Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G0/G1期阻滞及其机制

目的 探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制.方法 将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Westernblotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平.结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致Go/G1期阻滞(P＜0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P ＜0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P＜0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P＜0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G0/G1期.

Notch3在胰腺导管腺癌细胞中的表达及其与患者临床特征和总体生存率的相关性

目的 探究Notch3在胰腺导管腺癌(PDCA)中的表达及其与胰腺导管腺癌患者的临床特征及总体生存率的相关性.方法 收集2008年至2015年郑州大学附属肿瘤医院手术治疗的80例PDAC患者的癌组织和癌旁组织标本.标本通过免疫组化染色评分分为两个亚组:低表达组(0～4分)和高表达组(5 ～ 12分).分析Notch3的表达与PDAC患者临床特征及预后的相关性.结果 Notch3基因的高表达与肿瘤的分化程度、转移、静脉侵犯及TNM分期相关.单因素分析显示,肿瘤分化程度、是否转移、是否静脉侵犯及TNM分期和Notch3表达与PDAC患者总体生存率相关(P＜0.05).多因素分析显示,肿瘤转移、TNM分期和Notch3高表达是影响PDAC患者总体生存率的独立危险因素.Kaplan-Meier生存曲线表明,Notch3基因高表达是导致患者生存时间缩短的一个重要危险因素.结论 Notch3高表达与PDAC进展和患者不良预后显著相关,提示Notch3可能成为评估PDAC进展和患者预后的新指标.

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病的研究进展

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(CADASIL)是一种成年发病的遗传性动脉疾病,病变基因定位于第19号染色体上的Notch3基因.迄今为止,全世界已经报道该病的400多个家系,国内陆续报道20多个家系.我们就该病的临床影像学、神经病理和分子遗传学研究进展综述如下

siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响

目的 构建Notch3基因的siRNA真核表达载体,探讨其对大鼠耳蜗前体细胞中Notch3基因表达的影响.方法 机械分离并胰酶消化新生大鼠耳蜗感觉上皮,悬浮培养基培养耳蜗前体细胞.根据Notch3基因序列设计并合成2对siRNA,插入pSilencer4.1-CMV neo载体,进行酶切及测序鉴定.采用脂质体法向大鼠耳蜗前体细胞转染重组质粒,采用Real time-PCR和Western blotting法检测重组质粒对Notch3基因的干扰效果.结果 经前体细胞标记物Abcg2染色鉴定证实原代培养的细胞球为耳蜗前体细胞.酶切及测序鉴定证实成功构建了siRNA真核表达载体pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2. Real-time PCR和Western blotting检测结果显示所构建的Notch3基因真核表达载体成功地干扰了目的基因的表达.与空白对照组比较,转染pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2的细胞Notch 3 mRNA和蛋白表达量均有明显减少,而转染空质粒的细胞与空白对照组比较无显著差异.结论 成功构建了大鼠Notch3基因的RNAi真核表达载体,该载体在大鼠耳蜗前体细胞中对Notch3基因的表达可发挥抑制作用.

二十二碳六烯酸对白介素1β诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制探究

目的：探讨二十二碳六烯酸(DHA)对白介素1β(IL-1β)诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法血管平滑肌细胞(VSMCs)培养及传代后，分为对照组、IL-1β组、DHA组、IL-1β和DHA处理组四组，其中对照组细胞加入50μL磷酸盐缓冲液(PBS)；IL-1β组细胞加入10 ng/mL IL-1β；DHA组细胞加入80μmol/L DHA；IL-1β和DHA处理组加入10 ng/mL IL-1β和80μmol/L DHA，培养48 h后，噻唑蓝(MTT)法和Transwell法检测VSMCs的增殖和迁移情况；qRT-PCR和Western blotting技术检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1、TIMP-2和Notch3的表达情况。结果 VSMCs的增殖率和迁移能力经IL-1β处理后显著增高，而IL-1β和DHA处理组显著低于IL-1β处理组(F=25.537，P=0.003)；MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达量经IL-1β处理后显著增高，而经IL-1β和DHA共处理后显著低于IL-1β组(MMP-2：F=34.286，P=0.000；TIMP-2：F=21.034，P=0.009；MMP-9：F=31.732，P=0.000；TIMP-1：F=18.213，P=0.021)；IL-1β组细胞Notch3表达量显著降低，IL-1β和DHA处理组中Notch3的表达水平则显著高于IL-1β处理组(F=39.235，P=0.000)。结论 DHA可通过Notch信号通路抑制VSMCs的增殖和迁移。

