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Nogo-p4对神经干细胞分化为双极形星形胶质细胞突起长度的影响
目的 观察Nogo-p4对大鼠脊髓来源神经干细胞(NSCs)分化形成双极形星形胶质细胞突起长度的影响.方法 取4只出生24h内的Wistar大鼠,悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的NSCs,形成神经球后,以免疫荧光法鉴定NSCs.把NSCs分为A、B两组,A组加入血清,B组加入血清和Nogo-p4,分化7d后,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体标记星形胶质细胞,测量双极形星形胶质细胞突起长度.结果 NSCs分化第7天,A组和B组均可形成双极形星形胶质细胞.B组中双极形星形胶质细胞的突起长度明显短于A组.结论 Nogo-p4可以显著抑制脊髓来源NSCs分化成的双极形星形胶质细胞的突起生长.
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Nanog与CD44在胃癌细胞株MKN45球体细胞中的表达及其意义
目的：检测与干细胞相关的2种因子胚胎干细胞相关转录因子4（Nanog）和分化抗原簇44（CD44）在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法选择人胃癌细胞株MKN45，在含有表皮生长因子（EGF）及成纤维生长因子（bFGF）无血清培养液中培养，观察球体形成情况；采用免疫印迹（Western blot）、免疫荧光与实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测干细胞相关基因Nanog和CD44在球体细胞及原代贴壁细胞中的表达差异。结果胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体，球体细胞中的Nanog和CD44的mRNA相对表达量分别为2.34±0.22和1.18±0.04，明显高于贴壁细胞中的Nanog和CD44的mRNA相对表达量1.00±0.00和1.00±0.05；球体细胞中的Nanog和CD44的蛋白质相对表达量分别为0.18±0.02和0.24±0.04，明显高于贴壁细胞中的相对表达量0.07±0.02和0.18±0.01（P＜0.05）。球体细胞中Nanog主要分布在细胞核周围及细胞质中，而CD44主要在细胞膜上表达，且同一个球体细胞中的Nanog与CD44大多同时表达。结论胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下形成的球体细胞具有肿瘤干细胞的特性。Nanog/CD44共表达细胞可能是胃癌干细胞的一种表型。
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神经干细胞提取及培养方法的体会
神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同.通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的选择、培养方法、换液方法、传代时机、传代方法,终获得大量活力和稳定性均较高的神经干细胞,并将其应用于相关方面的基础研究.
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SK-N-SH神经母细胞瘤干细胞培养及鉴定
背景：神经母细胞瘤是儿童较为常见的实体瘤，儿童肿瘤受环境因素影响小，其与发育的关系紧密。而悬浮法是一种有效并可靠的获得肿瘤干细胞的方法。
目的：采用悬浮法培养人神经母细胞瘤SK-N-SH，获得具有干细胞特性的克隆球，并对其生物学特性进行鉴定。
方法：采用无血清悬浮培养的方法，获得具有克隆性增生的肿瘤球，免疫荧光鉴定克隆球细胞是否具有干细胞特性；通过荧光素酶标记SK-N-SH神经母细胞瘤，将所得克隆球与普通培养肿瘤细胞种植在裸鼠背部，活体成像监测细胞在裸鼠体内的增殖特性。
结果与结论：悬浮培养法可将SK-N-SH神经母细胞瘤培养成克隆球，将无血清培养的克隆球免疫荧光检测分子生物学标记，显示强阳性表达，将其种植于裸鼠背部皮下显示其具有较强增殖与转移的生物学特性。提示悬浮法培养的 SK-N-SH神经母细胞瘤克隆球，分子生物学标记巢蛋白 Nestin强表达，胶质原纤维酸性蛋白、特异性神经元管蛋白(Tuj-1)弱表达，具有神经干细胞的特性，在裸鼠体内具有较强的增殖性与转移侵袭性。 -
鼻咽癌细胞株CNE-2Z中肿瘤干细胞样细胞的悬浮培养与鉴定
目的 探讨鼻咽癌细胞株CNE-2Z中肿瘤干细胞样细胞的富集与鉴定方法.方法 鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞普通培养至对数生长期,不同密度细胞分别加入无血清培养液中继续培养,制备第9天无血清培养细胞爬片,CD133和CD44克隆抗体免疫组化染色,电镜观察超微结构.结果 无血清悬浮培养至第9天时,以1×l05/ml细胞密度组活细胞比率高;普通培养细胞爬片的CD133和CD44细胞强阳性率分别是2.71%和3.00%,而无血清培养细胞爬片的CD133和CD44强阳性率分别为66.7%和67.00%(P＜0.01),表现正相关(P＜0.01);扫描电镜和透射电镜观察显示,阳性细胞表现特殊的超微结构特点.结论 无血清悬浮培养法可富集鼻咽癌细胞中的肿瘤干细胞样细胞,CD133和CD44可作为其特异性表面标志物.
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成年大鼠骨骼肌干细胞的制备与新型培养方法
目的:建立高效分离和扩增成年大鼠骨骼肌干细胞的实验方法.方法:通过混合酶消化法从少量成年大鼠骨骼肌样品中分离出骨骼肌干细胞；采用悬浮培养法培养获得骨骼肌干细胞团,批量扩增骨骼肌干细胞；用qRT-PCR和免疫细胞化学染色检测干细胞标志物Nanog、Oct4和骨骼肌干细胞标志物肌源性因子5(myogenic factor 5,Myf5)、配对盒蛋白7(paired box protein 7,Pax7)的表达；成脂或成骨分化诱导培养基诱导检测骨骼肌干细胞的多功能性.结果:采用混合酶消化法可获得骨骼肌干细胞单细胞,在悬浮的培养条件下能快速克隆成骨骼肌细胞团,贴壁培养后能看到骨骼肌干细胞从细胞团中爬出来,和传统的差速贴壁方法相比悬浮培养法获得的骨骼肌干细胞纯度更高,细胞状态更好,干性因子Nanog、Oct 4和骨骼肌干细胞标志物Myf5、Pax 7的表达更高(P＜0.05)；在不同培养基的诱导下能向骨骼肌、成骨和脂肪细胞系分化.结论:悬浮培养法能获得大批量干性好、纯度高、具有多向分化潜能的骨骼肌干细胞,从而为肌肉相关疾病的细胞治疗提供优良的种子细胞.
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悬浮培养法分离人前列腺癌PC-3细胞系类干细胞的实验研究
目的：从人前列腺癌PC-3细胞系中分离鉴定前列腺癌干细胞。方法分别用含血清及无血清培养基培养前列腺癌细胞系 PC-3细胞，采用流式细胞术检测细胞中前列腺癌类干细胞的比例。结果 PC-3细胞可以在无血清培养液中生存并形成可以稳定传代的悬浮细胞球，细胞中CD44+、CD133+及 SP细胞比例均显著高于PC-3贴壁细胞的比例。结论通过无血清悬浮聚球培养可以从PC-3细胞中简便、高效地分离出前列腺癌类干细胞。
