首页 > 文献资料
-
PLCε通过PKCα／β／TBX3信号通路调控人膀胱癌细胞系T24的迁移和侵袭
目的：体外实验研究PLCε基因调节人膀胱癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法设计并合成针对PLCε基因mRNA的寡核苷酸序列，构建重组腺病毒Ad-shPLCε。 T24细胞感染Ad-shPLCε腺病毒后，用Western blot检测PKCα／β及TBX3、E-cadherin的表达；用划痕实验、Transwell 迁移和侵袭实验检测膀胱癌细胞T24的迁移、侵袭能力。结果 Ad-shPLCε重组腺病毒感染膀胱癌细胞T24，对其PLCε mRNA表达抑制率为75.6％，对其PLCε蛋白表达抑制率为67.4％。 Ad-shPLCε感染组T24细胞迁移能力较空载组和空白对照组明显减弱（ P＜0.05）；重组腺病毒Ad-shPLCε感染组T24细胞穿膜细胞数较空载组和空白对照组明显减少（ P＜0.05）。 Ad-shPLCε重组腺病毒感染膀胱癌T24细胞后下游PKCα／β的活化受到抑制（ P＜0.05），同时，TBX3的表达减少，而E-cadherin的表达增高（ P＜0.05）。结论通过以重组腺病毒干扰抑制PLCε基因，能有效抑制膀胱癌T24细胞系中PLCε下游PKCα／β的活化情况及TBX3，E-cadherin的表达变化，并且对T24细胞的迁移、侵袭能力具有一定的抑制作用。
-
PLCε基因敲除小鼠血液生理生化指标分析
目的 分析PLCε基因敲除小鼠纯合型(-/-)和野生型小鼠(+/+)血液生理生化指标的差异.方法 选取成年PLCε基因敲除纯合型(-/-)小鼠与野生型(+/+)小鼠各20只,雌雄各半,检测8项生理指标和11项血清生化指标.结果 野生型(+/+)小鼠的WBC、RBC、HCT和MCH等4项生理指标,纯合型小鼠(-/-)的PLT指标,雌雄之间差异显著(P＜0.05)；野生型(+/+)的MCV和MCH指标高于纯合型(-/-)小鼠,差异显著(P＜0.05)；野生型(+/+)小鼠的ALB、GLU和TC等3项生化指标,纯合型(-/-)小鼠ALP和TG等2项生化指标,雌雄之间差异显著(P＜0.05)；野生型(+/+)小鼠的TBIL指标低于纯合型(-/-)小鼠,差异显著(P＜0.05).结论 野生型雌雄之间有7项生理生化指标存在差异比纯合型3项差异指标多,野生型与纯合型之间有2项血液生理指标和1项血清生化指标存在显著差异.
-
DEN诱发PLCε基因敲除小鼠肝癌模型的建立
目的 通过突变诱发剂二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)联合肿瘤增强剂苯巴比妥(phenobarbital,PB)诱发PLCε基因敲除小鼠建立肝脏肿瘤动物模型.方法 随机选取出生12日龄的雄性PLCε-小鼠和PLCε+/+小鼠各40只(分别为实验组I、实验组Ⅱ),先腹腔注射DEN,4周龄后开始加饮PB药水,持续喂养；同样随机选取出生12日龄的雄性PLCε-/-小鼠和PLCε+/+小鼠各40只(分别为对照组Ⅰ、对照组Ⅱ)正常喂养；实验周期均为24周,实验结束后在电子显微镜下观察小鼠肝脏肿瘤的形成.结果 经病理学结果证实,实验组Ⅱ小鼠发生肝脏肿瘤18只,成癌率为60％,实验组Ⅰ小鼠发生肝脏肿瘤15只,成癌率为46.9％.而对照组Ⅰ、Ⅱ的小鼠均未发生肝癌.结论 利用突变剂DEN联合PB诱发PLCε基因敲除小鼠成功地建立了肝脏肿瘤模型,为进一步研究PLCε在肝脏肿瘤形成过程中的作用奠定了基础.
