首页 > 文献资料
-
肌糖蛋白TN-C促进人骨髓基质干细胞向成骨细胞的分化
目的 研究肌糖蛋白(Tenascin-c,TN-C)对人骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用,为TN-C在骨折愈合中的应用提供理论依据.方法 用全骨髓培养法获取人骨髓基质干细胞(hBMSCs),第6～10代的细胞用于本研究.体外培养的hBMSCs用自行制备的不同浓度重组TN-C (rTN-C)蛋白处理(0、1、10、50和100 nmol/L),于处理后不同时间进行细胞茜素红染色,检测细胞的矿化;或于不同时间收集细胞总RNA进行RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN) mRNA水平的变化;同时利用ALP检测试剂盒和骨钙素放射性免疫试剂盒分别检测ALP活性和细胞培养基中OCN含量.结果 1)rTN-C处理hBMSCs 10 d后,rTN-C呈剂量依赖性促进成骨细胞的矿化(P＜0.05);2) rTN-C处理hBMSCs后,细胞ALP活性及培养基上清中OCN含量显著高于未处理对照组(P＜0.05).结论 肌糖蛋白对人BMSC向成骨细胞的分化有一定的促进作用.
-
DMSO体外定向诱导入骨髓基质干细胞心肌分化
目的研究二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)诱导人骨髓基质干细胞(hMSC)心肌分化过程中心肌特异转录因子和心肌特异基因的表达变化.
-
辛伐他汀对人骨髓基质干细胞成骨分化功能的促进作用
目的 观察辛伐他汀对体外培养的人骨髓基质干细胞(human Bone Marrow Stromal cells,hMSCs)成骨分化功能的影响,探讨其刺激成骨的作用机制.方法 体外培养来自于股骨颈骨折患者的骨髓基质干细胞,传代后实验组加入1×10-7mol/L的辛伐他汀,于不同时间点采用Western blot检测核转录因子1(Core Binding Factor 1,Cbfa 1)的表达,碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP的比活性,及放射免疫法检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)含量.结果 辛伐他汀作用后,实验组与对照组比较,实验组Cbfa 1蛋白表达水平增高,ALP比活性增高且骨钙素含量增加.结论 1×10-7mol/L辛伐他汀能够促进人骨髓基质细胞成骨分化,此种促进作用可能与辛伐他汀增强其分化过程中相关蛋白的表达有关.
-
可注射藻酸盐支架与人骨髓基质干细胞的体外复合培养
背景:目前可注射组织工程骨的研究主要限于动物实验,若人骨髓基质干细胞与藻酸盐生物相容性良好,可注射组织工程骨将是极具前途的临床治疗手段.目的:体外观察人骨髓基质干细胞与可注射支架藻酸钙凝胶的生物相容性.方法:实验组将第2代人骨髓基质干细胞与藻酸钙凝胶复合培养,对照组单纯接种骨髓基质干细胞.倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态及增殖情况,MTT法半定量检测细胞增殖情况.结果与结论:倒置显微镜下见实验组细胞生长良好,与对照组无明显差异.扫描电镜见骨髓基质干细胞在藻酸钙表面贴附、增殖良好,第6天时细胞已跨越微孔表面或向孔内生长.MTT法显示与对照组相比,实验组细胞增殖能力不受影响.结果初步表明藻酸钙与人骨髓基质干细胞体外生物相容性较好.
-
5-氮杂胞嘧啶诱导人骨髓基质干细胞心肌分化
目的:研究5-氮杂胞嘧啶(5-aza)诱导人骨髓基质干细胞(hMSC)心肌分化过程中心肌特异转录因子和心肌特异基因的表达变化.方法:取传至第8代hMSC,以3μmol/L的5-aza孵育细胞24h,分别在诱导后3d、1周、2周和3周4个时间点提取细胞RNA,以RT-PCR方法检测细胞心肌特异转录因子Nkx2.5和心肌特异基因(connexin43、ANP等)的表达.结果:hMSC经5-aza诱导后,形成肌节样结构.RT-PCR的结果显示,5-aza可诱导心肌特异基因connexin43和ANP的表达,随诱导时间延长,connexin43和ANP的表达量逐渐增加.5-aza还能诱导hMSC表达心肌特异转录因子Nkx2.5,并持续表达至3周.结论:5-aza在体外可诱导hMSC向心肌细胞分化,5-aza可能通过诱导心肌特异转录因子的表达而启动hMSC心肌化的过程.
