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一种可诱发高滴度的针对人乳头瘤病毒HPV16,HPV52,HPV58中和抗体反应的HPV16嵌合病毒样颗粒疫苗的研究
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒(VLP)主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加.HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别.本文将HPV58次要衣壳蛋白L2aa.16～37多肽(与HPV52L2aa.16～～37序列相同)插入HPV16L1的h4-βJ coil区,利用昆虫表达体系构建获得16L1h4-58dEVLP,协同人用佐剂氢氧化铝和单磷酰脂质A(Alum-MPL)免疫小鼠.活性检测结果显示16L1h4-58dE VLP免疫血清可中和17种HPV假病毒中的16种,其中针对HPV16的平均中和抗体滴度高(滴度,76 800),与HPV16L1VLP对照组的相当(P＞0.05);重要的是,针对HPV58及HPV52的平均中和抗体滴度均大于103(分别为4 050和1 725);另外,还可中等滴度中和HPV45(550),HPV18(506),HPV33 (500),HPV39 (463),HPV68(431),HPV6(300),HPV57(150),HPV11 (125)及较低滴度的中和HPV2/HPV27(40),HPV35 (38),HPV5(25),HPV31 (13),但对HPV59没有中和活性.因此,以本研究构建16L1h4-58dE VLP进行广谱HPV疫苗的研究,可望降低疫苗成本,具有应用前景.
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人乳头瘤病毒6b L1/16E7嵌合蛋白的基因克隆和表达
目的研究HPV6b L1/16E7嵌合蛋白的基因克隆及其在昆虫细胞的表达，为防治尖锐湿疣和宫颈癌的基因工程疫苗研究作准备。方法用PCR扩增出HPV6b L1/16E7嵌合蛋白基因，将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393，制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞表达HPV6b L1/16E7嵌合蛋白。结果 HPV6b L1/16E7嵌合蛋白基因在昆虫细胞中得到了表达，并可自组装形成病毒样颗粒。结论昆虫细胞表达的HPV6b L1/16E7嵌合病毒样颗粒可进一步用于HPV感染的免疫机理及基因工程疫苗研究。
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人乳头瘤病毒16型嵌合病毒样颗粒体外形成实验方法的建立
目的 建立人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型嵌合病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)体外形成实验的方法.方法 以HPV16型L1为模板,将两个L2保守序列(aa56 ～ 75,aal08 ～ 120)分别插入L1两个可插入位点(DE袢状区,h4状区),构建出4种嵌合蛋白基因,利用Bae-to-Bae杆状病毒-昆虫表达系统表达嵌合的4种VLP蛋白,经蔗糖密度梯度离心纯化,纯化的目的蛋白进行VLP体外解聚重聚实验,Western blot分析体外解聚重聚前后的蛋白.结果 表达及纯化的4种HPV16 L1-L2嵌合蛋白相对分子质量均约60 000,大小与预期相符;经VLP体外解聚重聚实验,使不能很好自组装的4种HPV16 L1-L2嵌合蛋白组装形成VLP,并具有免疫原性.结论 建立的方法有助于HPV嵌合VLP的形成,能够明显提高其组装效率,为以L2蛋白为目标的第二代HPV疫苗的嵌合VLP体外组装提供了可行的实验方法.
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HPV 6b结构蛋白L1和沙眼衣原体CTL表位嵌合病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达
目的 为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗.方法 将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞表达嵌合病毒样颗粒,并经SDS-PAGE电泳和Western blot分析鉴定,电镜负染.结果 嵌合蛋白HPV6b L1/ Ct MOMP249-268在昆虫细胞中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56 000,与HPV 6bL1单抗产生特异性反应,电子显微镜观察到病毒样颗粒形成.结论 在昆虫细胞中表达的含HPV6b L1和Ct CTL表位的嵌合蛋白,能自行组装成病毒样颗粒,为人乳头瘤病毒和沙眼衣原体嵌合疫苗的研究奠定基础.
