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Ⅱ型囊泡单胺转运体基因过表达对多巴胺含量影响的体外研究
目的获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应. 方法从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定.重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化. 结果 RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段.原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组织化学证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组.高效液相色谱结果表明,实验组中细胞内外的多巴胺含量均升高(P<0.01),细胞外HVA、DOPAC降低(P<0.05),而胞内升高(P<0.01). 结论克隆的VMAT2 cDNA片段可在真核细胞中表达,该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗.
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18F-FDG及18F-FP-DTBZ双示踪PET/CT显像诊断帕金森病
目的 探讨18F-FDG及18F-FP-DTBZ双示踪PET/CT显像诊断帕金森病(PD)的价值.方法 对28例PD患者(PD组)和10名健康志愿者(对照组)行18F-FDG脑代谢和18F-FP-DTBZ PET/CT显像.对PD患者采用PD统一评分量表第Ⅲ部分(UPDRSⅢ)和Hoehn-Yahr(H-Y)进行临床评分.在18F-FDG PET图像上观察代谢减低脑区;在18F-FP-DTBZ PET图像上测得尾状核、壳核前部及壳核后部标准摄取值(SUV).比较PD组与对照组间的差异,并与临床评分进行相关性分析.结果 PD组中23例(23/28,82,14％)大脑皮层代谢减低,8例(8/28,28.57％)基底核代谢减低.PD组尾状核18F-FP-DTBZ SUV与对照组差异无统计学意义(P=0.118),壳核前部及后部SUV均低于对照组(P均＜0.01).PD组早期PD患者尾状核18F-FP-DTBZ SUV与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),壳核前部及后部18F-FP-DTBZ SUV均低于对照组(P均＜0.01);中晚期PD患者尾状核、壳核前部及后部18 F-FP-DTBZ SUV均低于对照组(P均＜0.05).壳核前部及后部18F-FP-DTBZ SUV均与UPDRSⅢ运动评分、H-Y分期均呈负相关(壳核前部:r=-0.463、-0.564,P=0.002、0.001;壳核后部:r=-0.412、-0.585,P=0.005、0.001).单侧肢体症状PD患者症状对侧壳核前部及后部18F-FP-DTBZ SUV较症状侧减低(P均＜0.05).结论 18F-FDG及18F-FP-DTBZ双示踪PET/CT显像可为诊断PD和评估病情提供有益信息.
