-2016年网报疟疾病例的实验室诊断质量和影响因素进行分析.方法 收集云南省2015-2016年疟疾网报病例,使用显微镜检法和nested-PCR法对样本进行疟原虫诊断核实.计算收样率、符合率、病例就诊所需时间和血片制作评分,利用卡方检验、单因素方差分析对率或均数的差异进行统计分析,分析网报病例质量;利用单因素Lo-gistic回归对影响病例诊断质量的因素进行分析.结果 2015-2016全省疟疾网报病例的收样率为92.15％,收样覆盖全省1 5个州市.疟疾病例发病到就诊所需要的平均时间为(5.1±6.6)d.全省2015和2016年疟疾网报病例检测与省级疟疾参比诊断实验室镜检和nested-PCR检测阳性的符合率分别为97.1％,95.1％,95.1％,95.1％;虫种检测符合率分别为93.1％,92.3％,91.3％和91.3％.位于边境地区的报告单位诊断水平较高,乡镇卫生院对虫种的诊断结果较为准确,省级疟疾诊断参比实验室较其他报告单位更易检出恶性疟和间日疟的混合感染.全省各级报告单位的血涂片制作平均分为79.18±8.84,且2016年的平均得分高于201 5年.单因素Logistic回归结果表明,疟疾病例发病到就诊所需的时间,报告单位的类型及报告单位是否位于边境地区都影响疟疾病例诊断的质量.结 论2015-2016年云南省疟疾网报病例的诊断质量总体较高,各级诊断水平比较稳定.但是,在消除疟疾阶段,应该探讨以防治带动培训,以培训促进提高为目的的多种方式结合的疟疾防治手段,重视持续加强和保持各地各级疾病防治部门对疟疾的综合防治能力.
关键词： 疟疾 网报病例 血片 镜检 Nested-PCR -
两种PCR方法检测狂犬病毒的敏感性和特异性比较
目的 比较Nested-PCR和SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性.方法 对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性:同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价.结果 SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法可检测出2.3×106 copies/μl核酸分子,与NestedPCR方法相比,敏感度提高10倍.两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应.SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法检测花费3 h,检测时间比Nested-PCR方法节省2 h.结论 与Nested-PCR相比,SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法.
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应用nested-PCR对西安市乙肝病毒基因型的研究
目的:研究西安市乙肝患者HBV基因型分布状况,初步建立适用于临床的HBV基因分型的方法.方法:对收集的360例乙肝患者血清样本,针对乙肝病毒基因型(A-H)前S1到S基因的保守序列设计出12条内外引物,采用nestedPCR进行2轮扩增,第2轮产物使用30 g/L琼脂糖进行电泳,根据片断大小进行基因分型.结果:分型成功348例,其中HBV B基因型87例(24.2%);C型233例(64.7%);B+C混合型2例(0.56%),未检出A、D、E、F、G、H型.结论:nested-PCR适用于临床HBV基因分型常规检测,通过该方法的检测表明西安市HBV感染者以C基因型为主,B型次之,其余基因型分布较少.
关键词： 西安 乙肝病毒 基因型 Nested-PCR -
寻常型银屑病患者治疗前后外周血中单个核细胞Foxp3 mRNA水平的检测分析
目的 观察寻常型银屑病患者外周血单个核细胞中Fopx3 mRNA转录水平,并分析其治疗前后的变化特点,为探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)与寻常型银屑病免疫学发病机制的关系打下一定基础.方法 采用巢式-聚合酶链式反应(Nested-PCR)的方法,检测25例寻常型银屑病患者和10例正常对照组的外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的转录水平,并对其中15例患者进行治疗前后的比较.以银屑病面积和严重度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评价疗效,并分析疗效与Foxp3 mRNA的转录水平的特点.结果 25例寻常型银屑病患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA水平(1.87±0.90)显著低于10例正常对照组(3.83±1.04)(P＜0.05).进一步分析显示:其中15例患者采用三联法治疗后,外周血单个核细胞中Foxp3mRNA转录水平显著升高,当PASI的评分为(3.2±2.97)时尤其明显(2.5 4±1.02).结论 寻常型银屑病患者外周血单个核细胞Foxp3 mRNA转录水平显著低于正常人,治疗后外周血单个核细胞中Foxp3mRNA水平显著升高,提示:CD4+CD25+Treg与寻常型银屑病免疫学发病机制密切相关.
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番茄溃疡病一步法快速超灵敏检测技术研究
对种子携带的番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp,michiganensis)进行简单抽提和纯化,不经过DNA提取而以病原菌为模板直接进行一步法PCR检测,对纯菌液Direct-PCR低检出限为2600个细菌/mL,而Nested-PCR低检出限可达到13个细菌/mL;对种子提取液,Direct-PCR不能检出,而Nested-PCR低检出限可达到3×105个细菌/mL.一步法Nested-PCR可在12h内对番茄种子携带的番茄溃疡病菌进行准确的定性鉴定.并且方法方便快速,成本低,灵敏度高,适用于种子携带番茄溃疡病菌的快速鉴定.
关键词： 番茄溃疡病 Nested-PCR 快速检测