-
PLCε基因敲除小鼠移植性肝癌模型的建立与分析
目的：利用PLCε基因敲除小鼠建立移植性肝癌动物模型，以探讨PLCε基因在肝肿瘤生长发育过程中的作用。方法选取PLCε＋/＋小鼠15只为对照组，选取PLCε＋/＋（野生型）和PLCε-/-（敲基因型）小鼠各15只为模型组I和II，沿腹中线开腹后将H22细胞接种到模型组小鼠肝脏实质内，对照组注射生理盐水。于注射后第15天行剖腹探查，观察各组成瘤率及肿瘤体积，并进行肿瘤病理学分析。结果各组小鼠的存活率均为100％。模型组I肿瘤移植成功率为100％，肿瘤体积平均为（65.21±5.25） mm3。模型组II的肿瘤移植成功率为53.3％，肿瘤体积平均为（23.46±3.47）mm3。模型组I的肿瘤平均体积明显大于模型组II（P＜0.05）。模型I组和II组病理检查均证实为原位肝细胞瘤。结论成功建立了PLCε敲基因小鼠移植性肝癌动物模型，验证了PLCε敲基因小鼠具有抑制肝肿瘤生长的特性。
-
PLCε沉默后通过Wnt/β-catenin信号通路抑制比卡鲁胺耐药的前列腺癌细胞增殖
目的:探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε (phosphoinositide-speci c phospholipase Cε, PLCε) 对前列腺癌细胞增殖和比卡鲁胺敏感性的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法:采用比卡鲁胺浓度递增及间歇诱导法建立对比卡鲁胺耐药的前列腺癌B-LNCAP细胞.应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测前列腺癌LNCAP和B-LNCAP细胞中雄激素受体 (androgen receptor, AR) 和PLCεmRNA和蛋白的表达, CCK-8法检测LNCAP和B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性.将干扰PLCε表达的重组慢病毒LV-shPLCε或阴性对照 (negative control, NC) LV-NC感染B-LNCAP细胞 (称为LVshPLCε/B-LNCAP或LV-NC/B-LNCAP), Wnt/β-catenin信号通路激活剂AZD2858处理LV-shPLCε/B-LNCAP细胞, 以未进行任何干预的B-LNCAP细胞作为空白组.应用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及对比卡鲁胺的敏感性, 应用克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力, 蛋白质印迹法检测各组细胞的细胞质和细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平, 实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中c-myc、cyclin D1mRNA和蛋白表达水平.结果:B-LNCAP细胞中PLCε、AR mRNA和蛋白的表达水平均高于LNCAP细胞 (P值均＜0.05), B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的耐药系数为132.87, 成功构建前列腺癌耐药细胞B-LNCAP.LV-shPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力均弱于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.01), 比卡鲁胺对LV-shPLCε/B-LNCAP细胞的半数抑制浓度 (half maximal inhibitory concentration, IC50) 值均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.05), LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平明显低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.01), LVshPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.01);AZD2858处理的LVshPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力强于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P值均＜0.05), 比卡鲁胺对AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞IC50值高于未处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P＜0.05), AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平均高于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P值均＜0.05), AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均高于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P值均＜0.05) .结论:PLCε下调后通过抑制Wnt/β-catenin信号通路, 增强前列腺癌B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性, 抑制前列腺癌B-LNCAP细胞的增殖.
