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过表达TRIM69抑制细胞内源c-Jun蛋白的表达
目的 探索TRIM69负调控AP1信号通路及抑制内源c-Jun蛋白表达的分子机制.方法 在子宫颈癌细胞HeLa细胞或人胚肾细胞HEK293T细胞共转染荧光素酶报告基因质粒和空载体或TRIM69,共转空载体组作为对照,通过双荧光素酶报告基因实验检测了TRIM69对8条关键信号通路的影响;在HEK293T细胞过表达TRIM69全长及各个结构域的截短体,通过Western blot实验检测了TRIM69抑制细胞内源c-Jun蛋白表达的关键结构域;在HEK293T细胞过表达TRIM69,利用cycloheximide (CHX)、MG132或chloroquine分别处理细胞,通过蛋白稳定性实验探讨了TRIM69负调控内源c-Jun蛋白表达的分子机制.结果 TRIM69可以特异负调控AP1信号通路(P＜0.05),并且TRIM69对内源c-Jun蛋白表达的抑制作用依赖于其RBCC结构域(P＜0.05),进一步研究发现TRIM69通过蛋白酶体途径影响内源c-Jun蛋白的稳定性(P＜0.05).结论 TRIM69负调控AP1信号通路并通过蛋白酶体途径影响内源c-Jun蛋白的降解.
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JNK信号转导通路在Aβ25-35诱导大鼠原代海马神经元凋亡中作用机制的研究
目的研究Aβ25-35诱导海马神经元凋亡的机制以及JNK抑制剂SP600125的保护作用,探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK-c-Jun信号转导通路的可能作用机制.方法将体外海马原代神经元培养至第7天,用β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)和JNK抑制剂(SP600125)对细胞进行处理.用光镜进行海马原代神经元形态学观察,MTT检测不同时间点的细胞活性,以及用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性.结果大鼠原代海马神经元经过Aβ25-35处理后,发生凋亡,细胞生存率呈时间依赖性下降,经过免疫学方法检测发现细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高,且这一过程可被SP600125抑制.MTT检测发现在使用SP600125后,细胞生存率上升,具有显著性差异.结论体外原代海马神经元培养实验表明Aβ25-35在诱导原代海马神经元凋亡过程中,c-Jun氨基端激酶(JNK)及其底物转录因子c-Jun被激活.使用JNK抑制剂SP600125后,JNK和c-Jun均被抑制,且海马原代神经元的生存率明显提高,生存状态明显改善.研究表明JNK信号转导通路可能促成Aβ的细胞毒性作用.
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知母皂苷对脂多糖引起星形胶质细胞炎症因子释放的影响及机制
目的 研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AC)炎症因子释放的抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响.方法 实验设对照组、LPS组、SAaB组和阻断剂组.ELISA法和Griess法分别测定各组AC培养液中TNF-α和NO的含量;Western blot检测AC磷酸化JNK和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变;免疫荧光染色法观察AC的磷酸化ATF-2蛋白表达水平.结果 AC在LPS(10mg·L-1)刺激下TNF-α和NO的分泌、磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高.特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10 μmol·L-1)可明显抑制LPS引起的TNF-α和NO产生增加以及磷酸化ATF-2蛋白表达水平;SAaB(1、10、100μmol·L-1)则可明显降低TNF-α和NO产生,下调磷酸化JNK、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2的蛋白表达水平.结论 SAaB能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层AC炎症因子的释放,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关.
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吡格列酮对脂多糖刺激的星形胶质细胞白介素-1β的抑制作用及机制
目的 研究吡格列酮(Pio)对脂多糖 (LPS)诱导的星形胶质细胞白介素-1β(IL-1β)抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响.方法 ELISA法测定培养液中IL-1β的含量;免疫荧光染色法观察星形胶质细胞IL-1β的蛋白表达;Western blot检测星形胶质细胞磷酸化JNK1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变.结果 星形胶质细胞在LPS (10 mg*L-1)刺激下IL-1β的含量、蛋白表达以及磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun蛋白水平与正常对照组比较均增高.特异性JNK特异性阻断剂SP600125 (10.0 μmol*L-1)可明显抑制LPS引起的IL-1β产生增加;Pio (0.1、1.0、10.0 μmol*L-1)则可降低IL-1β产生,抑制IL-1β的蛋白表达及下调p-JNK1、p-c-Jun蛋白水平.结论 Pio能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞IL-1β表达增加,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关.
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转录因子 c－Jun 调控成骨细胞 Mepe 基因表达的研究
目的：探讨转录因子c－Jun对Mepe基因的转录调控作用，并寻找c－Jun在Mepe启动子上的特异性结合位点。方法：利用免疫组织化学方法定位c－Jun与Mepe在小鼠骨组织的表达；采用real－time PCR的方法检测c－Jun的表达量改变对Mepe mRNA表达的影响；应用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析c－Jun对Mepe基因启动子转录活性的影响。结果：转录因子c－Jun在小鼠骨细胞胞核中呈阳性表达，而Mepe在小鼠骨细胞的胞浆中有表达；real－time PCR显示c－Jun过表达后，Mepe mRNA的表达显著增加（ P＜0．05）；双萤光素酶报告基因检测系统检测显示，在成骨细胞中转染pCMV－3Tag－1－c－Jun的实验组Mepe启动子的转录活性升高（P＜0．05）；定点突变c－Jun的潜在结合位点后，Mepe启动子的转录活性显著下降（ P＜0．05）。结论：转录因子c－Jun可通过Mepe启动子上潜在的c－Jun结合位点上调成骨细胞中该基因的转录。
关键词： 转录因子c-Jun 细胞外基质磷酸化糖蛋白 成骨细胞
