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肿瘤疫苗Ad-hDCT抑制黑色素瘤B16细胞在C57BL/6小鼠脑内增殖
目的 观察肿瘤疫苗Ad-hDCT预防接种对移植到C57BL/6小鼠脑实质内的黑色素瘤B16细胞增殖的抑制作用.方法 40只C57BL/6小鼠随机分为2组:Ad-BHG对照组(20只)和Ad-hDCT免疫接种组(20只).借助小鼠脑立体定位仪行B16细胞脑内注射;采用大体观察、流式细胞术、石蜡切片HE染色及冷冻切片CD8及F4/80抗体免疫组织化学染色等方法观察肿瘤细胞的增殖情况.结果 Ad-hDCT肌肉注射后7d,小鼠外周血内hDCT特异性 CD8+INF-γ+T细胞数量显著增多(P＜0.01,与Ad-BHG对照组相比).脑内移植B16细胞后16d,Ad-BHG对照组小鼠全部死亡,而Ad-hDCT免疫组小鼠长期存活率达60%,且未见行为学异常.光镜观察,Ad-BHG组小鼠脑内B16细胞生长旺盛,移植后3d可见明显肿瘤细胞团,移植后7d脑实质内可见较大的瘤块;Ad-hDCT组小鼠脑内B16细胞的增殖被显著抑制,未见瘤块形成.免疫组织化学染色结果提示,Ad-hDCT组小鼠脑内移植B16细胞后可诱导大量CD8+T细胞进入肿瘤区.同时,Ad-hDCT组小鼠脑组织内活跃的小胶质细胞显著增多.结论 肿瘤疫苗Ad-hDCT能有效刺激抗原特异性细胞毒T细胞免疫反应,此类T细胞能够到达肿瘤区,发挥识别、杀伤作用,抑制黑色素瘤B16细胞在C57BL/6小鼠脑内增殖.
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hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘摄取的实验研究
目的获取人钠/碘同向转运体(hNIS)基因cDNA,研究其转导黑色素瘤细胞在体外和体内能否介导放射性碘摄取,从而探索该策略用于黑色素瘤放射性碘治疗的可能性.方法运用逆转录聚合酶链反应从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA,将其克隆至真核载体pc-DNA3中,电转化法分别将重组质粒pc-DNA3-hNIS及空质粒pc-DNA3转导黑色素瘤细胞(B16),分别建立了细胞系B16-A和B16-B.在体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取及外流情况.继而将三种细胞系接种C57小鼠行131I显像和肿瘤摄取125I动态定量测定.结果成功克隆到hNIS基因,并建立了能稳定表达hNIS的新型细胞系B16-A.B16-A细胞的摄碘能力较B16细胞高17倍,较B16-B细胞高19倍.碘的外流过程迅速,T1/2eff仅10 min.体内实验发现B16-A细胞所形成肿瘤能摄取放射性碘,腹腔注射125I后1、2、4、12、24 h肿瘤组织的%ID/g平均为12.22.10.91、8.73、1.24、0.19,125I在肿瘤组织内的生物半衰期约为6 h.B16-A细胞系所成肿瘤摄碘量与对照组相比较,P＜0.01,差别具有高度统计意义.结论hNIS基因转导黑色素瘤细胞足以介导放射性碘摄取,但有效半衰期较短,难以产生足够的治疗剂量,有必要进一步研究如何增加放射性碘的摄取量及延长碘在细胞内的滞留时间以提高其放射生物学效应.