肺动脉高压相关因子研究进展

肺动脉高压以肺血管阻力升高为特征，由于小肺动脉血管平滑肌细胞增殖，肺动脉血管阻力升高，导致右心室衰竭直至死亡。肺动脉高压的发生不能以单一的病理生理理论来解释，而是涉及多种分子介质、遗传因素和平滑肌细胞、内皮细胞等多种细胞异常。近的研究表明多种因子通过不同的途径参与了肺动脉高压的发病机制，包括骨形成蛋白Ⅱ型受体、Notch3、过氧化物酶增殖体激活受体γ、PTEN等。

NOTCH3基因 rs1043996位点多态性与小动脉闭塞型卒中的相关性

目的探讨NOTCH3基因外显子区rs1043996单核苷酸多态性与中国徐州地区小动脉闭塞型卒中（ SAO）的关系。方法采用病例-对照研究的方法，选取372例SAO患者作为病例组，其中首发性SAO 207例，复发性SAO 165例；另选206例健康体检者作为对照组，采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法，检测两组NOTCH3基因rs1043996位点单核苷酸多态性。结果两组均以CT基因型为主，SAO组TT基因型（28．5％对20．4％，χ2＝4．574， P＝0．032）和TT＋CT基因型（80．6％对67．0％，χ2＝13．468，P＝0．000）以及T等位基因（54．6％对43．7％，χ2＝9．337，P＝0．002）频率均显著高于对照组。首发性SAO组、复发性SAO组和对照组之间基因型分布频率（χ2＝15．041，P＝0．005）及T等位基因分布频率（χ2＝12．392，P＝0．002）存在显著差异，其中首发性SAO组TT＋CT频率（82．1％对67．0％，χ2＝12．475，P＝0．000）和T等位基因频率（55．8％对43．7％，χ2＝12．109，P＝0．001）及复发性SAO组TT＋CT频率（78．8％对67．0％，χ2＝6．358，P＝0．012）和T等位基因频率（51．5％对43．7％，χ2＝4．526，P＝0．033）均显著高于对照组。复发性 SAO 组 TT＋CT 基因型频率（χ2＝0．655，P＝0．418）和T等位基因频率（χ2＝1．406，P＝0．236）与首发性SAO组无显著差异。多变量Logistic回归分析显示，T等位基因是SAO的独立危险因素（优势比1．545，95％可信区间1．046～2．282；P＝0．029），但与SAO复发风险无关。结论 NOTCH3基因外显子区 rs1043996位点T等位基因可能与中国徐州地区人群SAO风险增高有关，但与该地区SAO复发无关。

