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三氮唑席夫碱衍生物诱导SMMC-7721细胞分化为多倍体巨细胞
目的 探讨三氮唑席夫碱衍生物(LH-37)诱导SMMC-7721细胞形成多倍体巨细胞的作用.方法SMMC-7721细胞以1×104/ml的浓度接种于含1 X 10-5mol/L LH-37的培养液内72h,流式细胞术分析DNA含量,Hcechst33258和碘化丙啶双染观察细胞死亡,免疫荧光检查微管和核纤层构造,透射电镜观察巨细胞超微结构.结果 LH-37作用SMMC-7721细胞72h,巨细胞明显增加,单核巨细胞和多核巨细胞分别为12.32%和0.92%.可见多核巨细胞子核放射状排列,微管增厚并包裹子核,形成单一的微管组织中心,放射状排列的子核被完整的核纤层分割包绕,大部分多核巨细胞凋亡.单核巨细胞的微管常围绕核膜凝集,同时向细胞膜方向放射状分布,可见异常的有丝分裂和凝集的染色质,电镜下可见一些单核巨细胞凋亡时伴有自吞噬特征.结论 LH-37通过干扰微管动力学,导致多倍体巨细胞增加和延迟性细胞死亡.
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三氮唑席夫碱衍生物诱导SMMC-7721细胞自相残
目的 分析三氮唑席夫碱衍生物(LH-37)诱导人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)自相残的形态特征.方法 1×10~4/ml个SMMC-7721细胞,培养在含1×10~(-5) mol/L LH-37的培养液内24h、48h,巴氏、瑞氏染色分析细胞结构,免疫细胞化学方法 观察激活型Caspase阳性细胞,透射电镜观察自相残细胞超微结构. 结果 常规显微镜下可见自相残的细胞表现为一个细胞被另一个细胞完全包裹,一些被邻近大细胞内在化的细胞由较大的囊泡包裹.LH-37作用SMMC-7721细胞48h,自相残细胞达5.23%,对照组为0.47%,大部分被包裹的小细胞表现为激活型Caspase-3阳性.LH-37作用24h,透射电镜下可见被大细胞包裹的小细胞呈现活细胞特征,至48h,被包裹的小细胞降解甚至只剩下残片. 结论 LH-37能够诱导人肝癌细胞自相残.
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三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响
目的 探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用.方法 用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb) mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD) 和过氧化氢酶( CAT) 活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数.结果 LH-37在10 μmol·L-1～1 mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P＜0.05或P＜0.01),10 μmol·L-1和1.0 μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100 μmol·L-1作用48 h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关.
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三氮唑席夫碱衍生物诱导SMMC-7721细胞凋亡和裂亡
目的:研究三氮唑席夫碱衍生物体外诱导肝癌细胞凋亡和裂亡作用.方法:以不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与SMMC-7721细胞共同培养,以MTT法测定细胞增殖,流式细胞术和荧光显微镜检测凋亡和细胞裂亡,免疫荧光观察微管骨架改变. 结果:LH-37体外抑制肝癌细胞生长,抑制率呈浓度依赖性,药物作用48 h IC50为2.0×10-4 mol/L,不同的药物浓度诱导细胞凋亡情况有差别,1.0×10-4 mol/L凋亡细胞明显增加,微管高度聚合,1.0×10-5 mol/L组凋亡较少,药物作用72 h,多倍体细胞明显增加,可见染色体异常凝集、异常有丝分裂、细胞核呈微核或碎核、微管明显聚合. 结论:三氮唑席夫碱衍生物通过破坏微管诱导细胞凋亡、裂亡、抑制人肝癌细胞增殖.
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三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用
目的:探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用. 方法:用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与SMMC-7721细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;镜下观察细胞形态改变;采用RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白mRNA表达,金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化. 结果:LH-37在1×10-5～1×10-3 mol/L的浓度范围均能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P＜0.05或P＜0.01),细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转,1×10-5 mol/L 和1×10-6 mol/L的LH-37均可使细胞甲胎蛋白mRNA表达量明显下降,碱性磷酸酶活性明显升高. 结论:三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞具有抗增殖和促分化作用.
