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程序降温法用于同种瓣膜的制备
目的研究同种瓣膜的制备方法,减轻制备过程中的细胞损伤.方法记录程序降温过程组织细胞的降温曲线,比较不同方法的组织细胞损伤.结果对照组在-4℃～-6℃区域,出现明显的降温速率减缓,甚至小幅度温度回升过程.实验组保持均匀的降温速率.实验组组织细胞的损伤程度较对照组明显减轻.结论同种瓣膜的降温过程中存在相变点的异常温度变化,通过调控不同的降温速率可以减轻降温过程本身对组织细胞的损伤.
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程序降温对重型颅脑损伤患者意识状态的影响
目的 探讨程序降温对重型颅脑损伤患者意识状态的影响.方法 将118例重型颅脑损伤患者随机分为程序组60例和传统组58例.程序组按照预测评估、降温措施、降温速度、体温监控、复温管理、症状监测6个程序实行,并行亚低温管理.传统组按传统降温法在患者发热时实行降温,体温正常时停止降温.比较2组患者的降温效果及意识状态.结果 2组患者降温效果比较,程序组有效率为81.67%,传统组有效率为36.21%,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).程序组意识状态(Glasgow评分)降温前为(20.08±3.18),降温后为(34.96±4.88),传统组Glasgow评分降温前为(21.21±3.52),降温后为(28.29±5.41),降温后2组患者意识状态比较,差异有非常显著性(P＜0.01).结论 对重型颅脑损伤患者实施程序降温,能明显有效地降低体温和提高意识状态评分,对尽快恢复患者意识状态具有非常重要的现实意义.
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一步熏蒸对麦管冻融人类精子运动能力的影响
目的 比较一步熏蒸法和程序降温法对人类精子冷冻复苏后运动能力的影响.方法 25份精液标本取自2011年5至7月上海市人类精子库25名精液捐赠者,应用麦管为冷冻载体,按照1∶1的比例添加改良甘油-卵黄-柠檬酸钠作为冷冻保护剂,将液化后的每份精液标本平均分为2份,分别进行一步熏蒸法和程序降温法冷冻.按照世界卫生组织推荐标准对冷冻前后的标本进行精液常规分析,利用IVOS精子分析仪进行精子密度、总活动率、前向运动精子百分率、运动参数(包括平均路径速度、平均直线速度、平均曲线速度、平均鞭打频率)的测定.精子形态学染色使用改良巴氏染色,采用人工分析办法,显微镜下计数200条精子,计算其形态正常率.同一种冷冻方法进行冷冻前、后上述各指标的比较,以及两种不同冷冻方法精子复苏后上述各指标的比较均采用配对t检验.结果 冷冻前,精子总活动率、前向运动精子百分率、平均路径速度、平均直线速度、平均曲线速度、平均鞭打频率分别为(91.36 ±4.96)％、(81.28 ±6.41)％、(59.29±9.30) μm/s、(49.80 ±8.40) μm/s、(83.39±15.70) μm/s、(16.68 ±3.36) Hz,采用一步熏蒸法冷冻复苏后,分别为(46.04 ±20.14)％、(40.22±18.42)％、(48.00±11.60)μm/s、(41.11±8.50) μm/s、(71.55±17.19)μm/s、(15.94±14.30) Hz,与冷冻前比较,除平均鞭打频率差异无统计学意义外(t=0.258,P＞0.05),其余指标差异均有统计学意义(t=11.324、11.958、4.266、3.964、3.620,P均＜0.05).采用程序降温法冷冻复苏后,上述各指标分别为(48.05±18.27)％、(42.47±15.62)％、(45.30 ±6.51) μm/s、(38.08 ±4.99) μm/s、(64.23 ±11.75) μm/s、(14.00 ±2.99) Hz,与冷冻前比较,差异均有统计学意义(t=10.337、10.874、7.154、5.510、6.494、3.244,P均＜0.05).一步熏蒸法和程序降温法冷冻复苏后,精子复苏率、总活动率、前向运动精子百分率、形态正常率在两种方法间差异均无统计学意义(t=0.425、0.364、0.622、0.676,P＞0.05)；而一步熏蒸法的平均路径速度、平均直线速度、平均曲线速度、平均鞭打频率均高于程序降温法,其中平均直线速度和平均曲线速度的差异有统计学意义(t=2.489、2.822,P均＜0.05).结论 麦管可作为精子冷冻的载体.与程序降温法相比,一步熏蒸法操作简便,冷冻复苏后精子具有较高的运动能力,是一种值得推荐的精子快速冷冻方法.
