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LYST蛋白表达量在Chediak-Higashi综合征临床诊断中的应用
目的 探讨LYST基因突变导致的蛋白差异表达在罕见病Chediak-Higashi综合征(Chediak-Higashi syndrome,CHS)中的临床诊断应用价值.方法 利用免疫印迹(Western blotting,WB)检测CHS患儿、患儿直系家属以及健康志愿者的外周血白细胞中LYST蛋白表达量.结果 患儿白细胞中LYST蛋白出现两种截短体(p.R1104X、p.N2535KfsX2),呈高表达,而患儿直系家属以及健康志愿者白细胞中未检测到LYST蛋白表达.结论 CHS患儿外周血白细胞LYST截短体表达量较健康人显著增加.因此,免疫印迹检测LYST截短体的高表达可以作为辅助临床诊断CHS的一种新方法.
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Smad信号通路在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用
目的 研究Smad信号通路在BMP-2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制.方法 从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导向心肌定向分化.Western blotting和免疫细胞化学法检测诱导后细胞内磷酸化的Smadl/5/8的表达及其随诱导时间在细胞内分布的变化.RT-PCR检测诱导前后细胞内GATA-4和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)mRNA的表达.结果 BMP-2诱导后15 min,细胞内可检测到磷酸化的Smadl/5/8的表达,30 min～1 h表达明显增加,1 h后开始降低,4 h呈低表达.BMP-2诱导后15 min,磷酸化的Smadl/5/8仅见于胞质中,30 min胞质和胞核均见表达,1 h主要在胞核内表达.BMP-2诱导后2周,细胞明显表达GATA-4和cTnT mRNA.诱导后4周细胞呈现成熟心肌细胞样形态.用SB203580抑制Smad信号后,GATA-4和cTnT mRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显.结论 Smad信号通路在BMP-2诱导MCSCs向心肌分化中发挥重要的介导作用.
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宫颈癌组织CX43和Vimentin的表达与临床意义研究
目的:检测正常宫颈组织和CIN及宫颈癌病灶中的CX43和Vimentin表达水平,分析二者与临床病理指标之间的关系.方法:收集2014年1月-2015年6月年高青县人民医院妇产科手术切除的33例宫颈癌、32例CIN及16例正常宫颈组织标本作为对照组,试验对象术前均未进行化疗与放疗,且均行HPV检查.采用免疫荧光与Western Blot方法检测CX43和Vimentin在3种组织中的表达水平.结果:(1)Cx43在对照组、CIN(Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为68.8%、66.7%、65%、27.3%,宫颈癌组cx43表达明显低于对照组(p=0.006);cx43在宫颈癌静脉侵犯组的表达率显著低于未侵犯组:13%VS60%,(p=0.018);在淋巴结侵犯组的表达率显著低于未侵犯组:9.1%和63.6%,(p=0.004).(2)Vimentin在对照组、CIN(Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为12.5%、25%、50%、69.7%,进行X2检验显示阳性表达率有显著性差异(p=0.024);Vimentin在宫颈癌侵犯静脉组的表达率显著高于未侵犯静脉组:90.9%VS27.3%,(p=0.001);在宫颈癌淋巴结侵犯组的表达率显著高于淋巴结未侵犯组:86.4%和36.4%,(p=0.011).(3)spearman相关分析显示cx43与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.485,p=0.004).结论:CX43表达降低和Vimentin表达增多与宫颈癌恶性程度相关,Vimentin与CX43的表达呈负相关联系.