Notch3在鼻咽癌中的基础研究及临床意义

目的：探讨Notch3是否可以作为判断鼻咽癌复发、转移和化疗预后的分子生物学指标。方法 West-ern blot检测鼻咽癌细胞系CNE2沉默Notch3的效果，球形成实验分析沉默Notch3对癌症干细胞的影响；通过Western blot检测上皮细胞标志E-cadherin和间质细胞标志Vimentin的表达分析沉默Notch3对鼻咽癌细胞EMT的影响；检测鼻咽癌细胞上清中乳酸的浓度分析在鼻咽癌中沉默Notch3对糖酵解的影响；Western blot检测顺铂作用后Notch3的表达，判断Notch3是否可以作为鼻咽癌对化疗药物敏感的指标。结果Western blot结果显示寡核苷酸干扰序列可以明显抑制沉默鼻咽癌细胞系CNE2中Notch3的表达。通过球形成实验发现在鼻咽癌细胞系CNE2中沉默Notch3后球形结构明显增加，说明沉默Notch3后干细胞增加。通过Western blot发现鼻咽癌细胞系CNE2沉默Notch3后上皮细胞标志分子E-cadherin表达减少，间质细胞标志分子Vimentin表达升高，说明沉默促进鼻咽癌细胞EMT转化。通过检测上清液中乳酸的浓度发现鼻咽癌细胞CNE2发现沉默Notch3后乳酸浓度升高，表明糖酵解增加。 Western blot发现化疗药物顺铂作用鼻咽癌细胞系CNE2后Notch3表达减少，表明Notch3可以作为判断化疗药物有效的指标。结论在鼻咽癌细胞系CNE2中沉默Notch3后癌症干细胞增加，促进EMT转换，糖酵解增加。化疗药物顺铂作用CNE2细胞后Notch3表达减少。因此，Notch3可以作为判断鼻咽癌复发、转移和化疗预后的分子生物学指标。

NOTCH3基因测序发现一个新的致病突变CADASIL诊断的复杂性

目的 通过一个新发现的伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral au-tosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)致病基因,说明基因测序对于CADASIL诊断的必要性及CADASIL诊断的复杂性.方法 对1例疑似CADASIL患者的临床表现、实验室检查、影像学检查、家系及基因测序进行分析.临床上主要表现为反复缺血性卒中及进行性记忆力下降;实验室检查排除一些高凝疾病及血管炎;头部MRI提示皮质下白质广泛对侧性信号异常及多部位的新旧梗死病灶;家系分析患者家族成员存在偏头痛、反复卒中及记忆力下降;基因测序提示NOTCH3基因3号外显子存在一个基因突变(c.331G＞T p.Gly111Cys),而这个突变位点截止到目前并未报道过.结果 结合患者临床表现、影像学、家系及基因测序分析确诊该患者为CADASIL,通过分析CADASIL突变基因的致病机制确认该患者存在的突变基因为CADASIL一个新发现的致病突变.结论 新的CADASIL致病基因突变的发现强调了基因测序及提高对突变基因致病机制认识的重要性.

γ分泌酶抑制剂对非小细胞肺癌常用化疗药物敏感性的影响

目的 探讨γ分泌酶抑制剂(DAPT)对非小细胞肺癌常用化疗药物紫杉醇、吉西他滨化疗敏感性的影响以及可能的作用机制.方法 通过两种化疗药物分别诱导A549和H1299耐药株的产生,运用Western blot方法检测两种耐药细胞株中Notch3蛋白的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测紫杉醇和吉西他滨对两种肿瘤细胞的抑制效应,同时检测两种化疗药物联合γ分泌酶抑制剂(DAPT)后对肿瘤细胞抑制效应的影响.结果 两种耐药的细胞株中Notch3蛋白的表达均明显升高;紫杉醇和吉西他滨对两种肿瘤细胞的活性均存在不同程度的抑制作用,联合DAPT后提高了紫杉醇和吉西他滨对两种肿瘤细胞增殖的抑制作用.结论 γ 分泌酶抑制剂提高紫杉醇和吉西他滨对非小细胞肺癌的敏感性,Notch3蛋白的表达与化疗药物抵抗相关,并且通过抑制Notch3通路可能提高化疗药物的敏感性.

