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蛋白激酶B抑制剂哌立福辛对卵巢透明细胞癌ES2细胞系的杀伤作用
目的 探讨蛋白激酶B抑制剂哌立福辛对卵巢透明细胞癌ES2细胞系的杀伤作用.方法 体外培养人卵巢透明细胞癌ES2细胞,以不同药物浓度(0、7、9、11、13和15 μmol/L)哌立福辛处理细胞24 h,用细胞计数试剂盒CCK-8检测细胞的存活率;DAPI染色观察细胞核的形态;用annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞的凋亡;实时荧光定量PCR法检测Ki-67和MCM2 mRNA表达.结果 哌立福辛能够降低细胞存活率(P＜0.05),在一定程度上呈浓度依懒性;哌立福辛作用于细胞后,荧光显微镜下可见大量的核碎裂及凋亡小体;随着哌立福辛浓度的增加,细胞的凋亡率增加(P＜0.01);药物作用48 h后,Ki-67和MCM2 mRNA表达水平明显降低(P＜0.01).结论 哌立福辛对人卵巢透明细胞癌ES2细胞有明显的杀伤作用,并且可以负性调节Ki-67和MCM2 mRNA的表达.
关键词： 卵巢透明细胞癌ES2细胞系 哌立福辛 Ki-67 mcm2 细胞凋亡 -
哌立福辛抑制胃癌细胞SGC7901增殖及其作用机制
目的:探讨哌立福辛对体外培养的人胃癌SGC7901细胞生长增殖的影响并探讨其机制.方法:分别用不同浓度的哌立福辛(0.125、0.250、0.500、0.750、1.500μmol/L)对SGC7901细胞进行干预后,采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞增殖变化；平板克隆实验检测细胞克隆形成能力；Real-time PCR、Western blot法检测癌症相关基因eIF4E及AEG-1 mRNA及蛋白表达.结果:哌立福辛呈时间及浓度依赖性抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,并降低细胞的克隆形成能力；细胞内AKT信号通路中AEG-1、eIF4E的表达明显降低.结论:哌立福辛具有抑制胃癌SGC7901细胞增殖的作用；通过降低AKT信号通路中AEG-1和eIF4E的mRNA及蛋白表达可能是发挥增殖抑制作用的机制之一.
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哌立福辛通过激活GSK3β抑制雷帕霉素耐药细胞的生长
目的:研究哌立福辛对雷帕霉素耐药的非小细胞肺癌细胞株生长的抑制作用和机制.方法:用SRB法检测哌立福辛单用以及联用LiCl对细胞株生长的抑制作用.用Western blotting法检测哌立福辛对细胞内Akt,GSK3β信号的调控作用.结果:哌立福辛对雷帕霉素敏感和耐药细胞株的生长有相似的抑制作用.在耐药细胞上,哌立福辛未明显抑制Akt的磷酸化,却可以显著抑制GSK3B的磷酸化,从而激活GSK3β.用LiCl抑制GSK3β的活性可以阻断哌立福辛对耐药细胞生长的抑制作用.结论:哌立福辛可以通过激活GSK3β抑制雷帕霉素耐药的非小细胞肺癌细胞的生长.
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PI3K/Akt通路与肝癌对索拉非尼获得性耐药机制的实验研究
目的:探讨PI3K/Akt通路与肝癌对索拉非尼获得性耐药机制的关系.方法:采用浓度梯度递增法建立肝癌细胞系HepG2和Huh7耐药细胞株HepG2-SR和Huh7-SR,并采用CCK-8法检测细胞活力,验证细胞耐药特性.Western blot检测p-Akt、Akt和β-actin蛋白表达水平.以哌立福辛抑制p-Akt,采用CCK-8法检测细胞活力,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡,探讨哌立福辛与索拉非尼的协同作用及对耐药的逆转作用.结果:索拉非尼对Huh7及HepG2细胞抑制细胞活力的作用明显强于Huh7-SR、HepG2-SR细胞(P＜0.05).耐药细胞株中Akt磷酸化蛋白p-Akt的表达水平明显高于亲本细胞株(P＜0.05),而Akt表达在耐药株与亲本细胞株中无明显差异(P＞0.05).哌立福辛可协同索拉非尼抑制Huh7-SR、HepG2-SR细胞活力,促进凋亡.结论:索拉非尼持续作用导致PI3K/Akt通路的激活导致肝癌对索拉非尼获得性耐药,其机制是通过调节发生在翻译后水平的Akt磷酸化而非Akt转录或翻译.抑制Akt可逆转肝癌对索拉非尼耐药.