-
PLCε对人骨肉瘤细胞迁移侵袭影响的实验研究
目的：研究磷脂酶 Cε( phospholipase C epsilon, PLCε)对人骨肉瘤细胞株U2OS迁移侵袭能力的影响。方法 siRNA干扰U2OS细胞PLCε的表达,应用CCK-8实验检测 PLCε对细胞增殖能力的影响,以划痕实验、Transwell小室模型实验测定细胞迁移能力改变情况,以明胶酶谱实验测定细胞分泌基质金属蛋白酶MMP2的变化。结果体外合成特异性 PLCε基因 siRNA 可明显抑制 U2OS 细胞中PLCε的表达；沉默 PLCε后,U2OS细胞的增殖能力无明显变化,而划痕愈合能力、迁移活力较对照组细胞明显下降,其分泌MMP2的水平也明显下降。结论沉默PLCε可致人骨肉瘤细胞U2OS的迁移和侵袭能力下降。
-
支气管哮喘急性发作期血氧饱和度水平与磷脂酶Cε的关系
目的:探讨磷脂酶Cε(PLCε)与支气管哮喘患者急性发作期血氧饱和度(SaO2)的关系.方法:243例支气管哮喘患者,根据SaO2水平将患者分成3组,分别为SaO2 ＞95％组、91％≤SaO2≤95％组和SaO2 ＜91％组,比较3组患者一般临床资料、磷脂酶Cε(PLCε)水平、趋化因子Ccl2、Cxcl2及炎症因子IL-4、IL-5和IL-13水平,并多因素回归分析PLCε水平与SaO2及第1秒用力呼气容积(FEV1)的相关性.结果:3组患者年龄间差异有统计学意义(P＜0.05);SaO2＜ 90％组血清PLCε水平高(均P＜0.05),且91％≤SaO2≤95％组高于SaO2＞ 95％组(P＜0.05),SaO2＜90％组Ccl2、Cxcl2、IL-4、IL-5和IL-13表达水平高(均P＜0.05),且91％≤SaO2≤95％显著高于SaO2＞95％组(P＜0.05);多因素回归分析患者血清PLCε水平与SaO2呈显著负相关,与FEV1水平呈正相关(均P＜0.05).结论:支气管哮喘急性发作期SaO2与血清PLCε呈负相关,PLCε可能通过影响支气管哮喘患者气道炎症反应而影响患者SaO2及肺通气功能.
-
N-丁基-N2(4-羟丁基)亚硝胺(BBN)诱发PLCε基因敲除小鼠膀胱癌形成的研究
磷脂酶C(PLC)是肌醇磷脂信号通路的关键酶,在哺乳动物中已鉴定出6个族:PLCβ、PLCγ、PLCδ、PLCε、PLCξ、PLCη,至少13个同工酶.PLCε是1998年Shibatohge等[1]在秀丽隐杆线虫体内发现的一种新的PLC亚型,是Ras蛋白的新的效应分子并以GTP-依赖的方式被Ras调控.
-
PLCε siRNA转染对膀胱癌细胞株T24侵袭能力的影响
目的:研究磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)siRNA表达质粒的转染对人膀胱癌细胞系T24侵袭转移能力的影响.方法:分别将携有PLCε siRNA基因的真核表达质粒两对p11-PLCε和p12-PLCε载体体外转染T24细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PLCε mRNA的表达情况,应用Transwell小室侵袭试验、明胶酶谱分析分别研究转染前、后膀胱癌细胞侵袭转移能力的变化,并以空载质粒HK-A转染和未转染细胞为对照.结果:RT-PCR检测显示p11-PLCε,p12-PLCε转染成功后T24细胞PLCεmRNA表达明显比空质粒HK-A转染和未转染细胞减弱;p12-PLCε siRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(26.8±5.8)和p11-PLCεsiRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(25.8±6.2)明显少于未转染细胞(34.8±6.9)和HK-A转染细胞(33.8±5.7)(P＜0.01);明胶酶谱分析显示转染P11-PLCε、p12-PLCε均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于未转染细胞和HK-A转染细胞.结论:推测转染外源性PLCεsiRNA基因能下调PLCε基因的表达并能抑制膀胱癌细胞侵袭转移.
-
PLCε shRNA质粒构建及功能鉴定
T24细胞株后对PLCε mRNA及对PLCε蛋白表达均有明显抑制,流式细胞术结果表明细胞阻滞于G0/G1期,MTT检测表明重组的载体质粒明显抑制T24细胞增殖活力.结论 针对PLCε基因的shRNA能有效抑制膀胱癌T24细胞中PLCε基因的表达及膀胱癌细胞增殖.