-
体外定向诱导人骨髓基质干细胞内皮化
目的探索体外定向诱导人骨髓基质干细胞(human bone marrow stromal cell,hMSC)内皮分化的潜能与条件.方法采用含多种生长因子的内皮细胞支持液EGM2-MV(Clonetics)作为体外内皮化诱导剂,观察形态学和细胞表面免疫标志的变化,研究hMSC体外内皮化的条件和诱导效果.结果经25% EGM2-MV诱导后,细胞生长良好,在多种生长因子的刺激下,原先长梭形的细胞缩短,出现鹅卵石样形态.诱导培养10 d后,经流式细胞学检测,内皮干细胞标志CD133阳性率明显升高,基质干细胞标志CD106阳性率下降.结论 hMSC具有向血管内皮细胞分化的潜能.利用含有多种生长因子的内皮细胞支持液EGM2-MV,可在体外诱导hMSC向内皮细胞分化.本研究为利用自体MSC移植重建心脏血运提供实验依据.
-
茶黄素对人骨髓基质干细胞的成骨诱导作用
目的 探讨茶黄素对体外培养人骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨诱导作用及其能力.方法 将第二代人BMSCs分为茶黄素组、对照组,茶黄素组加入浓度为10 mmol/L茶黄素,对照组不干预.对比观察两组干预后细胞形态,钙结节、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原及骨钙素(OCN)免疫组化染色结果,并检测各组4、8、12、16 d各时点ALP、OCN活性.结果 茶黄素组钙结节、ALP、Ⅰ型胶原及OCN免疫组化染色均呈阳性,对照组均为阴性;茶黄素组各时点ALP、OCN活性均高于对照组(P均＜0.05).结论 茶黄素可促进人BMSCs向成骨细胞分化.
-
骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响
目的：观察骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响。方法：采用人骨髓基质干细胞单独培养，按照干预药物浓度（mmol·L－1）分为：骨碎补总黄酮10－4 mmol·L－1组、10－6 mmol·L－1组、10－8 mmol·L－1组和淫羊藿苷10－4 mmol·L－1组、10－6 mmol·L－1组、10－8 mmol·L－1组。运用噻唑蓝比色法（MTT法），分别在实验第1天、第3天、第5天、第7天时观察其增殖情况。同时，运用蛋白免疫印迹方法（in-cell western blot）分别测定人骨髓基质干细胞培养时骨源性碱性磷酸酶蛋白的表达情况。采用一般线性模型的重复测量方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果：药物作用第5天，骨碎补总黄酮10－6 mmol·L－1、10－8 mmol·L－1组和淫羊藿苷10－4 mmol·L－1、10－6 mmol·L－1、10－8 mmol·L－1组增殖能力优于对照组，与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0．05）。在药物作用于人骨髓基质干细胞第9天时，骨碎补总黄酮10－6 mmol·L－1组、淫羊藿苷10－6 mmol·L－1组骨源性碱性磷酸酶的表达量是优于对照组的，但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：骨碎补总黄酮、淫羊藿苷可以促进人骨髓基质干细胞的增殖，10－6 mmol·L－1的骨碎补总黄酮、淫羊藿苷对BALP表达无显著影响。
-
人骨髓基质干细胞作为心血管瓣膜组织工程种子细胞的实验研究
目的 探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow stromal cells,hMSC)作为心脏瓣膜组织工程种子细胞的可行性.方法 取胸外科手术患者肋骨骨髓,Ficoll离心法获取单个核细胞,体外培养扩增,以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原.将自然分化的hMSC接种于去细胞猪心瓣膜上2周,免疫组化检测细胞分化结果;扫描电镜和透射电镜观察细胞种植情况;生化检测种植细胞DNA含量和细胞外基质,并和隐静脉来源成纤维细胞构建的组织工程瓣膜作对比.结果 hMSC在自然条件下能够分化表现成纤维细胞特性,Vimentin和α-SMA染色阳性;电镜观察活性成肌纤维细胞在瓣膜表面生长均匀平滑;瓣膜组织DNA和胶原含量显著高于去细胞瓣组,与成纤维细胞对照组无明显差异.结论 hMSC能够在自然条件下先向成纤维细胞分化,并在去细胞猪心瓣膜上增殖生长,分泌胶原,可作为心血管瓣膜组织工程的种子细胞.