关键词： 肝肿瘤 索拉非尼 哌立福辛 PI3K/Akt通路 耐药 -
哌立福辛联合顺铂对卵巢透明细胞癌ES2细胞系凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响
目的：：探讨哌立福辛( perifosine )与顺铂( cisplatin )联合对人卵巢透明细胞癌ES2细胞系凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响。方法：以不同浓度(0、2、4、6、8和10μmol/L)哌立福辛作用于人卵巢透明细胞癌ES2细胞系48h。 CCK-8法检测细胞增殖抑制情况。以哌立福辛小有作用剂量与不同浓度(0、10、40、70和100μmol/L)顺铂联合处理细胞48h,以金氏公式筛选出协同抑制作用明显的联合剂量,以该联合剂量处理ES2细胞48h后,DAPI染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡情况；用Giemsa染色检测细胞有丝分裂指数；Western blot法检测细胞中Caspase-3(cleaved)及PARP(cleaved)蛋白的表达情况。结果：CCK-8法检测提示,哌立福辛作用48 h时对ES2细胞的小作用剂量为4μmol/L。金氏公式计算结果提示,4μmol/L哌立福辛+40μmol/L顺铂联合用药协同抑制细胞增殖作用强(q=1.21)；与哌立福辛或顺铂单独作用相比,DAPI染色发现联合用药组镜下可见大量的核碎裂及凋亡小体；流式细胞仪检测发现,联合用药能协同增加细胞凋亡率(q=1.32,P<0.01)。 Giemsa染色结果显示,联合用药能协同抑制细胞有丝分裂(P<0.01)。 Western blot检测发现,联合用药能明显增加细胞中Caspase-3(cleaved)蛋白的表达,降低PARP( cleaved)蛋白的表达。结论：哌立福辛与顺铂联合能协同通过增加Caspase-3( cleaved )蛋白表达及降低PARP ( cleaved )蛋白表达,促进人卵巢透明细胞癌ES2细胞发生凋亡。
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哌立福辛通过下调M2型丙酮酸激酶抑制胃癌细胞MGC803增殖
目的 探讨哌立福辛对人胃癌MGC803细胞增殖的影响及作用机制.方法 不同浓度哌立福辛(0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μmol/L)处理胃癌MGC803细胞,磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞增殖活性；平板克隆实验检测胃癌MGC803细胞克隆形成率；Western blot法检测胃癌MGC803细胞中M2型丙酮酸激酶(pKM2)蛋白表达水平.结果 与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,PKM2在胃癌细胞株中高表达；转染胃癌MGC803细胞PKM2小干扰RNA(siRNA,100 nmol/L)5d后,PKM2 siRNA转染组细胞集落形成数为(21.00±1.34)个,与空白对照组[(75.00 ±2.13)个]和阴性对照组[(63.00±1.47)个]比较,集落形成数明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05)；哌立福辛明显抑制胃癌MGC803细胞存活率并且与转染PKM2 siRNA联合作用后明显抑制MGC803细胞的增殖(P＜0.01)；哌立福辛作用胃癌MGC803细胞后PKM2的蛋白表达明显下降(P＜0.05),且具有时间及剂量依赖性.结论 哌立福辛通过下调PKM2表达抑制人胃癌MGC803细胞增殖.