氟对大鼠骨组织Notch3、Jag1蛋白表达的抑制作用

[目的]观察氟中毒大鼠骨组织中Notch3、Jag1蛋白表达水平,探讨其在氟骨症发生机制中的作用. [方法]SD大鼠24只随机分为对照组、低氟组、高氟组3组,每组8只.对照组自由饮用自来水,低氟组、高氟组分别饮用含50、100 mg/L氟化钠的自来水.饲养6个月后处死大鼠.用氟离子选择电极法分别测定尿氟和骨氟,观察骨组织病理学改变,免疫组化检测成骨细胞Notch3、Jag1蛋白表达,免疫印迹法检测骨组织Notch3、Jag1蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测骨组织Notch3、Jag1 mRNA表达水平.[结果]与对照组相比较,低氟组、高氟组大鼠尿氟、骨氟水平明显增高(均P＜0.05).光镜观察染氟组大鼠出现骨硬化.高氟组大鼠骨组织Notch3蛋白水平与mRNA相对表达含量明显低于对照组(均P＜0.05);高氟组大鼠骨组织Jag1蛋白水平和mRNA相对表达含量明显低于对照组、低氟组(均P＜0.05).免疫组化法检测显示低氟组和高氟组大鼠成骨细胞Notch3、Jag1蛋白水平均明显低于对照组(均P＜0.05). [结论]过量氟抑制骨组织特别是成骨细胞Notch3、Jag1表达,使成骨作用增强,该过程可能参与氟骨症发病机制.

Notch3信号通路与卵巢癌发生发展关系的研究

Notch信号传导通路是影响细胞命运的重要通路之一，相邻细胞间通过Notch受体传递信号可以调节多种细胞的分化、增殖和凋亡，影响器官形成和形态变化。Notch信号传导的变化与肿瘤的发生发展密切相关，如脑肿瘤、乳腺癌、肝癌等。近年来研究表明，Notch异常通路介导卵巢癌的发生发展，尤其Notch3及其信号传导分子参与肿瘤的化疗耐药与复发。文章对新近有关Notch3信号通路的重要分子调控卵巢癌的发生发展进行综述。

Notch3 siRNA增强结肠癌细胞对托泊替康的化疗敏感性

目的:探讨下调Notch3表达是否可增强结肠癌SW620细胞对化疗药托泊替康(topotecan)的敏感性.方法:将Notch3 siRNA转染到SW620细胞中,Western blotting检测转染后SW620细胞中Notch3的表达水平.转染后不同时间加入托泊替康,MTT法检测SW620细胞的增殖;Hoechst 33342染色和流式细胞仪检测SW620细胞的凋亡;Caspase-3活化试剂盒检测SW620细胞中caspase-3的活化.结果:Notch3 siRNA转染可明显抑制SW620细胞中Notch3蛋白的表达;托泊替康作用于Notch3 siRNA转染组细胞的IC_(50)较对照Ctrl siRNA转染组显著降低(P<0.05);流式细胞仪检测显示沉默Notch3的表达可显著增强托泊替康诱导的结肠癌细胞凋亡(P<0.05)和caspase-3活化(P<0.05).结论:siRNA沉默Notch3的表达可增强SW620细胞对托泊替康的化疗敏感性.

Notch1、Notch3在唾液腺导管癌中的表达及意义

目的:探讨Notch1、Notch3在唾液腺导管癌的表达及意义.方法:收集2005年6月-2011年6月于中国医科大学附属口腔医院就诊的21例唾液腺导管癌患者,以免疫组化方法检测Notch1、Notch3在唾液腺导管癌中的表达,以20例腮腺多形性腺瘤和20例瘤旁正常腮腺组织作为对照.应用SPSS 13.0软件包对数据进行X2检验.结果:Notch1 、Notch3在唾液腺导管癌组织中的表达显著高于腮腺多形性腺瘤组织和正常腮腺组织,在腮腺多形性腺瘤组织中的表达显著高于正常腮腺组织,两两比较有显著差异(P＜0.05).2种蛋白的表达水平与唾液腺导管癌患者的年龄、性别、肿瘤原发部位、面神经症状、肿瘤临床分期与淋巴结是否转移之间无明显联系.结论:Notch1、Notch3可能与唾液腺导管癌的致病机制有关.