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程序降温羟乙基淀粉冷冻保存自体造血干细胞移植治疗恶性血液病
1.目的:6%羟乙基淀粉(HES)、4%白蛋白和5%二甲亚砜(DMSO)构成的保护剂的毒性较单纯的10%DMSO冷冻保护剂低,但前者用于造血干细胞非程序降温-80℃冰箱冷冻保存.该课题旨在将含羟乙基淀粉的低浓度DMSO冷冻保护剂用于程序降温冷冻保存,探讨冷冻保护剂对造血干细胞活性的影响,改进冷冻保护剂的临床应用.
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降温速度在生物瓣膜制备保存中作用的研究进展
深低温保存是目前组织、器官保存的佳方法.随着生物瓣膜制备、保存及置换技术的不断提高,生物瓣膜的深低温保存成为目前人们研究的热点问题.本文把降温速度引入生物瓣膜制备保存中,并对其历史回顾及研究进展进行总结.
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不同冷冻保护剂对低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响
背景:非程序降温-80 ℃低温冰箱保存方便快捷,程序降温-196 ℃液氮保存可靠长久,将两者合二为一简化流程已成功用于临床.目的:观察不同冷冻保护剂对-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响.方法:分设10%二甲亚砜组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉组、5%二甲亚砜联合0.25 mol/L海藻糖组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉及0.25 mol/L海藻糖组.采用 -80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法对单采外周造血干细胞进行冷冻保存,通过透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪观察Annexin-V、PI、Caspase-3水平.结果与结论:4组冷冻保存细胞的存活率、凋亡率和死亡率差异均无显著性意义(P > 0.05).透射电镜下各组细胞超微结构变化差异不明显.单个核细胞群落冷冻保存后存活率在90%以上,含成熟细胞较多的CD45+细胞群落凋亡发生率可达50%左右.造血干祖细胞群落中,早期细胞较晚期细胞更能耐受冷冻损伤.提示在基础冷冻保护剂二甲亚砜的基础上,加入羟乙基淀粉和海藻糖并未显示出对冷冻保存效果的增强作用.
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超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较
背景:在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张.目的:比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果.方法:将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011 L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4 ℃按1 ℃/min的速率降温,按35 ℃/min快速降至-45 ℃,再以15 ℃/min升至-21 ℃,然后以5 ℃/min降至-90 ℃,取出冷冻管置-196 ℃液氮罐内.第二组细胞浓度为1×1011 L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80 ℃冰箱过夜后取出,置-196 ℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内.结果与结论:两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义(P > 0.05).结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用.
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深冷冻保存对离体牙牙周膜细胞活性影响的研究
目的：探讨应用不同降温方法和不同冷冻保护液的深冷冻保存技术，对人离体牙牙周膜细胞活性的影响。方法：收集新鲜拔除的人第一或第二前磨牙25颗随机分为5组；其中4组使用含海藻糖或不含海藻糖的冷冻保护液，分别应用程序降温或快速降温至－196℃，冷冻保存一周；一组新鲜拔除牙齿为对照组。分别刮取牙根面中1／3的牙周膜组织，消化法收集细胞，台盼蓝染色，高倍镜下计数活细胞数，并计算细胞存活率。结果：不同降温方法不同冷冻保护液深冷冻保存与对照组相比，牙周膜细胞存活率无明显差异。其中，使用含海藻糖的冷冻保护液程序降温的方法牙周膜细胞存活率高。结论：应用深冷冻技术保存牙齿，牙周膜细胞的活性无明显变化，其中使用含海藻糖的冷冻保护液程序降温的方法对牙周膜细胞的活性影响小。