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缺血引起沙土鼠纹状体DARPP-32磷酸化状态的变化
采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉阻断前脑缺血模型, 以放射自显影（反向磷酸化, back-phosphorylation）及免疫印迹(Western blotting)法体外测定缺血时纹状体DARPP-32磷酸化水平和蛋白含量的变化。结果表明, 短暂性缺血纹状体DARPP-32的免疫学活性和蛋白含量无明显改变。在缺血10 min内, 随缺血时间的延长, 体外DARPP-32的［32P］的掺入量在缺血5 min时升高, 在缺血2、7、10 min时均降低, 而反向磷酸化的测定结果表明体内DARPP-32磷酸化水平增高, 说明缺血可诱导DARPP-32磷酸化水平变化。
关键词： 脑缺血 蒙古沙土鼠 DARPP-32 反向磷酸化 Westernblotting -
常州市2008～2010年自愿无偿献血者HIV感染情况及WB带型分析
常州市自1996年起开展艾滋病初筛,2000年本市首例HIV抗体阳性者被检测出.到目前为止,已累计发现艾滋病感染者400多例.艾滋病疫情呈现三大特点:一是由高危人群向普通人群扩散,三种传播途径并存,且性接触传播比例逐年增加.二是感染者中,青壮年尤其是男性青壮年占比例较大.三是流动人口不断增加,男性同性恋高危人群不断增长,疫情有蔓延的危险.笔者就近几年常州市无偿献血者HIV感染情况及WB(免疫印迹法)确认实验进行分析,现报告如下.
关键词： 无偿献血 HIV Westernblotting -
Omi/HtrA2对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究
目的 探讨丝氨酸蛋白激酶Omi/HtrA2在肝癌细胞中在促凋亡基因p53与抑凋亡基因XIAP之间调控机制的研究,并探讨其今后用于靶向治疗的可能性.方法 用Western blotting的方法半定量测定4种不同的肝细胞株(L02、HepG2、Hep3B、Huh7)中p53、XIAP、Omi/HtrA2蛋白的表达量,以及使用Omi/HtrA2特异性抑制剂ucf-101后各自的表达量.结果 在p53表达不同的细胞株中XIAP蛋白和Omi/HtrA2蛋白的表达也是不同的,p53可上调Omi/HtrA2蛋白表达,下调XIAP蛋白表达.使用ucf-101后,肝癌细胞中XIAP蛋白表达明显上调.结论 Omi/HtrA2是p53与XIAP之间凋亡调控作用的信号因子之一,参与细胞凋亡的调控,有可能作为肿瘤细胞凋亡的治疗靶点.
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心理应激对肠易激综合征模型大鼠肠黏膜孤啡肽受体表达的影响
目的 检测心理应激对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠肠黏膜孤啡肽受体(ORL-1)mRNA和蛋白表达水平,初步探讨心理应激对IBS大鼠的影响.方法 80只SD雌性大鼠随机分为对照组和实验组,每组40只,实验组采用束缚应激的方法制作IBS动物模型,并对模型进行鉴定.实验0、1、2、3、4周时两组分别随机取出8只大鼠,在近端结肠(距回盲部2 cm)处取2块黏膜,采用荧光定量PCR法检测ORL-1 mRNA的相对表达量,同时用Western blotting的方法检测ORL-1蛋白,动态观察各组大鼠的表达变化.结果 与对照组相比,实验组大鼠ORL-1 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),应激1周时高,2~4周逐渐下降.实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢性心理应激引起大鼠IBS的发生机制可能与其影响大鼠肠道肠黏膜孤啡肽受体(ORL-1)mRNA及蛋白表达量相关.
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大鼠急性一氧化碳中毒后c-fos蛋白的表达研究
目的:检测c-fos蛋白在急性一氧化碳中毒脑组织中的早期变化规律.方法:将25只健康雄性SD大鼠随机分为实验对照组及一氧化碳中毒组,一氧化碳中毒组按不同的存活时间分为3h组、6h组、12h组及24h组,每组5只大鼠.运用Western blotting法检测c-fos蛋白在一氧化碳中毒后不同时间点的表达变化.免疫组织化学法观察c-fos蛋白的表达部位.结果:HE染色示一氧化碳中毒24 h组出现脑组织轻度水肿.Western bloting结果显示与一氧化碳组比较,c-fos蛋白在对照组中表达较少,差异具有统计学意义(P<0.05).在一氧化碳中毒各时间组中c-fos蛋白表达水平随着时间的延长呈现一种"双峰"趋势,即3 h明显升高后,6 h略为下降,12 h再次升高达高峰,24 h降低(P<0.05).免疫组化结果显示:实验对照组中大鼠脑组织内见有少量的c-fos蛋白表达,而在一氧化碳中毒组则呈强阳性表达.结论:c-fos蛋白的表达和一氧化碳中毒后经过时间呈现一定的相关性,在诊断急性一氧化碳中毒和中毒时间的推断中具有一定的参考价值.