Notch2和Notch3对滋养细胞株迁移与侵袭功能的影响

目的 探讨Notch2和Notch3对BeWo及JAR人胎盘绒毛癌滋养细胞株迁移和侵袭能力的影响.方法 通过对BeWo及JAR细胞Notch2和Notch3基因的过表达及干扰,观察两种滋养细胞株迁移、侵袭生物学功能的变化.结果 在BeWo细胞中对Notch2干扰后细胞迁移能力在48 h明显减弱,而72 h的迁移能力及Notch2干扰后的细胞侵袭能力无显著变化;Notch3过表达后细胞迁移能力在48 h显著增强,而72 h则显著减弱;Notch3过表达后细胞侵袭能力在48 h、72 h均显著加强.在JAR细胞中对Notch3干扰后细胞迁移能力在48 h、72 h均明显减弱;而Notch3干扰后细胞的侵袭能力及Notch2过表达后细胞迁移能力、侵袭能力均无明显变化.结论 Notch2、Notch3影响BeWo及JAR细胞迁移、侵袭功能.

低氧条件下RNA干扰阻断Notch3通路对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的 观察低氧条件下RNA干扰阻断Notch3对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 低氧条件下(1％O2)培养人肺腺癌A549细胞,以Notch3 siRNA转染A549细胞(Notch3 siRNA组),RT-PCR和Western blotting法分别检测A549细胞内Notch3及其信号通路下游基因HES1 mRNA和蛋白表达,MTT法检测转染24、48、72 h A549细胞的细胞活力；另设阴性对照组和空白对照组.结果 Notch3 siRNA转染A549细胞后,Notch3、HES1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P＜0.05)；Notch3 siRNA转染后时间依赖性抑制A549细胞生长,Notch3 siRNA组转染48、72 h细胞活力与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧条件下Notch3 siRNA转染人肺腺癌A549细胞可有效抑制Notch3及其下游靶基因HES1的表达,并抑制A549细胞生长.

CADASIL的临床和影像学特征

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subeortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)是常见的单基因遗传性脑小血管病,以偏头痛、反复发作性皮质下缺血、进行性认知功能减退和情感障碍为主要特征.CADASIL的诊断依赖于典型的临床症状和神经影像学表现,并通过皮肤活检和基因检测确诊.近年来,在CADASIL的临床和影像学特征方面获得了一些新的认识,文章就此方面的研究进展进行了综述.

作为卒中、痴呆和偏头痛的病因,伴有皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(CADASIL)越来越受到人们的重视.Notch3基因突变是CADASIL的分子遗传学基础.目前,基因突变检测和皮肤肌肉组织活检是诊断CADASIL的主要手段.

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病 NOTCH3 基因突变的研究(附 1 家系报告)

目的 分析伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病( CADASIL)一家系罕见的NOTCH3基因突变及诊断方法. 方法 回顾性分析1例CADASIL先证者的临床资料并进行家系调查. 结果 本例先证者主要表现为脑卒中反复发作及认知障碍. 先证者及其姐姐既往均采用Sanger法对NOTCH3基因突变热区进行基因测序,未检测到基因突变;而采用高通量测序法检测后发现NOTCH3基因第20号外显子存在一杂合错义突变( c.3226C>T). 家系中现存3例患者及其子女均采用高通量测序法检测出此突变基因. 家系调查显示为常染色体显性遗传. 结论 NOTCH3基因第20号外显子的杂合错义突变( c.3226C>T)为该家系的致病因素,高通量测序法能更全面发现罕见突变基因,减少漏诊.

小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的Notch信号表达

目的:探讨Notch1、Notch3在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布.方法:制作C57 BL/6小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段(自出生后14.5、18.5 d)的冰冻组织切片,进行Notch1、Notch3免疫组织化学染色,对其分布情况进行分析.结果:Notch1在小鼠下颌第一磨牙成釉器高表达,而成釉器周围聚集的间充质则未见明显表达;Notch3在小鼠下颌第一磨牙牙胚成釉器和成釉器周围聚集的间充质细胞中均有高表达.结论:Notch1和Notch3可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化、牙囊、牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用.