-
不同来源人骨髓基质干细胞的生物学特性研究
目的探讨不同来源人骨髓基质干细胞(hBMSC)体外培养的生物学特性.方法取不同疾病患者不同部位骨髓体外分离、培养hBMSC,同时应用β-甘油磷酸钠、地塞米松对获得的hBMSC进行体外诱导分化,检测干预后hBMSC的 ALP、Ⅰ型胶原mRNA表达情况.结果培养的细胞体外增殖迅速,细胞的CD34、CD45阴性表达,CD29、CD90阳性表达,诱导后ALP、Ⅰ和Ⅴ型胶原mRNA阳性表达.结论人体多种部位均可获得具有未分化潜能的人骨髓基质干细胞.
-
人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究
目的:探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响.方法:取正常肋骨分离骨髓,制备单个核细胞贴壁培养,约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养、传代.将分选的脐血造血干/祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上,比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干/祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响.结果:人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上,经流式细胞仪检测证实为基质干细胞,单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞,而后者有维持长期造血的作用.结论:该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞,培养的细胞有体外支持长期造血的作用.
-
转染BIG-3基因的人骨髓基质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究
目的 研究转染BIG-3基因对人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向软骨细胞诱导分化的影响.方法 将构建好的pMSCVpuro-BIG-3转染至建系的hBMSCs,5 μg/mL嘌罗霉素筛选12 d后,扩增并收集细胞,电泳证实特定条带无误.实验分三组:hBMSCs-BIG-3组、hBMSCs-EV组和hBMSCs组,每组重复6次,将三组细胞制成微粒模拟三维培养模式,分别加入浓度为400 ng/mL的重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)作用14d后,检测甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原mRNA,利用MPS60病理图象分析系统采集图像,并进行灰度分析,半定量比较基质表达量.结果 灰度值:hBMSCs-BIG-3组为684 481 822,hBMSCs-EV组为439 101 780,hBMSCs组为441 082 183,hBMSCs-BIG-3组灰度值明显高于后两组(P＜0.05),hBMSCs-EV组和hBMSCs组之间差异无显著性意义(P=0.862).结论 BIG-3基因有助于hBMSCs向软骨细胞诱导分化.
关键词： BIG-3基因 人骨髓基质干细胞 软骨诱导 重组人骨形态发生蛋白-2 -
辛伐他汀对人骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程的影响
目的:观察辛伐他汀(SIM)对体外人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向成骨分化的影响,探讨其刺激成骨的作用机制.方法:取健康成人骨髓进行体外成骨诱导培养,实验分为对照组(G1):不给予药物干预;实验组(G2):传代后加入SIM1×10~(-7)mol/L.于传代后7,14,21 d采用Real time RT-PCR检测mRNA水平和BMP-2,Smadl,B-catenin,Frizzled2的表达,并用免疫组织化学检测蛋白水平p-catenin的表达.传代后7 d行细胞碱性磷酸酶(ALP)染色和比活性检测;传代后21 d行yon Kossa染色,检测细胞外基质矿化.结果:SIM作用后7,14,21 d 3个不同时间点,BMP-2表达均显著高于对照组;Smadl在成骨诱导14,21 d时表达高于G1,其余组间差异均不显著;β-catenin免疫组织化学染色2组差异不显著;G2组ALP表达和矿化能力均显著高于G1组.结论:SIM 1×10~(-7)mol/L可促进体外成骨诱导培养的hBMSCs向成骨细胞分化,上调TGF-β/BMPs信号通路部分信号分子表达,但未能显著改变Wnt/β-catenin信号通路部分相关因子的表达.
关键词： 辛伐他汀 人骨髓基质干细胞 成骨细胞 BMP-2 实时定量聚合酶链反应
