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无线粒体DNA的人食管癌细胞系的建立
为了研究线粒体疾病呼吸链功能缺陷的分子遗传机制,我们用人食管癌细胞系制备无线粒体DNA的细胞系.在细胞培养液中加溴化乙啶50ng/mL、尿嘧啶50μg/mL、丙酮酸100μg/mL,进行连续传代培养.Southern杂交及PCR结果均显示:线粒体DNA进行性减少,呼吸控制率渐降低,到溴化乙啶处理第12天时消失,细胞生长呈营养缺陷型,成为无线粒体DNA的细胞系.
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共聚焦定量分析WAF1-S基因表达对人食管癌细胞系EC109生长的作用
目的:探讨抑癌基因WAF1-S基因在食管癌细胞中的表达以及对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌发病机制的研究提供一种新的思路,为食管癌基因治疗提供理论基础.方法:采用亚克隆技术,将野生型WAF1-S基因全长,通过双粘端克隆入真核表达载体pcDNA3中,用lipofectamine2000介导的方法转染EC109细胞(人食管癌细胞系).通过打点杂交观察WAF1-S基因mRNA在细胞中的表达,用Western blot及激光共聚焦方法定量分析WAF1-S基因的蛋白表达产物,MTF及流式细胞仪检测EC109的生长状态,分析WAF1基因对食管癌细胞株生长的影响.结果:用内切酶酶切分析证实外源野生型WAF1-S基因克隆入真核表达载体中,经打点杂交证实外源野生型WAF1-S基因可以在EC109细胞中表达,通过激光共聚焦分析证实,转染后的食管癌细胞EC109中WAF1-S的蛋白的表达明显高于对照组(32±15vs11±7,P＜0.05),对细胞进行周期分析表明,处于F0～G1期细胞为0.47～0.65.结论:通过转染外源野生型WAF1基因可提高WAF1基因表达,增加食管癌细胞中P21蛋白的表达量,从而提高WAF1基因表达,抑制细胞的生长.
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60Coγ射线诱导食管癌细胞凋亡的研究
笔者在本实验中用不同剂量60Co γ射线照射人食管癌细胞系Eca-109,研究照射前后癌细胞的凋亡率的变化和检测凋亡相关基因p53、bcl-2和bax的表达,探讨放射诱导食管癌细胞凋亡的分子机理.
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6MV-X线对人食管癌细胞系EC-9706Bcl-2基因表达的影响
目的：研究X线对人食管癌细胞系EC-9706 B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因表达的影响。方法采用RT-PCR法测人食管癌细胞系EC-9706经0、4、6 Gy的X线照射后1、6、24 h Bcl-2基因表达的变化。结果 X线照射可以显著降低人食管癌细胞株EC-9706Bcl-2基因的表达。结论 X线照射人食管癌细胞系EC-9706细胞后Bcl-2基因的表达在0~6 Gy无剂量依赖性，在不同的时间点上Bcl-2的表达稳定。
