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鹅源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析
新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)是副粘病毒科腮腺炎病毒属的成员,基因组全长15 186个核苷酸(nt),编码6种结构蛋白,即基质蛋白(M)、核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)及融合蛋白(F),其中HN和F位于病毒囊膜表面,前者负责识别细胞受体并介导病毒对细胞的吸附,后者则参与病毒的穿透、细胞融合和溶血等过程.NDV可以感染多种禽类,尤其是感染鸡以后可致严重发病,造成重大的经济损失;现有的文献记载一般认为水禽如鸭、鹅对NDV具有较强的抵抗力[1],感染后症状轻微或不表现临诊症状[2].然而1997年以来,我国华东地区部分省市陆续爆发一种被称为"鹅的禽副粘病毒感染"或"鹅副粘病毒病"的传染病[3,4],对养鹅业构成较大威胁.在本病的研究过程中,从江苏、浙江、广东等地的患病鹅群分离到数株NDV,并证实NDV是本病的一种主要病原[5].为进一步研究这些鹅源NDV的生物学特征,探讨其致病机理,我们测定了与NDV致病性和毒力密切相关的囊膜糖蛋白HN的基因序列,并对其进行了比较分析.
关键词： 鹅 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 序列分析 -
天然溶瘤新城疫病毒Italien株HN基因真核表达载体的构建和表达
目的 构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达.方法 采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HN cDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆.用Western blot、免疫荧光法检测HN蛋白的表达.结果 经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实真核表达载体pcDNA3.1-HN构建正确.Western blot和免疫荧光分析表明HN基因在CHO-K1中成功表达.结论 天然溶瘤型NDV Italien株的HN cDNA被成功克隆,所构建的真核表达载体pcDNA3.1-HN可以在CHO-K1细胞中稳定表达.
关键词： 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 转染 基因表达 -
表达鸡新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的重组腺病毒对肝癌细胞HepG-2的抑制作用
目的 探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;Annexin V染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspasel、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化.结果 Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100 MOI,作用时间为48 h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%～35.04%);Annexin V染色结果显示,Ad-HN感染48 h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性.结论 Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应.
关键词： 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 重组腺病毒 肝癌 抗肿瘤作用 -
pIRApoptinHNIL18对结肠癌细胞HCT-116的抑制效应
目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuramidinase, HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应.方法:重组质粒pIRApoptinHNIL18通过脂质体介导法体外转染人结肠癌细胞HCT-116,通过Western blotting和RT-PCR检测外源基因表达;采用AO/EB染色法检测pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用;利用流式细胞术分析pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψ)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用3,5-二羟基甲苯法测定唾液酸含量.结果:pIRApoptinHNIL18转染人结肠癌细胞HCT-116后,外源基因能够有效表达;肿瘤细胞生长受到抑制;线粒体△Ψ由(94.41±8.17)%下降到(30.70±8.01)%(P＜0.05);唾液酸含量由(0.33±0.06) mmol/L下降到(0.09±0.03) mmol/L(P＜0.01);ROS水平由(52.48±6.09)%升高到(68.98±7.26)%(P＜0.05).结论:pIRApoptinHNIL18可通过线粒体途径诱导细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞HCT-116的生长.
